提高基因转染效率方法的研究

本研究旨在提高基因转染的效率。试验使用聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）介导质粒pEGFP-N1转染NIH-3T3细胞,分为两组,分别进行一次转染和二次转染,于转染48 h后在荧光倒置显微镜下观察。结果显示,部分细胞发出绿色荧光,二次转染组发绿色荧光的细胞明显多于一次转染组,且二次转染法可以明显提高基因的转染效率。     

基因转染真核细胞的应用及3种常用非病毒转染方法的优化

随着生命科学的发展．将外源基因导入动物体内已成为一项重要的基因工程技术。为众多畜牧兽医、生物学及医学领域的研究室所采用．获得了许多有价值的研究成果。同时也引起了食品等生产领域的广泛兴趣，成为商业的热点。现就哺乳动物基因转移技术的应用及3种常用非病毒转染方法的优化作一简要的综述。     

真核表达NDV F基因重组质粒的构建及其在CEF细胞中的转染

通过PCR方法自含NDVZF基因的克隆质粒中扩增NDVF基因 ,将其与真核表达载体pcDNA3..1/V5_His_TOPO重组。经核酸内切酶酶切 ,阳性克隆鉴定准确无误 ,核酸序列测定结果与原始基因比较 ,同源性大于 99% ,启始密码和终止密码未出现变异 ,将该重组质粒命名为pcDNANDVZF。将pcDNANDVZF在脂质体作用下转染CEF细胞 ,用间接免疫荧光试验检测 ,结果证明pcDNANDVZF可在CEF细胞中大量表达F蛋白。     

转基因小鼠技术及其在肿瘤研究中的应用

本文综述了近年来出现的一些转基因新方法，诸如精子载体法、核移植法及逆转录病毒法等，并介绍了转基因小鼠技术在肿瘤研究中的一些应用。     

新城疫病毒在肿瘤治疗中的研究进展

新城疫病毒(NDV)是一种新兴的肿瘤生物治疗因子,反向遗传学操作技术的成熟使其在肿瘤治疗中的应用研究越来越深入。NDV能够通过其直接的溶瘤作用杀死肿瘤细胞,也可通过感染自体肿瘤细胞制成疫苗对患者进行主动特异性免疫治疗。但直接溶瘤效应会对患者产生一定的负面影响,自体肿瘤疫苗的免疫治疗也不能彻底杀死肿瘤细胞。目前,以NDV为复制型病毒载体的肿瘤基因治疗已成为该病毒肿瘤生物治疗的研究热点,这种基因治疗方法被认为是人类征服癌症的潜在手段。论文综述了NDV在肿瘤治疗中的研究与应用,对其溶瘤及抗肿瘤免疫学机制进行了分析,并对NDV作为载体的肿瘤基因治疗前景进行展望。     

绵羊干扰素调节因子-1基因在COS-7细胞中转染表达的研究

本研究旨在构建真核表达载体pIR ES2-EGFP-IR F1,并在COS-7细胞中过量表达。根据绵羊IRF1基因cDNA序列设计、合成引物,构建真核表达载体pIR ES2-EGFP-IR F1质粒,用电穿孔法,以表达质粒转染COS-7细胞,并用LPS刺激,用定量PCR方法检测IRF1基因的表达量是否升高。结果表明:重组质粒pIR ES2-EGFP-IR F1转染细胞后,可以观察到绿色荧光蛋白的表达,并且可以过量表达,与空白对照组相比差异极显著(P<0.01),说明通过转染的确会对细胞造成影响,排除转染试剂及未融合GFP的作用后,效果仍然明显。利用LPS刺激后,随着作用时间延长至24 h,IRF1基因的表达量较未用LPS作用的对照组有更高倍数的提高。     

RNA干扰技术及其应用研究

RNA干涉作用,是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象,是基因转录后沉默作用(PTGS)的重要机制之一.它能定向关闭生物体内某一基因,使其不发挥作用,同时不影响其他基因的功能,便于研究特定基因的功能.在后基因组时代的基因功能研究、基因治疗和药物开发中具有广阔的应用前景.     

p53基因及其在家禽肿瘤性疾病应用研究进展

抑癌基因p53作为一种转录因子,通过调控其靶基因在应激反应中启动的不同生物学过程,包括细胞凋亡、细胞周期阻滞或衰老等,发挥其在肿瘤抑制中的作用。近年人类医学对p53基因进行研究的较多,但是动物医学文献中有关p53基因的研究报道相对较少。论文就国内外对p53基因及其编码产物的结构、作用机制、应用、检测等方面的研究进展以及在禽病中的表达和应用进行综述,为家禽肿瘤性疾病的诊治提供参考。     

RFLP技术的研究进展及其在猪的抗病基因研究中的应用

传统猪的育种工作以追求较高生产性能为主要目标,但由于生产性状与抗病性状之间表现为负遗传相关,高的生产性能往往使得猪的抗病力下降,疾病的发生率大幅度提高,因此严重地威胁着养猪业的发展,而单纯依赖预防接种并不能完全控制或消灭传染病的流行。为此,开展抗病育种,用遗传学     

不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应

将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在     

p63基因及其与肿瘤的关系研究进展

p63基因是肿瘤抑制基因p53家族的成员之一,与p53基因有高度的同源性。基因结构复杂,有两个不同的启动子和多种内含子剪接方式,能编码多种亚型的蛋白质,而这些p63蛋白在不同的组织不同的发育阶段发挥着不同的生物学作用。文章就p63基因的结构、功能及其与肿瘤的关系作一综述。     

CRISPR/Cas9技术在猪、鸡中的应用研究进展

基因编辑是利用核酸酶在基因组的特定位点产生DNA双链断裂,从而触发细胞自身的DNA损伤修复机制,实现对靶基因序列进行位点特异性修饰。规律成簇间隔短回文重复序列（clustered regularly interspersed short palindromic repeat,CRISPR）及其相关蛋白9（Cas9）系统作为第3代基因编辑技术在农业和基因治疗研究中发挥着重要作用,与传统的锌指核酶和转录激活因子样效应物核酶基因编辑方法相比,它可以靶向基因的任何位点引起DNA双链断裂,实现目标基因的精准敲除或插入外源片段,并能快速、高效地修饰基因组,包括基因敲除、敲入、抑制、激活等,是应用最广泛的基因编辑工具。CRISPR/Cas9技术的出现彻底改变了生命科学、医学和遗传学研究现状。近年来,利用CRISPR/Cas9技术对动物基因组进行修饰,开启了畜禽分子育种的新纪元,不仅极大地推动了现代畜禽养殖技术的发展,而且为人类医学研究做出了特殊贡献,特别是在猪和鸡上。作者以猪和鸡为对象,综述了CRISPR/Cas9技术在异体器官移植供体、人类疾病的生物模型、抗病育种材料、全基因组高通量筛选等方面的研究进展,以及如何利用CRISPR技术快速又简单地生产出基因编辑猪、鸡,为推动CRISPR技术制备其他基因编辑动物提供参考依据。     

动物基因转移技术--逆转录病毒载体法研究进展

本文概述了逆转录病毒的发现以及国内外发展状况,逆转录病毒勒体同其它方法比较的突出优点,同时介绍了逆转录病毒的定义和生活周期,反转录过程和整合过程,重点介绍了逆转录病毒载体的构建原理。     

RNA干扰技术及其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景

RNA干扰作用(RNA interference,RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象,自发现以来便成为研究基因功能的有效手段。作者重点介绍了RNA干扰技术发现的历史过程和作用机制,阐述了其在昆虫功能基因组学方面的应用进展,展望了其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景。     

核酶在疾病基因治疗中的应用研究进展

核酶是一类具有催化活性的小RNA分子,可以特异性地识别并结合目标基因mRNA,使该mRNA断裂失活,从而阻断或降低目标基因的表达,起到基因沉默的作用。此外,核酶不会对细胞基因组产生任何副作用,因此核酶作为一种既安全又有效的分子生物学工具受到越来越多研究者的关注。核酶的这一特性可用于基因治疗,针对某些病原或肿瘤的基因设计特异性核酶,并将其导入细胞以阻断或降低这些基因在细胞内的表达,最终达到抑制病原增殖、肿瘤扩散的目的。作者就近几年核酶在人类和动物疾病治疗中的应用研究进展作一综述。     

绵羊羊水干细胞外源基因高效转染及快速筛选方法的建立

试验旨在建立绵羊羊水来源多潜能干细胞(amniotic fluid-derived stem cells,AFSC)外源基因高效转染及快速筛选方法,同时保持其多潜能特性。采用脂质体法,以pCMV-DsRed为报告质粒,转染绵羊AFSC,36 h后,流式细胞仪分析外源基因的瞬时转染效率为69.17%。以浓度为6 mg/mL的G418筛选5 h获得纯化转基因绵羊AFSC单克隆。转基因绵羊AFSC RT-PCR检测表达Oct-4、SSEA-1,体外悬浮培养可形成类胚体。结果表明,转基因标记绵羊AFSC保持了发育全能性的潜能,构建的转基因绵羊AFSC可以示踪性研究其在体内的分化路径和最终宿主。     

CREBRF基因及其功能研究进展

繁殖性状作为多基因控制的数量性状,受到多种转录调控因子、信号通路的共同调控,直接影响规模化养殖生产的经济效益,提高繁殖力已成为当今家畜遗传育种的重要目标之一。Luman/CREB3募集因子(LRF或CREBRF)是一种未折叠蛋白应答响应亮氨酸拉链转录因子,其在进化过程中保持稳定且具有保守的蛋白结构。近年来的研究发现,CREBRF基因在机体代谢、疾病治疗以及动物繁殖调控过程中发挥着重要功能。本文主要就CREBRF基因的发现与结构特征、表达规律及其与动物繁殖相关的研究进展进行综述,为深入挖掘CREBRF基因在动物机体中的生物学功能奠定基础。     

柔嫩艾美耳球虫电穿孔转染条件的优化

低转染效率一直是利用基因转染技术研究柔嫩艾美耳球虫的主要屏障。为了进一步提高现有的转染效率,本研究分别利用传统的Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪和新型的NucleofectorⅠ核转仪对柔嫩艾美耳球虫子孢子的转染条件进行了优化。通过对外源DNA浓度、电场强度、环境温度及NucleofectorⅠ核转仪的内置程序这些关键参数的探索,最终发现利用Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪设置电压为2000 V,电容25 μF,利用4 mm电击杯进行电转时,转染效率最高,达到3.8×10-4,此时最佳质粒浓度为50 μg/107子孢子。