琯溪蜜柚及其早熟红肉突变体成熟果实SSH 文库的构建及初步分析

 分别以琯溪蜜柚及其突变体红肉蜜柚（成熟期早20 ~ 25 d）的成熟果肉cDNA 作驱赶子和检测子,利用结合分子镜像选择技术的SSH 技术,构建了红肉蜜柚和琯溪蜜柚的正向差减cDNA 文库。通过PCR 检测cDNA 克隆外源插入片段,其大小介于100 ~ 1 000 bp。通过点杂交差异筛选文库,得到102 个表达增强2 倍或以上的克隆并测序,结果表明这102 个克隆代表44 个Unigenes,通过序列同源性比对分析,发现获得的Unigenes 在功能上主要涉及信号传导、蛋白质合成、应激反应、转运等代谢反应。     

‘岩溪晚芦’椪柑果皮与果肉差减cDNA文库的构建及初步分析

 以‘岩溪晚芦’(Citrus reticulata Blanco)成熟果皮和果肉为材料,采用抑制性差减杂交技术,成功构建了果皮（tester）与果肉（driver）的差减cDNA文库。结果显示：cDNA克隆外源插入片段大小介于100～500 bp之间。成功对411个克隆进行了测序,测序结果经与NCBI基因库中序列进行比较,377个EST 找到了同源序列,它们分属于126个基因,涉及到与色素合成、能量代谢、初级代谢、次生代谢、抗逆防御、蛋白代谢、信号转导、香味形成、果皮软化（衰老）、精油合成、抗氧化代谢等代谢途径和生理生化过程。还有一些基因涉及到三价铁螯合物、反转录转座子gag蛋白、查尔酮合成、硼离子转运、儿茶酚氧位甲基转移酶等功能。功能已知且没有重复的EST共有63个,占总数的49.2%。有5个基因共62个克隆虽在Blast搜索时找到了较高的同源性序列,但功能目前尚未明确,有待进一步深入分析。另有34个基因未搜索到同源序列,可能为新发现的基因。     

抑制性差减杂交(SSH)技术在柑桔逆境胁迫研究中的应用

抑制性差减杂交(SSH)技术作为一种稳定、高效、简单的富集和分离差异表达基因方法,为研究植物生长发育及病虫害和其他一些生物或非生物逆境胁迫下的特异基因的表达和相关基因的分子克隆提供了有力的工具。介绍了SSH技术的基本原理、技术要点,并对SSH技术在其他植物和柑桔逆境生理研究中的应用现状和前景进行了探讨。     

抑制性差减杂交结合基因芯片技术在植物基因差异表达研究中的应用

抑制性差减杂交技术和基因芯片技术是近年来发展起来的研究基因差异表达的2种非常有效的方法.SSH技术或基因芯片技术单独使用都存在不同程度的缺陷和不足,但若将2种技术结合起来使用,则能充分发挥各自的优势,并最大限度地弥补各自的不足.鉴于此,对SSH技术与基因芯片技术的原理与优缺点以及两者的结合在植物研究上的应用进行了综述.     

‘津田’芜菁消减cDNA文库的构建及分析

 以‘津田’芜菁红色块根和白色块根为材料, 利用SSH技术成功构建了消减cDNA文库并富集相关基因片段。从消减文库中筛选到960个阳性克隆, PCR鉴定插入片段长度主要分布于300～800 bp之间。克隆测序后与GenBank中的同源序列进行比较, 特异基因片段为302个, 其中99个与数据库中的序列具有相似区域且功能已知, 与数据库中序列没有显著同源性及功能未知的序列为203条。     

抑制消减杂交技术在瓜菜作物研究中的应用

抑制消减杂交(SSH)是一种适用于分离2个遗传背景相关的样品之间差异表达基因的技术,目前该技术在植物研究中的应用不是很多。文章主要综述了抑制消减杂交技术在瓜菜类作物不同发育阶段和抗病、逆境胁迫相关的差异表达基因以及其他相关差异基因研究中的应用现状。     

草原龙胆盐胁迫差减文库的构建及分析

为了研究草原龙胆抗盐性机理,初步获得其抗盐性相关基因,分别以400 mmol·L-1的NaCl及清水处理的草原龙胆叶片mRNA为tester和driver方,利用抑制差减杂交技术构建了cDNA文库.经过测序和与Gene Ontology数据库序列比对,获得了658条单一序列,其中61条序列分子功能未知,535条序列无同源性,62条序列有显著同源性.此62条序列     

利用抑制消减杂交技术分离辣椒细胞质雄性不育育性恢复相关EST

 以辣椒(Capsicum annuum L. ) 细胞质雄性不育系23A、121A, 和其相应的近等基因恢复系23C、121C为试验材料, 利用抑制消减杂交( SSH) 技术成功构建了CMS恢复基因诱导表达的消减cDNA文库。结合高密度点阵膜杂交差异筛选, 获得了282个阳性克隆。通过测序, 除去重复序列共得到175个Unique ESTs。在GenBank上进行BLAST分析, 55个EST片段未找到对应的同源序列, 可能代表了新基因;120个EST片段找到了对应的同源序列, 包括103个已知功能基因和17个未知功能基因。按照MIPS功能分类法, 将其分为14个功能组, 涉及代谢、胁迫应答、蛋白活性、转录因子、信号转导等多方面的功能。     

草原龙胆盐胁迫差减文库的构建及分析1

为了研究草原龙胆抗盐性机理,初步获得其抗盐性相关基因,分别以400 mmol·L-1的NaCl及清水处理的草原龙胆叶片mRNA为tester和driver方,利用抑制差减杂交技术构建了cDNA文库。经过测序和与GO数据库序列比对,获得了658条单一序列,其中61条序列分子功能未知,535条序列无同源性,62条序列有显著同源性。此62条序列注释按照功能分为21类。获得了活性氧清除系统基因DHAR、GST、TRX、CAT,转录因子SMT3,调控基因丝氨酸/苏氨酸激酶基因等。结果说明草原龙胆的盐抗性相关基因与数据库中的模式植物基因既有一定的共性,同时绝大部分的序列又无法用已知的基因进行解释。     

抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因

以铁高效基因型植物———苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et J iang) 为材料, 利用抑制性消减杂交( SSH) 方法, 成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆, 通过PCR检测插入片段大小在300～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选, 得到差异表达片段( ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高, 视为已知基因, 并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列, 可能代表了新基因;另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。     

Identification of differentially expressed genes in fragrant rose Jinyindao with suppressive subtraction hybridization

To investigate the floral fragrance new genes, scent mutant of rose was used here. The suppressive subtraction hybridization (SSH) technique and micoarray analysis of the clones were used to isolate the cDNA fragments, which showed differential expression between the rose scent mutant ‘Wangriqinghuai’ and wild type ‘Jinyindao’ (Rosa × hybrida), and RT-PCR was used to identify up-regulated expressed genes. 16 positive contigs of JSSH were obtained. Some ESTs such as RcOMT1, RcOMT2, RhMYB92 and RhGP1 were known to regulate scent metabolism, and 5 ESTs with no homology in NCBI may represent new genes involved in rose flower fragrance metabolism. SSH technique combined with cDNA micoarray would be useful for analysis and isolation of the genes related to rose floral scent.     

切花月季新品种‘云玫’和‘云粉’

 切花月季新品种‘云玫’和‘云粉’是分别通过自然芽变选择和有性杂交选择培育而成。‘云玫’高心剑瓣中花型, 玫红色, 年产量25枝/株。‘云粉’阔瓣大花型, 花瓣浅粉色, 年产量20枝/株。二者瓶插寿命8～10 d。     

荔枝胚败育差异表达基因cDNA 片段的克隆及序列分析

 利用抑制消减杂交(Suppressive subtraction hybridization , SSH) 克隆荔枝败育胚的差异表达基因cDNA 片段。分别以荔枝‘桂味’正常发育胚为driver (驱赶子) , 败育胚为tester (检测子) , 建立差异表达cDNA 文库, 代表桂味败育胚特异表达的cDNA。经Virtual Northern 检测, 在桂味正常发育胚/ 败育胚差异表达cDNA 文库中得到3 个阳性克隆, 序列分析表明这3 个克隆对应的两个序列在荔枝中为首次报道。     

矮牵牛花器官突变体blind-like的表型和解剖结构

 从矮牵牛自交系中获得一个花器官变异突变体, 将其命名为blind-like。该突变体的性状能够稳定遗传, 主要表现为花数增多, 花瓣顶端出现花药状结构, 具有类似正常花药的四分室结构, 并产生少量花粉。该突变体与矮牵牛花器官blind突变体相似, 通过自花授粉与异花授粉产生种子。     

红色月季花瓣平面干燥保色技术与机理研究

  以红色切花月季品种‘萨蔓莎’花瓣为试材, 通过分析花瓣在干燥过程中花色变化的内在因素和外界因素, 制定了7 种花色保色剂, 并按不同浓度、不同处理时间分别对花瓣进行处理, 得到9 种与鲜花颜色相近的干燥花瓣。经过6 个月的自然日光照射试验, 筛选出最佳保色剂及其处理方法。保色前后的花瓣色素分析结果表明, 花瓣内主要色素为花青素( 3、5、7- 三羟基- 二苯基苯吡喃) 和八氢番茄红素, 其中的花青素与保色剂中的镁盐作用生成花色甙及其甙元等较稳定的红色物质, 使红色月季花瓣在干燥后保持鲜花颜色并长久不褪色。     

辣椒细胞质雄性不育系和保持系SSH-cDNA文库的构建

以辣椒细胞质雄性不育系A1、A5为驱动方(driver),以其相应的保持系B1、B5为测验方(tester),利用抑制差减杂交技术构建了1个辣椒细胞质雄性不育保持系表达基因的正向差减cDNA文库。从差减文库中筛选到189个阳性单克隆,经高密度点阵膜杂交筛选和测序分析,共获得了42条表达序列标签(ESTs)。BLAST比对分析后,得到了35条有比对结果的序列,其中包括26条已知功能基因序列和9条未知功能基因序列,已知基因功能多与基础物质代谢、胁迫应答、信号转导等方面有关;有7条ESTs没有比对结果,可能代表一些新基因。     

桃花芽休眠解除SSH文库构建及相关基因表达分析

 为了深入研究桃花芽休眠的分子机制,利用抑制差减杂交技术（SSH）,以解除休眠期的花芽的RNA为实验方Tester,以休眠期花芽的RNA为驱动方Driver,构建休眠解除cDNA文库,测定分析了180 个上调表达的cDNA 片段,测序成功128个,除去冗余序列,得到28个单一序列。对序列进行BLAST比对及功能注释,发现这些序列分别属于新陈代谢、氧化还原、信号转导、抗性相关等类别基因。运用qRT-PCR 技术对HisH3、Dhn 和Metallothionein基因进行检测,结果表明它们在花芽休眠解除过程中均上调表达。     

迎红杜鹃的花色素组成及花色在开花过程中的变化

分析了迎红杜鹃（Rhododendron mucronulatum Turcz.）的花色素组成,调查了其在开花过程中花色、花色素组成和含量的变化。采用英国皇家园艺学会比色卡和分光色差计测量了不同开花阶段的花色。结果表明,开花过程中花色的明度增加,彩度变小,由红紫（70B）变为淡紫红色（84B）。用高效液相色谱—光电二极管阵列检测技术（HPLC - PAD）和高效液相色谱—电喷雾离子化—质谱联用技术（HPLC - ESI - MS）分析花瓣中花青苷和黄酮醇的组成及含量。在520 nm和350 nm波长下,共检测到15种化合物：5种花青苷、8种黄酮醇和2种芳香酸,推定出了其中10种化合物。花青苷：锦葵素 3-阿拉伯糖苷-5-葡萄糖苷;黄酮醇：杨梅黄素3-半乳糖苷和杨梅黄素3-鼠李糖苷;槲皮素3-半乳糖苷、槲皮素3-葡萄糖苷和两种槲皮素-鼠李糖苷以及山奈酚3-鼠李糖苷;芳香酸：绿原酸及其异构体。未检测到酰基化色素及5-O-甲基化黄酮醇。在6个开花阶段中,虽然花色变化明显,但花色素种类不变,其含量在各阶段差异极显著。从小蕾期到初开期,总花青苷含量（TA）和总黄酮醇含量（TF）迅速减少,花开放后变化平稳。基于花色素组成信息,探讨了耐寒杜鹃的花色育种策略。     

茄子叶色黄化突变体的特征及遗传分析

以茄子叶色黄化突变体‘chl861-2’及其叶色正常近等基因系‘0643-1’为试材,研究其生长变化趋势、主要农艺性状、叶绿素含量变化和光合特性。该突变体具有叶绿素缺失突变特征,从子叶期开始表现出叶色黄化现象,子叶浅黄色,整个生育期真叶黄色。突变体植株生长缓慢,矮小,生育期延长,生长势和果实显著小于野生型,单果质量只有野生型的71.58%;在苗期、门茄开花期、四门斗开花结果期总叶绿素、叶绿素a、叶绿素b的含量比野生型亲本显著降低;在苗期、门茄开花期净光合速率(P_n)显著低于野生型,气孔导度(G_s)和蒸腾速率(T_r)低于野生型,胞间CO₂浓度(C_i)高于野生型。以突变体与3个正常叶色自交系为亲本构建6世代群体,对突变体叶色黄化性状遗传规律进行分析,结果表明叶色黄化性状为隐性核单基因控制,将该基因命名为Smchl-1。     

芍药开花过程中花色和色素的变化

 以从内蒙古自治区赤峰市克什克腾旗引种的野生芍药（Paeonia lactiflora）为材料,采用英国皇家园艺学会比色卡和分光色差计测量不同开花阶段的花色,利用高效液相色谱-光电二极管阵列检测（HPLC-DAD）和高效液相色谱-电喷雾离子化-二级质谱联用技术（HPLC-ESI-MS²）定性定量分析其花色素组分,运用多元线性回归方法分析了花色与花瓣中色素组成之间的关系。结果表明：开花过程中花色的明度增加,红色减退,彩度变小,颜色由红紫（N57A）变为淡紫红色（75C）。从其花瓣中共检出6种花青苷,4种黄酮苷和15种黄酮醇苷。其中两种花青苷（芍药花素–3–没食子酰葡萄糖苷–5–葡萄糖苷、芍药花素–3–丙二酰葡萄糖苷–5–葡萄糖苷）,两种黄酮苷（木犀草素–7–没食子酰葡萄糖苷、木犀草素–7–阿拉伯糖苷）和13种黄酮醇苷在芍药中属首次报道。分析结果表明其花青苷的主要成分是芍药花素–3, 5–二葡萄糖苷,约占总花青苷含量（total anthocyanins content,TA）的93.93%;其花黄素（包括黄酮和黄酮醇）的主要成分是山奈酚–3–葡萄糖苷,占总黄酮含量（total flavones content,TF）的48.78%。不同的开花阶段,从露色期到松瓣期TA含量略增加,松瓣期后开始降低,TF则先略减少后增加。多元回归结果显示,芍药花素–3, 5–二葡萄糖苷、槲皮素–3–葡萄糖苷、槲皮素–7–葡萄糖苷、异鼠李素–3–葡萄糖苷的含量与花色变化具有线性相关性。