转录因子及生脂酶对生脂的影响

脂肪形成包括脂肪细胞数目增加和体积增大两个方面,涉及前体脂肪细胞增殖和分化为成熟脂肪细胞以及甘油三酯的合成。脂肪生成是动态和可塑性的,是在各种激素及营养因子交互调节错综复杂的基因表达下,改变相应的转录因子活性的过程。因此,研究脂肪形成的机理,对控制疾病及动物体脂脂肪形成具有重要意义。作者主要对影响生脂过程中有关的转录因子LXRs、ChREBP和SREBP-1c对生脂的调控,及生脂酶FAS和ACC1基因表达对生脂的影响进行探讨,以期对生脂调控有所窥视。     

葛根素对延黄牛原代脂肪细胞分化的影响

为探究葛根素对牛前体脂肪细胞分化的调控作用,在脂肪形成过程中将葛根素加入到培养基中,观察其对成脂分化的影响。分别采用油红O染色法及甘油三酯酶法检测脂肪细胞分化过程中的脂滴积聚及细胞内的甘油三酯含量;采用qRT-PCR和Western blot技术检测成脂分化过程中脂肪形成相关转录因子CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的mRNA和蛋白的表达水平。结果表明:低浓度的葛根素能促进脂肪细胞的分化,增加细胞内的甘油三酯含量,促进成脂标志基因的mRNA及蛋白的表达。葛根素的添加可促进脂肪分化,增加脂肪沉积,这为进一步研究延黄牛脂肪沉积作用机制以及改善牛肉品质奠定基础。     

ChREBP基因siRNA表达质粒构建及对原代 培养猪脂肪细胞生脂的影响

【目的】构建ChREBP基因siRNA表达质粒,干扰ChREBP在原代培养猪脂肪细胞的表达,研究其在葡萄糖诱导脂肪细胞生脂中的作用。【方法】合成4对靶向ChREBP基因的siRNA寡核苷酸,分别连接于pcDNA™6.2-GW/EmGFP载体构建siRNA表达质粒,测序验证后,采用脂质体介导法转染从3日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养的脂肪细胞,荧光定量RT-PCR检测ChREBP基因沉默效率;以葡萄糖浓度为0—20 mmol·L-1的培养液培养转染细胞48 h,测定生脂及生脂基因表达变化。【结果】筛选出了1个转染效果好、ChREBP基因沉默效率达85%的siRNA表达质粒,转染原代培养猪脂肪细胞后,细胞生脂水平及生脂基因ACC1和FAS mRNA表达比阴性对照表达质粒转染细胞和未转染细胞显著降低（P＜0.05）,且生脂水平不受葡萄糖水平的影响（P＞0.05）。【结论】构建的siRNA表达质粒能有效干扰猪脂肪细胞ChREBP表达,葡萄糖通过转录因子ChREBP调控猪脂肪细胞生脂及生脂基因表达。     

DHA对小鼠脂肪组织和肝脏生脂及脂解基因转录表达的影响

【目的】探讨二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠脂肪组织和肝脏生脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白-1c基因(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶基因(FAS),及脂解相关基因激素敏感脂酶基因(HSL)和甘油三酯水解酶(TGH)时序表达的影响。【方法】用不同浓度DHA(6.25和12.5 g/kg)灌胃小鼠,分别于0,1,2,4,8,16和24 h处死,取脂肪组织和肝脏,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂及脂解基因PPARγ、SREBP-1c、FAS,及脂解相关基因HSL和TGH的时序表达规律。【结果】脂肪组织中DHA均可促进PPARγ、FAS、HSL和TGH基因的转录表达,8 h达到峰值,其后表达量下降;抑制SREBP-1c基因的表达,8 h达到最低,之后上升。肝脏中DHA均可抑制PPARγ、SREBP-1c、FAS和HSL基因的转录表达,且表达量分别于8,8,8和16 h达到最低,之后表达量上升;DHA对TGH的作用不显著(P>0.05)。【结论】DHA通过促进脂肪组织中脂肪分解及抑制肝脏中脂肪合成与分解来调节动物体脂沉积。     

Chemerin调控牛肌内成熟脂肪细胞脂解的作用机制

[目的]本试验旨在分析脂肪自分泌因子Chemerin在牛肌内成熟脂肪细胞脂解中的作用及调控机制。[方法]体外培养牛肌内成熟脂肪细胞,采用油红O染色与抽提法检测成熟脂肪细胞脂解过程中脂肪含量变化,通过比色法测定细胞中甘油及游离脂肪酸的释放量;采用RT-q PCR及Western blot技术分析脂解关键基因PPARα、LPL与HSL mRNA及蛋白的表达情况。[结果]在牛肌内成熟脂肪细胞脂解过程中,细胞中Chemerin及其受体CMKLR1 mRNA表达量显著降低(P0.05);Chemerin处理牛肌内成熟脂肪细胞后,细胞内脂肪含量减少,成熟脂肪细胞快速脂解为去分化的前体脂肪细胞,细胞中甘油和游离脂肪酸的释放量增加。脂解关键基因PPARα、LPL与HSL mRNA及蛋白表达水平与对照组相比极显著升高(P0.01)。[结论]Chemerin通过上调脂肪细胞脂解关键基因表达,促进了牛肌内成熟脂肪细胞中脂肪的分解,进而可降低肌内脂肪含量。     

激活HH信号通路抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化

为探讨HH信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制,以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为材料,应用油红O染色法检测ADSCs成脂分化过程中的形态变化;采用荧光定量PCR及Western Blot的方法检测HH通路Gli1及脂肪细胞分化转录因子的时序表达。通过嘌呤衍生物2,6,9-三元取代嘌呤(Purmorphamine,PM)激活猪ADSCs细胞中HH信号通路,探讨体外激活HH信号通路对猪ADSCs向脂肪细胞分化的作用及其机制。结果显示,在成脂诱导分化的过程中,经5μmol/mL的PM持续处理,细胞中Gli1的mRNA及蛋白表达量增加;猪ADSCs向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低;脂肪细胞分化关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制。以上结果表明,激活HH信号通路可通过下调PPARγ和C/EBPα的表达抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化。     

脂肪细胞分化的调控因子*

 脂肪细胞分化是一个复杂的生理生化过程,在此过程中受到多种因素的调控,其中转录调控因子、分化诱导因子及分化抑制因子在脂肪细胞分化过程中起着重要作用。本文就近年来关于脂肪细胞分化调控因子的最新研究进展进行综述。     

ADD1和脂肪分化相关基因的关系及其营养调控

脂肪细胞定向和分化因子1(ADD1)是脂肪细胞分化的一种重要核转录因子,与脂肪分化相关基因共同调控脂肪代谢相关酶基因的表达,并可作为动物肉质性状的候选基因。综述了ADD1基因的结构和功能、ADD1与脂肪分化相关基因的关系及营养对ADD1基因表达的调控作用。     

猪ADSCs的成脂分化及HH通路关键基因 和脂肪转录因子的时序表达

为了探讨HH信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制,以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为材料,经成脂诱导后,利用油红O染色观察脂肪细胞的形态变化,并检测诱导分化不同时期HH信号通路关键基因Smo、Ptc1、Gli1、Gli2以及成脂关键转录因子C/EBPα、PPARγ的表达情况。结果显示,在ADSCs细胞成脂分化过程中,脂肪细胞的数量逐渐增加,脂滴变大;Smo、Gli1、Gli2基因从第4天开始随诱导天数的增加表达量逐渐降低,而Ptc1的变化趋势与之相反;且C/EBPα、PPARγ的表达从第4天开始逐渐增加。结果表明,ADSCs细胞成脂诱导第4天HH信号通路的活性被全面启动,且随诱导天数的增加其活性逐渐降低。     

动物脂肪组织相关调节转录因子SREBP-1c、PPARγ、LXRα和UCP1的研究进展

动物脂肪组织的生长包括脂肪细胞的分化和脂肪细胞体积的增大两部分。在脂肪合成和代谢路径中,脂肪分化因子和转录调控因子起到重要作用,本文主要对脂肪组织中调控脂肪生成关键基因表达的转录因子固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c),过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ),肝脏X受体(LXRα)和脂类代谢调控基因解偶联蛋白1 (UCP1)的生理功能进行综述。     

高脂饲喂对肉鸡腹脂和肝脏组织RNA 可变剪接的影响

【目的】腹脂过度沉积会降低肉鸡抗病力和屠宰率。RNA可变剪接是影响基因功能的重要调控方式,对肉鸡腹脂沉积过程的RNA可变剪接事件进行系统分析,有助于进一步了解肉鸡腹脂沉积的分子调控机理。【方法】利用高脂饲喂肉鸡和普通饲喂肉鸡肝脏组织和腹脂组织的转录组测序结果,鉴定高脂饲喂过程中肉鸡腹脂和肝脏组织的差异表达和差异剪接基因。采用GO功能注释、KEGG通路富集分析和Metascape富集分析对显著差异剪接基因进行分析,并对显著差异剪接事件进行可视化处理,以及分析调控这些差异剪接事件的剪接因子。【结果】对高脂饲喂肉鸡与普通饲喂肉鸡的腹脂和肝脏组织进行转录组测序,在腹脂组织中发现233个显著差异表达基因和349个显著差异剪接基因,对显著差异剪接基因进行富集分析,发现显著差异剪接基因主要富集于细胞分裂、细胞生长等细胞增殖相关生物学进程,还富集于甘油磷脂代谢和胰岛素信号通路等脂肪生成相关通路。在肝脏组织中发现276个显著差异表达基因和224个显著差异剪接基因,对显著差异剪接基因进行富集分析,发现显著差异剪接基因主要富集于蛋白质乙酰化、蛋白质内部氨基酸乙酰化和m RNA加工等细胞代谢相关生物进程,还富...     

脂联素基因功能的研究进展及其应用

脂联素是20世纪90年代中期发现的一种脂肪细胞分泌的激素蛋白,且是迄今为止所发现的惟一与肥胖呈负相关的脂肪细胞因子。脂联素在不同的组织中与不同的受体结合,发挥其特定的生物学功能,如调节能量代谢,抵抗炎症,影响胎儿生长发育和缓解氧化应激等功能。对脂联素的结构特点、生物学功能及其在动物上的应用进行了综述。     

Vc对Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因表达的影响

为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。     

王宁教授主持的国家自然基金面上项目通过验收

王宁教授主持的国家自然基金面上项目《鸡脂肪细胞分化负调控转录因子的高通量分离与功能验证》,主要内容是无菌采取10日龄肉仔鸡腹部脂肪组织,胶原酶消化法培养鸡前脂肪细胞,油酸诱导分化。采用高通量基因表达谱芯片技术检测鸡前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化过程中基因表达谱的变化,并利用生物信息学分析检测结果,从而分离筛选出鸡脂肪细胞分化的负调控转录因子,最后应用基因过表达（Gene overexpression）和RNA干扰技术（RNA interference）对分离筛选的鸡脂肪细胞分化的负调控转录因子进行功能验证。     

谷氨酰胺和天冬胺酰胺对肉鸡部分脂肪性状及生脂基因mRNA表达水平的影响

 【目的】选用320只1日龄AA肉公鸡,研究谷胺酰胺和天冬胺酰胺对肉鸡部分脂肪性状、血脂指标及相关生脂基因mRNA表达水平的影响,研究2种氨基酸对肉鸡脂代谢的影响机制。【方法】采用双因子完全随机设计,将试验鸡按体重随机分为4个处理组,分别在玉米-豆粕型基础饲粮中添加1%的谷氨酰胺和天冬胺酰胺,试验期为42 d。屠宰后测腹脂率,游标卡尺测皮下脂肪和肌间脂肪厚度,比色法测定血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白固醇（HDL-C）,RT-PCR技术检测肝脏、腹脂组织中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、肉毒碱棕榈酰基转移酶Ⅰ（CPT-1）、脂蛋白酯酶（LPL）、肉毒碱棕榈酰基转移酶α（PPARα）mRNA水平的变化。【结果】饲粮中混合添加谷氨酰胺和天冬胺酰胺可显著提高肉鸡增重（P＜0.05）,对料肉比无显著影响（P＞0.05）,显著提高肌间脂肪宽和皮下脂肪厚（P＜0.05）,对腹脂率和全净膛率无显著影响（P＞0.05）;谷氨酰胺组和天冬胺酰胺组可显著降低腹脂率（P＜0.05）,显著增加皮下脂肪厚和肌间脂肪宽（P＜0.05）;添加谷氨酰胺和天冬胺酰胺后可显著降低血液TG含量（P＜0.05）,提高血液TC含量和降低HDL-C水平,影响血脂代谢。3个试验组肝脏中ACC、FAS、CPT-1、PPARα基因转录表达显著降低（P＜0.05）;谷氨酰胺组LPL 基因表达显著增加（P＜0.05）。3个试验组脂肪组织PPARα转录表达显著增加（P＜0.05）,谷氨酰胺组和天冬胺酰胺组脂肪组织ACC转录表达显著降低（P＜0.05）,混合组脂肪组织FAS、LPL基因转录显著降低（P＜0.05）,而CPT-1转录则表达显著增加（P＜0.05）。【结论】饲粮中添加谷胺酰胺和天冬胺酰胺可提高肉鸡生产性能,在一定程度上减少腹脂沉积,改善胴体性状。     

脂联素基因及其对猪脂肪沉积的影响研究进展

脂联素具有调控生物体的能量稳态、葡萄糖代谢和脂肪代谢等功能,是至今发现的唯一与肥胖呈负相关的脂肪细胞特异性蛋白。介绍了脂联素的基因结构、分子结构及生物学功能,综述了脂联素基因对猪脂肪沉积的影响研究进展。     

脂联素对能量代谢调控的研究进展

脂联素是脂肪细胞分泌的一种细胞因子,其主要功能是敏化胰岛素作用、调控机体的能量代谢、促进血管生长等。文章综述了脂联素的结构和分布、对能量代谢的调控及机制以及能量代谢对脂联素分泌的影响。     

油酸诱导斑马鱼肝脏细胞脂滴形成与降解模型的建立

为建立斑马鱼肝脏细胞脂滴形成与降解模型,采用不同浓度油酸孵育肝细胞,通过Alarmablue法及流式细胞术检测油酸对肝细胞存活率、凋亡率的影响,确定最佳油酸浓度,随后用该浓度油酸处理肝细胞72 h,72 h后去除培养基中油酸继续培养观察。采用油红染色法确定脂质蓄积情况,BODIPY/HOECHST染色法观察不同大小脂滴蓄积率,实时定量PCR检测脂滴相关蛋白的转录调控。结果显示,100 μmol/L油酸为最佳浓度;与0 h相比,处理6 h小脂滴蓄积率达最大值,48 h大脂滴蓄积率达最大值,72 h超大脂滴蓄积率达最大值;相较于0 h,100 μmol/L油酸孵育6~72 h,二酰甘油转移酶基因DGAT2 mRNA水平显著升高;去除油酸24 h,脂肪细胞分化蛋白ADRP的mRNA水平显著上调;油酸孵育6 h,脂肪积累诱导跨膜蛋白基因FIT1 mRNA表达水平显著上升;油酸孵育6~72 h以及去除油酸24 h CIDE蛋白家族成员CIDEb mRNA表达均显著升高。由研究可知,油酸诱导斑马鱼肝脏细胞建立脂滴形成与降解模型,可较好的模拟鱼类肝脏脂滴蓄积与降解过程,为研究鱼类肝脏中的脂滴蓄积和降解过程中脂滴蛋白的功能提供了模型基础。     

固醇调节元件结合蛋白-1c在肝脂肪合成中转录调节

固醇调节元件结合蛋白 -1c(SREBP -1c)是脂肪合成基因的重要转录调节因子 ,又称脂肪细胞决定和分化因子 1(AdipocyteDetermi nationandDifferentiationfactor -1,ADD1) ,它是动物肝脏中主要的转录物 ,主要调节动物脂肪合成和葡萄糖代谢相关基因的表达。研究发现 ,SREBP -1c的过度表达与肝脏等非脂肪组织的脂质积聚相关。SREBP -1c调节体内的脂肪合成主要是通过改变自身的mRNA水平来实现的 ,即生脂酶的转录调节是由SREBP- 1cmRNA的数量控制的。另一方面 ,LXRs、胰岛素、胰高血糖素等因素对SREBP- 1c的转录有调节作用。     

DHA对小鼠脂肪生成基因的时序表达影响

研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对小鼠脂肪组织与肝脏中生脂基因转录表达水平变化规律的影响。用两种浓度DHA(6.25 g/kg体重和12.5 g/kg体重)灌胃小鼠,分别于0、1、2、4、8、16和24 h处死,取肝脏和脂肪组织,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂基因(PPARγ、SREBP-1c、FAS)的时序表达规律。结果表明:脂肪组织中DHA可上调PPARγ和FAS的转录表达,8h达到峰值,其后表达量下降,SREBP-1c表达规律与这两种基因相反;肝脏中DHA能下调PPARγ、SREBP-1c、FAS的转录表达,8h达到最低,其后表达量上升。推测DHA可通过促进脂肪组织中脂肪合成以及抑制肝脏中脂肪合成来调节体脂沉积。