左氧氟沙星人工抗原的合成与鉴定

采用碳二亚胺法将左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备合成抗原BSA LVL,并用作免疫抗原,经紫外扫描法和聚丙烯酰胺电泳法对其进行鉴定,并测得偶联的结合比。结果表明,通过紫外扫描和聚丙烯酰胺电泳法的测定证明偶联成功,偶联的结合比为6∶1。用BSA LVL免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗上清（pAb）效价,获得高效价的pAb,为进一步制备左氧氟沙星单克隆抗体提供良好的免疫原。     

培氟沙星人工抗原的合成与鉴定

【目的】制备培氟沙星(Pefloxacin,PEF)完全抗原,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】以培氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)为材料,用碳二亚胺(EDC)法制备培氟沙星-牛血清白蛋白完全抗原(PEF-BSA),变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及紫外扫描(UV)检测其免疫学特性;利用PEF-BSA免疫BALB/c小鼠,无菌条件下收集血清,用间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价。并用同样的方法制备和鉴定培氟沙星-鸡卵清白蛋白完全抗原(PEF-OVA)。【结果】培氟沙星与牛血清白蛋白及鸡卵清白蛋白偶联成功,PEF-BSA偶联比为8∶1,PEF-OVA偶联比为6∶1。间接ELISA测得多抗血清效价均达到4 000以上,得到了较好的免疫效果。【结论】成功得到了培氟沙星完全抗原,该抗原具有较强的特异性及良好的敏感性。     

诺氟沙星人工抗原的合成

采用碳二亚胺(EDC)法将诺氟沙星(NFLX)分别与载体蛋白BSA和OVA进行偶联。用于制备免疫抗原NFLX-BSA和包被抗原NFLX-OVA。通过对产物进行紫外扫描和SDS-PAGE,证明半抗原与载体偶联成功。以免疫原NFLX-BSA免疫BALB/C小鼠45 d后,通过间接ELISA方法检测效价达1:32 000。这一结果为进一步制备抗NFLX单克隆抗体提供了良好的免疫原。     

碳二亚胺法制备阿莫西林人工抗原及其鉴定

合成、鉴定了阿莫西林(amoxicillin,AMO)人工抗原,并通过动物免疫法生产了亲和力高、特异性好的鼠源AMO多克隆抗血清。采用碳二亚胺(EDC)法将AMO分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,合成完全免疫抗原AMO-BSA和检测抗原AMO-OVA,经紫外分光光度法和SDS-PAGE以及动物免疫进行鉴定。结果表明,偶联后的紫外吸收峰与BSA和AMO相比都发生了一定的位移,AMO-BSA在276nm处出现最大吸收峰,BSA的泳动速度大于AMO-BSA。免疫后获得的3只小鼠多抗血清,通过间接竞争ELISA测定,效价可达1×10-4以上,1号小鼠半数抑制浓度(IC50)为573.75ng/mL,敏感性较好。AMO完全人工抗原的合成以及鼠源多克隆抗体血清的制备,为AMO单克隆抗体的制备奠定了基础。     

溴氰菊酯人工抗原合成及鉴定

 以二溴菊酸和3-[(4-硝基苯)氧基]苯甲醛为原料经4步反应合成了溴氰菊酯半抗原1-氰基[3-(4-氨基苯)苯基]甲基-2,2-二甲基3-(2,2-二溴乙烯基)环丙烷羧酸酯;用重氮化法将溴氰菊酯半抗原分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）相偶联制备免疫抗原和包被抗原,紫外吸收法估算偶联比分别为11:1和8:1;以BSA偶联物作免疫抗原免疫日本大耳白兔制备溴氰菊酯多克隆抗体,间接非竞争ELISA法测定2个抗血清效价分别为100000和80000,间接竞争ELISA法初步测定农药浓度50μg/ml时抑制率达到80%以上,为研究建立溴氰菊酯农残免疫快速测定方法奠定了基础。     

氟苯尼考人工抗原的合成与鉴定

采用混合酸酐(MA)法,将氟苯尼考(FFC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备人工免疫抗原FFC-HS-BSA和包被原FFC-HS-OVA,经紫外扫描(UV)、凝胶电泳 (SDS-PAGE)、红外扫描光谱(IR)和动物免疫试验证实人工抗原合成成功.     

莠去津人工抗原的合成与鉴定

以除草剂莠去津原药、巯基丙酸等为起始原料,经过亲核取代反应合成了莠去津的半抗原:2-硫丙酸基-4-乙胺基-6-异丙胺基-1,3,5-三嗪,并用UV、IR以及NMR等手段证明合成成功,用活泼酯法将半抗原与载体蛋白成功的进行偶联,根据紫外吸收的加和性原理,比较测定半抗原、载体蛋白及偶联物的吸光值,并计算出半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)的结合比为16:1和6:1。     

有机磷农药三唑磷人工抗原合成及鉴定

[目的]合成并鉴定有机磷农药三唑磷人工抗原。[方法]采用活泼酯法将三唑磷半抗原（TZPM-Hap）与牛血清蛋白（BSA）和卵血清蛋白（OVA）偶联,制备出免疫抗原（TZPM-A-BSA）和包被抗原（TZPM-A-OVA）,并通过紫外扫描和动物免疫试验对其进行了鉴定。[结果]紫外扫描和动物免疫试验结果表明人工抗原合成成功。[结论]为制备单抗及开发快速、简便的三唑磷ELISA试剂盒奠定了基础。     

恩诺沙星人工抗原的合成与鉴定

采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法,将恩诺沙星（ENR）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）连接,制备人工免疫原ENR-BSA和包被原ENR-OVA,经紫外扫描分析和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,研究结果对抗恩诺沙星单克隆抗体的制备具有重要意义.     

三聚氰胺人工抗原的合成及初步鉴定

采用碳化二亚胺法将三聚氰胺偶联到牛血清白蛋白上合成免疫原三聚氰胺-牛血清白蛋白。合成的抗原进行紫外扫描鉴定,利用辣根过氧化物酶合成HRP-MEL-BSA酶标抗原,利用固相抗体酶标抗原来进行效价的测定,检测抗原的合成。     

吡虫啉人工抗原的合成与鉴定

 以吡虫啉原药与β-巯基丙酸为起始原料，在碱性条件下反应，合成了半抗原{1-[6-(2-羧基乙硫基)-3-吡啶基甲基]-N-硝基亚咪唑烷-2-叉胺}。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联得到了人工抗原，经免疫动物后，获得了高效价的特异性多克隆抗体，抗血清效价为2.56×104。经酶联免疫反应（ELISA）测定，吡虫啉对抗体的抑制中浓度（IC50）为 20.7 ?g·L-1，最低检测限（IC20 ）为1.1 ?g·L-1，检测范围在1～1 000 ?g·L-1内线性关系较好，吡虫啉结构类似物交叉反应率均小于1.4%。     

林可霉素人工抗原的合成与鉴定

拟合成并鉴定林可霉素( Lincomycin,LIN)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源LIN多克隆抗血清.采用高碘酸钠法将林可霉素与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫原LIN-BSA和包被原LIN-OVA,并采用紫外分光光度法(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果表明,半抗原LIN和载体蛋白偶联成功.动物免疫试验(免疫BALB/c纯系小鼠)结果显示,3只小鼠效价均达1∶3 000,且2号小鼠多抗血清抗LIN的半数抑制质量浓度IC50为3.85 μg/L,与莫能菌素的交叉反应率为6.19％,与其他药物无交叉反应.表明成功获得高效价、特异性好、亲和力高的鼠源抗LIN多抗血清.     

二氯喹啉酸人工抗原的合成与鉴定

 以除草剂二氯喹啉酸（quinclorac，Q）、氯化亚砜、氨基己酸和氨基丁酸等为起始原料，经2步化学反应分别合成了2种二氯喹啉酸半抗原：6-(3,7-二氯-8-喹啉甲酰基)氨基己酸（QC）和4-（3,7-二氯-8-喹啉甲酰基）氨基丁酸（QB）。并通过碳化二亚胺法和混合酸酐法将Q、QC和QB分别与载体蛋白（BSA、OVA）偶联制备了二氯喹啉酸的免疫抗原和包被抗原。再将Q-BSA、QC-BSA和QB-BSA分别免疫新西兰大白兔获得了3种抗二氯喹啉酸的多克隆抗体：抗Q-BSA抗体(Q-Ab)、抗QC-BSA抗体(QC-Ab)和抗QB-BSA抗体(QB-Ab)，当相应的包被抗原浓度均为4 ?g·ml-1时，相应的冻干粉效价分别为2×103，1.2×106和1.6×106。由于Q-Ab效价偏低，不适合用于检测。采用同源间接ELISA竞争法测定时，其他2种抗体（QC-Ab、QB-Ab）的抑制中浓度(IC50)均大于50 mg·L-1，检测灵敏度也较低。因此本文对异源间接竞争ELISA法进行了研究，结果表明，异源反应的检测灵敏度高于同源反应，其中QB-Ab的IC50为0.4 mg·L-1；最低检测限为0.006 mg·L-1。     

磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的合成与鉴定

用重氮化方法将SDM偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通过紫外扫描(UV)、SDS-PAGE凝胶电泳试验。结果显示:BSA-SDM和OVA-SDM的UV与BSA、SDM的相比均发生了改变,出现了明显的特征峰。这表明半抗原和载体偶联成功。用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价。结果表明,获得了高效价的pAb,为SDM残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

SW人工抗原的合成与鉴定

【目的】探索高效苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA的合成方法。【方法】设计新的技术路线,合成SW人工抗原制备的关键中间产物SW-对甲基苯甲酸,并进行波谱分析。应用EDC法将SW-对甲基苯甲酸分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)连接,制备免疫抗原SW-BSA和包被抗原SW-OVA,通过小鼠免疫试验检测所合成的SW-BSA的免疫原性。【结果】合成的SW-对甲基苯甲酸的结构与预期目标产物一致;合成的SW-BSA可刺激小鼠产生针对SW的抗体;通过薄层层析技术可对反应进程进行即时检测。【结论】SW-BSA人工抗原合成成功,该人工抗原具有良好的免疫原性。     

Synthesis and Identification of Artificial Antigen for Imidacloprid

This study reported that a hapten of imidacloprid, 1-[(6-Carboxylethylthio-3- pyridinyl)methyl)-N-nitro-imidazolidinimine was synthesized using technical material of imidacloprid to react with 3-mercaptopropionic acid in hot alkaline solution. The hapten was conjugated to bovine serum albumin (BSA) and ovalbumin (OVA) to form the immuno-antigens and the coating antigen, respectively. The antibody with high titer (2.56 × 10⁴) was obtained after immuning rabbits. The results showed that the antibody had a high affinity to imidacloprid tested by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which IC₅₀ and IC₂₀ were 20.7 and 1.1 μg L⁻¹; and the cross reactibilities to those compounds related with imidacloprid were less than 1.4%.     

克百威人工抗原合成及其免疫应用

研究克百威半抗原4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)的新合成方法,以避免传统三光气合成法的危害。以呋喃酚为起始物,通过酯化反应和还原反应最终合成半抗原BFNB,利用质谱和核磁进行表征,结果证明半抗原BFNB合成成功。利用活性酯法将BFNB分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联得到免疫原和包被原,紫外扫描计算偶联比分别为17∶1和8∶1;将免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,间接竞争酶免疫检测方法(icELISA)表明其半数抑制质量浓度(IC_(50))为0.096μg/mL,定量检测线性(IC_(20)~IC_(80))为0.023~0.403μg/mL。该研究所制备的抗原为进一步研制抗克百威单克隆抗体奠定基础。