抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的临床应用研究

采用纯化的抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）多抗作为第一抗体，抗ＩＢＶ单克隆抗体作为第二抗体，应用ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法诊断鸡ＩＢＶ病。以多抗包被浓度为１：８０稀释，单抗１：４稀释，显色反应时间３０ｍｉｎ为最佳工作条件。该方法快速、简便、准确、特异性强。ＩＢＶ发病鸡服用１：１０稀释的单抗１ｍｌ／羽一次后有良好治疗效果。健康鸡服用单抗后无任何变态反应。初步建立了抗ＩＢＶ单克隆抗体制剂及安全的治疗方法与诊断系统。     

兔源IBD抗独特型抗体疫苗的制备及对鸡的初试

用纯化的抗ＩＢＤＶ抗体作为抗原免疫家兔,并分离制得效价较高（１：１６）的兔源ＩＢＤ抗独特型抗体,分别与氏安全和福氏不完全佐剂按１：１比例乳化制成抗ＩＢＤＶ独特型抗体疫苗,免疫接种普通迪卡公雏鸡和ＳＰＦ鸡,然后用ＩＢＤＶ强毒株攻毒,得到保护率分别为１００／１００,１００／１００,５０／５０和大群免疫接种应答为１００％的免疫保护效果。     

斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒及抗体

采用鼠抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）高免血请作第１抗体，利用酶标羊抗鼠ＩｇＧ作第２抗体，建立间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测ＩＢＶ抗原；利用鸡抗ＩＢＶ血清阻断试验检测ＩＢＶ抗体。试验表明，本程序检测ＩＢＶ抗原及其抗体具有高度过感性和特异性。最低抗原检出量达１０￣（－８）ｇ数量级，阳性检出率９８％，阳性阻断率１００％。     

双抗体ELISA检测鸡传染性法氏囊病病原

用单克隆抗体双抗体ＥＬＩＳＡ法检测自然发病鸡和人工感染鸡的法氏囊及其它脏器和ＩＢＤＶ细胞毒，病鸡的法氏囊ＩＢＤＶ检出率约１００％，其它脏器较低，ＩＢＤＶ细胞毒毒价明显低于组织毒。     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

抗IBD高免卵黄抗体的研制

应用ＩＢＤ二价弱毒细胞苗和二价油乳剂灭活苗对鸡进行加强免疫，待高免鸡血清ＩＢＤＡＧＰ抗体效价达１：２５６以上时，收集高免蛋，用于制备抗ＩＢＤ高免卵黄抗体，制出的高免卵黄抗体ＩＢＤＡＧＰ效价为１：６４～１：１２８，用这种高免卵黄抗体对万余只ＩＢＤ病鸡进行治疗，剂量为每只鸡肌注１ｍｌ，总有效率在９０％以上。由此可见，ＩＢＤ高免卵黄抗体具有特异性好、治愈率高、取材方便、制造简便和使用方便等优点，适用于基层推广使用。     

抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体冻干制剂的制备、效检与应用

取液体状抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体经过滤、浓缩、脱盐和冷冻干燥技术处理后．获得抗ＩＢＤＶ单抗的粉制剂．该制剂在ｐＨ５．０～９．０之间１ｈ．效价稳定；在４℃下保存一年以上；３７℃下保存１个月以上，效价稳定．其双向琼脂扩散效价１∶６４以上；ＥＬＴＳＡ效价达１０－６以上．在临床诊断传染性法氏囊病上有高度的特异性和准确性．     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ、４ＡＦ１、６ＤＨ及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ６２株单抗牧场卉性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩ     

鸡传染性支气管炎（IB）诊断方法的研究

本试验用鸡胚大量繁殖鸡传染性支气管炎病毒,收集尿囊液,用１％胰蛋白酶处理制备ＩＵＢＶ血凝抗原,建立了血凝－血凝抑制检测ＩＢＶ抗体的方法,其特异性强,操作简便。另外,本试验建立Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法用于检测ＨＢＶ,病料经处理后,点样于硝酸纤维素膜,加兔抗ＩＢＶ抗体,经ＰＰＡ－ＤＡＢ－Ｈ２Ｏ２显色,其检测结果与双抗体夹心ＥＬＩＳＡ的检测结果一致。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

应用酶联免疫吸附测定技术检测香蕉束顶病毒

为探讨快速而准确的检测香蕉束顶病毒的方法,采用本所制备的香蕉束顶病毒多克隆抗体ＩｇＧ和台湾的香蕉顶病毒单克隆抗体２Ｈ６,用酶联免疫吸附测定技术双抗体夹心法测定了漳州市天宝的香蕉束顶病病株。试验结果表明,多抗和单抗相结合的ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ法能检测到病组织汁液的最大稀释度为１：６４０,而单独使用单抗的最大稀度为１：１０。     

抗小鹅瘟病毒中和性单克隆抗体研制及实验防治效果

用淋巴细胞杂交瘤技术研制出１１株抗小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）单克隆抗体。这些单抗仅与ＧＰＶ反应，与其它细小病毒（ＣＰＶ、ＦＰＶ、ＰＰＶ）和其它禽病毒（ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＤＨＶ、ＤＰＶ）均不反应。腹水单抗的ＥＬＩＳＡ效价达１０－５～１０－７，琼扩沉淀效价达１∶２０～１∶５１２，鹅胚中和效价达１∶３０～１∶１２２，鹅体中和效价为１∶５４～１∶９６。ＧＰＡ１和ＧＰＣ５２株单抗对人工感染ＧＰＶ的雏鹅具有良好防治效果。     

传染性法氏囊病,新夸疫双联卵黄抗体冻干制剂的初步研制及应用效果

ＩＢＤ－ＮＤ双联冻干抗体稀释后必须符合合格标准，ＩＢＤ为ＡＧＰ价＝１：３２，ＮＤ为ＨＩ坐＝１：５１２。实验室有效率ＩＢＤ为７０￣９０％，ＮＤ为６０￣８０％，现地治疗有效率为８０．。４７％，预防保护率为９６．８％，双联冻干抗体在４￣８℃保存１ａ，其ＩＢＤ效价无变化，ＮＤ略有下降。此种双联冻干抗体与粗制卵黄抗体相比，无临床应用时传播疫的危险性，确保使用安全高效。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎毒株H_（95）的研究

从某疫区的鸡腺胃病鸡群中分离到Ｈ＿（９５）毒株，在ＳＰＦ鸡胚稳定传至１５代，具有规律性死亡和典型胚胎病变特征，ＥＩＤ＿（５０）＝５×１０（－５．５）／ｍｌ。用病料和鸡胚尿囊液毒分别感染试验鸡，均引起与自然病例相同的典型病理变化。病料和Ｈ＿（９５）鸡胚尿囊毒提纯的病毒液经负染后电镜观察，均具有典型冠状病毒形态。病毒液经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝集鸡红细胞，并能破相应的抗体所抑制。采用率抗、多抗介导的间接ＥＬＩＳＡ和血凝抑制试验交叉反应表明，Ｈ＿（９５）株与ＩＢＶ行密切的血清学关系。用反转录聚合酶链反应获得了Ｈ＿（９５）毒株的免疫原（Ｓ＿１）基因，经ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印和ＩＢＶ的Ｓ探针检测均呈阳性。结果表明，从腺胃病变型鸡群分离的Ｈ＿（９５）毒株属冠状病毒科ＩＢＶ成员     

Dot—ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫，再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平，带     

鸡法氏囊病细胞毒油乳剂灭活苗对种母鸡的免疫效果

鸡法氏囊病（ＩＢＤ）血清琼扩抗体阴性的５月龄非免母鸡，接种抗原量１．６６７×１０７．６ＴＣＩＤ５０的地方ＩＢＤ细胞毒油乳剂灭活苗后４个月，鸡血清ＩＢＤ琼扩抗体检查１００％阳性，血清平均抗体水平大于１：７．８；鸡群所产的蛋中，至少有９１．３％的鸡蛋卵黄ＩＢＤ琼扩抗体检查为阳性，６５．２％以上的鸡蛋卵黄抗体效价达１：４，平均卵黄抗体水平大于１：５．２，可抵御一般强毒的侵袭。母鸡免后６个月时，只有５７．６％的鸡蛋卵黄ＩＢＤ琼扩抗体检查为阳性，鸡蛋的平均卵黄抗体水平降到１：４以下。     

奶牛血清及乳汁中抗鸡IBD抗体的研制

采取不同免疫方法，对不同采样时期的血清及乳汁进行鸡 Ｉ Ｂ Ｄ抗体效价检测，筛选出以 Ｉ Ｂ Ｄ弱毒苗加油乳苗同时接种，２ 次免疫的方法制得的血清及乳汁中抗体效价较高，血清效价最高可达１∶６４，乳汁中抗体效价最高可达１∶３２。此结果为研制乳汁抗 Ｉ Ｂ Ｄ抗体奠定了基础。     

鸡传染性支气管炎及大肠杆菌病二联灭活油乳苗的研制和应用

用本地分离株及标准株筛选出４个ＩＢＶ强毒株（呼吸型和肾型）及７个至Ｅ．ｃｏｌｉ强毒菌株（血清型为Ｏ１，Ｏ２，Ｏ７８）作为制苗基础毒株和菌株，并加入发病鸡场的自家分离株，作为制苗毒种和菌种，并将制成灭活的尿囊液和菌液以及油佐剂配成鸡传染性支气管炎及大肠杆菌病二联灭活油甩苗。试验证明：该油苗可使鸡产生坚强的免疫力，二免后１０个月攻毒保护率达１００％，ＩＢＶ抗体的ＨＩ价为１：２５６，Ｅ．ｃｏｌｉ抗体直接     

Dot－ELISA在鸡IBD免疫检测及诊断中的应用研究

利用鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）细胞适应株在鸡胚ＣＥＦ单层培养物上增殖后经超速冷冻离心制备抗原，以国产ＮＣ膜为载体建立了检测与诊断鸡ＩＢＤ的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经与ＡＧＰ、ＶＮ、ＥＬＩＳＡ等方法进行比较，表明本方法灵敏，快速，简易，特异性强，重复性良好。对ＩＢＤ免疫抗体的检测结果表明，采用首次以ＩＢＤ弱毒苗与灭能油乳剂苗同时免疫、再次用油乳剂苗加强免疫的接种程序，可获得显著而持久的抗体水平；带母源抗体（ＭＡｂ）的雏鸡于２１日龄首次免疫，效果良好；带ＭＡｂ的鸡胚于１８日胚龄接种ＩＢＤ弱毒苗，雏鸡出壳后可在较长时间内获得良好的保护。