番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究

番茄子叶下胚轴植株再生技术的研究孟祥栋张卫华马红刘文宝（山东农业大学园艺系）关键词：番茄;子叶;下胚轴;植株再生中图法分类号：Ｓ６４１．２ＳＴＵＤＹＯＮＴＥＣＨＮＩＱＵＥＯＦＰＬＡＮＴＲＥＧＥＮＥＲＡＴＩＯＮＦＲＯＭＴＯＭＡＴＯＣＯＴＹＬＥＤＯＮＡ...     

番茄子叶、下胚轴植株再生体系的建立

本研究以番茄(Lycopersicon esculentumM ill.)栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄子叶、下胚轴的离体培养,研究不同基因型以及不同激素配比对植株再生的影响。结果表明:以下胚轴为外植体时3种材料均可诱导再生植株,其中中杂9号和毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908最适宜诱导愈伤组织和芽分化的培养基为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.4 mg/L。以子叶为外植体时毛粉802和合作908均可诱导出再生植株,其中毛粉802诱导愈伤组织及芽分化的最适宜培养基为MS 6-BA1.0mg/L IAA0.2mg/L和MS 6-BA1.0mg/L IAA0.5mg/L,合作908诱导愈伤组织及芽分化的培养基为MS 6-BA0.5mg/L IBA0.5mg/L。两种外植体适宜的生根培养基均为MS IAA0.5 mg/L。     

菘蓝子叶和下胚轴组织培养再生植株的研究

以菘蓝子叶和下胚轴为外植体进行组织培养，筛选出植株再生的适宜的培养基为ＭＳ＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。对器官发生进行系统的细胞组织学观察发现：菘蓝下胚轴培养，细胞启动和不定芽的形成随下胚轴部位的不同而有所不同；不定芽发生的数量与其维管轴的发育有关，整个下胚轴分化不定芽的数量呈梯度变化。     

番茄下胚轴和子叶组织培养及植株再生的研究

以番茄幼苗的下胚轴和子叶为外植体,研究不同激素培养基对其愈伤组织、不定芽诱导及生根的影响。结果表明:以MS为基本培养基,添加NAA0.7mg·L-1,LA2711在6-BA0.7mg·L-1,Liger在6-BA1.0mg·L-1时对子叶和下培轴诱导愈伤效果最好;6-BA为2.0mg·L-1时,LA2711在IAA0.3mg·L-1,Liger在IAA0.1mg·L-1条件下分化率最高。     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄B04子叶盘和下胚轴切段为外植体,研究了不同种类和浓度的细胞分裂素(ZT、6-BA和KT)和生长素(IAAI、BA和NAA)组合及附加物AgNO3对外植体不定芽诱导的影响。结果表明,细胞分裂素ZT的不定芽诱导效果明显优于6-BA和KT,KT诱导效果最差;生长素IAA的不定芽诱导效果优于IBA和NAA;在不同的激素组合中,不定芽诱导率最高的培养基为MS 2.0 mg/L ZT 0.2 mg/L IAA。再生芽在MS 0.1mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究

【目的】探索一种利用甘蓝胞质雄性不育系(CMS)下胚轴和子叶进行快速扩繁的技术,为利用CMS大量繁制甘蓝杂交种提供一条新途径。【方法】以甘蓝CMS 05-2-10为试材,将苗龄5~7 d无菌苗的下胚轴和子叶切下,接种于MS培养基上,45~50 d后统计再生芽数,比较6-BA与NAA不同质量浓度配比对不定芽的诱导情况;将诱导出的不定芽接种于添加不同质量浓度(0,0.1,0.3,0.5 mg/L)NAA的MS生根培养基上,20 d后比较生根率和根的长势。【结果】在对下胚轴和子叶进行不定芽诱导时,MS培养基中分别添加1.0和4.0 mg/L的6-BA对下胚轴、子叶的诱导效果较好,其芽再生频率和分化系数分别为83.3%,53.0%和3.6,3.0。在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其对下胚轴不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为80.7%,分化系数为3.4,褐化率为1.5%;在MS培养基中添加4.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,其对子叶不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为50.0%,分化系数为3.2,褐化率为3.4%;二者的褐化率均明显低于仅添加6-BA的处理。在MS生根培养基中添加0.3 mg/L NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达100%,且根系生长健壮。【结论】利用甘蓝胞质雄性不育系CMS 05-2-10的下胚轴和子叶作为外植体进行不定芽的诱导,对于下胚轴,其适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂;对于子叶,其适宜培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。不定芽诱导生根的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。     

番茄下胚轴和子叶离体诱导成株的激素调控

以番茄幼苗的下胚轴和子叶为外植体,研究不同激素培养基对其不定芽诱导、增殖及生根的影响。结果表明,诱导不定芽的最适培养基为MS＋6-BA（2.0 mg/L）＋IAA（0.3 mg/L）,该培养基中下胚轴的不定芽诱导率为73.3%,子叶的不定芽诱导率为53.2%;低浓度IBA和IAA配合使用的生根效果好于单独使用IBA。     

樱桃番茄再生系统的研究

研究了“美味樱桃番茄”的再生系统 ,以子叶盘和下胚轴切段为外植体 ,分析了不同激素及其质量浓度对外植体诱芽和诱根的影响 ,以及外植体对抗生素卡那霉素的敏感性。结果表明 ,适宜的诱芽培养基为 MS+ZT 2 .0 mg/L +IAA 0 .0 5 mg/L ,生根培养基均为 MS+IAA 0 .1m g/L ;卡那霉素筛选质量浓度为 5 0 mg/L。     

油桃子叶再生植株影响因子研究

以早熟油桃华光和曙光为材料,研究了培养基(MS,G,WPM)、细胞分裂素(BA,TDZ,ZT,KT)、生长素(NAA)、子叶发育的不同时期(花后30,40,50,60d和采收期)等因子对早熟油桃子叶再生植株的影响。结果表明,华光花后60d为最佳取材时期,其子叶在MS+TDZ2mg/L+NAA0.04mg/L培养基上的再生率为75%;而曙光的最佳取样时间为采收期,其子叶在MS+BA8mg/L+NAA0.04mg/L培养基上的再生率为66.7%。子叶暗培养28d后转入光下进行光暗交替培养,华光、曙光子叶再生率均达到最高。     

野生梭梭的离体培养和植株再生

以野生梭梭带腋芽茎段为外植体进行离体再生研究,探讨不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖的质量浓度对其愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明,野生梭梭带腋芽茎段愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6.0 g/L,诱导率为100%;不定芽分化的最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO33.5 mg/L+蔗糖26 g/L+琼脂6.5 g/L,不定芽分化率为97.8%;影响野生梭梭再生的最主要因素是NAA,其次是TDZ和AgNO3,蔗糖影响最小。     

油菜子叶和下胚轴再生体系及其遗传转化的研究进展

对油菜子叶和下胚轴快繁体系及其遗传转化的研究进展进行了概述,并从基因型、激素及添加物、外植体状态、预培养和共培养、抗生素筛选等方面讨论了影响子叶和下胚轴快繁体系及其转化的因素。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。     

花椰菜下胚轴培养和高频率芽再生技术的研究

以“春秋”花椰菜为试验材料 ,研究了影响下胚轴再生的若干因子。结果表明 ,6 d苗龄的下胚轴在附加 2～ 3m g/ L 6 - BA和 1.0 m g/ L NAA的 MS培养基上培养 ,芽分化率最高 ,达 93.33% ,平均每个外植体产芽5 .71个 ;Ag NO3对下胚轴的细胞生长有明显的促进作用 ;下胚轴的下端比上端产芽早 ,并且较易产生不定芽。     

枣子叶再生植株研究

以枣树‘雄性不育3号’未成熟胚的子叶为材料,建立了枣子叶再生植株体系。子叶愈伤诱导培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.3 g/L,愈伤诱导率达到40%。从愈伤组织诱导不定芽的培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.3 g/L+TDZ 1.5 mg/L,不定芽发生率为88.9%,不定芽数量与愈伤数量之比为3.5。生根培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂3.0 g/L+IBA 1.0 mg/L,生根率达到33.3%。此外,培养温度显著影响玻璃化苗的生长。在24℃条件下培养30 d,仅有9.7%的玻璃化苗向正常植株转化,而在20℃培养条件下的玻璃化率仅为6.7%。附加30~80 g/L蔗糖的不同培养基上,玻璃化苗向正常苗转化情况无显著差异。     

宁夏水稻高效再生体系的建立

【目的】建立宁夏水稻高效转化再生系统,为利用基因工程技术定向改良宁夏水稻品种奠定基础。【方法】以8个宁夏主栽水稻品种成熟胚为外植体,利用组织培养法,研究了基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对外植体培养及再生的影响。【结果】在愈伤组织诱导培养基中添加ABA 2 mg/L及在分化培养基中添加6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L,对愈伤组织诱导、分化及出苗有显著的促进作用;在此优化条件下,秋田小町再生情况最好,其诱导率和出苗率分别达100.00%和300%;优育27号次之,分别达95.00%和286.7%。此外,初步确定转化时Cef的质量浓度上限为500 mg/L。【结论】明确了外源激素、基因型及Cef对宁夏水稻成熟胚离体培养的影响效果,初步建立了宁夏水稻高效转化再生系统。     

油桃下胚轴再生植株影响因素的研究

为了建立一个稳定的桃再生体系,以晚熟油桃秦光2号为试验材料,对影响其种胚萌发及下胚轴再生的不同激素质量浓度与组合、培养基、预培养时间、低温处理等因素进行了研究。结果表明,种皮对种胚萌发有抑制作用,在种胚培养中应剥去种皮培养;低温处理可以明显提高胚培养的萌发率,胚培养种胚以5℃低温处理70 d萌发率最高,达到93.33%,且经过7 d常温光培养所得下胚轴健壮、幼嫩,更适宜做下胚轴再生的外植体,诱导率达到34.38%,在蔗糖质量浓度为30 g/L时萌发率最高,达到75.66%,用1600 mg/L GA浸泡24 h,诱导率达到62.3%;下胚轴能够再生植株,形态学上部再生率为34.67%,下部为18.67%,二者差异显著,下胚轴再生以QL+TDZ 2.0mg/L+NAA 0.5 mg/L效果最好,再生率达到38.67%,平均再生不定芽数为2.50个,晚熟油桃秦光2号下胚轴可以直接从未产生愈伤组织的切口部位产生不定芽。