小鼠RNA结合蛋白QKI-5的生物信息学和组织表达分析及其过表达对癌症相关基因表达的影响

【目的】旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5(Qki-5)的真核表达载体,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征,检测该基因的组织表达谱,并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响。【方法】提取小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区（Coding Sequence,CDS）全长,将获得的目的片段与线性化载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接以获得pcDNA3.1-m Qki-5。通过在线软件对Qki-5基因序列及其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Qki-5基因在小鼠不同组织中的表达谱,同时使用免疫组织化学技术检测QKI-5蛋白在小鼠肝脏组织的表达分布。之后,将pcDNA3.1-m Qki-5重组质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒分别转染至AML12细胞,通过qPCR和Western Blotting(WB)检测Qki-5基因在mRNA和蛋白水平的表达,并进一步检测Qki-5基因在AML12细胞中过表达后对癌...     

鸟传染性支气管炎病毒RNA结合蛋白基因的克隆和表达

以鸟传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis Virua,IBV)的cDNA为模板,用PCR技术克隆出编码该病毒非结构蛋白NSP9中的RNA结合蛋白基因,连接到pGEX-6p-1载体中并转入大肠杆菌DH5a中进行测序.随后将该重组载体转入大肠杆菌BL21中进行表达,通过GST亲和层析纯化得到目标蛋白.DNA测序分析表明所得克隆片段的长度为333bp,将其序列与GenBank的报道比对,可知所得结果与鸟传染性支气管炎病毒M41毒株的RNA结合蛋白基因一致.同时,所得蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳分析证实其分子量为12kD,与ExPASy ProtParam所得到的预期大小一致.     

反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA的研究

[目的]研究反义寡核苷酸干涉家蚕非编码RNA表达的情况。[方法]构建Bm-15的反义寡核苷酸探针,通过脂质体转染昆虫Sf9细胞干涉Bm-15的表达。[结果]转染后细胞中Bm-15的表达量下降了63%,差异达显著水平,表明反义寡核苷酸探针对Bm-15基因表达有较好的抑制作用。[结论]该研究为进一步研究非编码RNA的功能奠定了良好的基础。     

植物RNA结合蛋白的研究进展

从RNA结合蛋白的鉴定方法,RNA结合蛋白的基序,以及植物RNA结合蛋白在调控叶绿素mRNA的稳定和转录、植物抗逆反应、开花和激素信号传导等过程中的作用等方面介绍了植物RNA结合蛋白的研究进展。     

凋亡素融合基因原核表达载体的构建及可溶性表达

在获得凋亡蛋白融合基因的基础上,成功地构建了重组表达质粒PET-22b-SPA,将阳性重组质粒转化表达受体菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,凋亡蛋白融合基因获得高效表达。软件分析结果表明表达蛋白占菌体蛋白的20%,上清表达量约为10%。上清蛋白经纯化后,Western blot结果显示,利用凋亡蛋白单克隆抗体可以很好地与所表达的蛋白带特异性结合。     

玉米RNA结合蛋白GRMZM2G052926基因的生物信息学分析

为了研究玉米RNA结合蛋白在玉米生长发育中的调节机制,以一个玉米RNA结合蛋白GRMZM2G052926基因为材料,采用生物信息学的方法,对其理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、功能域、二级结构等方面进行了预测和分析。结果表明:基因包含一个1 335bp开放阅读框,是一种具有亲水能力的不稳定酸性蛋白,相对分子质量38.301 1kDa,包含两个RRM超亲家族(RRM superfamily),无信号肽序列,无跨膜结构域,亚细胞定位在细胞质上,二级结构由无规则卷曲、α螺旋、延伸链和β折叠构成;系统进化树分析表明,GRMZM2G052926蛋白与水稻Os05g0437300蛋白亲缘关系最近,同源性达到87%。     

单核增生性李氏杆菌溶血素的原核表达及可溶性分析

对单核增生性李氏杆菌的主要毒力基因hlyA进行大肠杆菌原核表达,分析其表达蛋白的可溶性并纯化。根据hlyA基因设计特异性引物,细菌煮沸破裂提取基因组,PCR扩增出目的条带。连接转化至克隆载体pMD18-T,测序正确后连接表达载体pET-30a(+),酶切和PCR鉴定正确后转化至BL21(DE3),构建重组质粒pET-30a-hlyA。IPTG诱导表达蛋白,并分析其可溶性。PCR扩增的hlyA基因全长约1 600 bp,成功构建了重组质粒pET-30a-hlyA,转化大肠杆菌诱导表达了溶血素蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,结果显示表达的蛋白分子量约为60 kD,以可溶性和包涵体2种形式存在,且以可溶性为主要形式。成功克隆和表达了单核细胞增生性李氏杆菌hlyA基因和溶血素蛋白,并得到纯化蛋白。     

棉铃虫信息素结合蛋白2 cDNA的克隆、表达与组织特异性表达

 【目的】克隆、分析和原核表达编码棉铃虫Helicoverpa armigera (Hübner)信息素结合蛋白HarmPBP2的cDNA,并纯化得到HarmPBP2蛋白。【方法】以棉铃虫触角为材料,通过RT-PCR 技术以获得编码中棉铃虫信息素结合蛋白HarmPBP2 基因成熟蛋白开放阅读框序列,使用半定量RT- PCR对表达谱进行研究,并在使用pGEX-4T-1表达载体在BL21（DE3）系统中进行原核表达,使用GSTrap FF预装柱进行纯化并切去标签。【结果】克隆了命名为HarmPBP2（GenBank登录号：EU647241）的棉铃虫信息素结合蛋白基因,该序列全长457 bp,编码149 个氨基酸残基,前端是一段25个氨基酸长的信号肽,推测蛋白具有昆虫信息素结合蛋白典型的6 个保守的半胱氨酸残基的特征。棉铃虫HarmPBP2在雌雄成虫的触角、足和翅中都有表达,另外在雌虫下颚须也有表达。雌雄组织表达量顺序相同,触角中表达量最高,翅中次之,足中最少。雌虫组织中表达量高于雄虫。构建的原核表达载体pGEX/ HarmPBP2,在大肠杆菌BL21（DE3）中成功地表达出一个分子量约为40 kD的融合蛋白,经亲和层析纯化与酶切得到去标签的HarmPBP2蛋白。【结论】克隆、分析和表达了棉铃虫信息素结合蛋白HarmPBP2的cDNA序列,并对其进行纯化,为进一步研究其分子结构和功能奠定了基础,同时对其表达谱进行了研究。     

色素辣椒种子可溶性糖及可溶性蛋白含量的测定分析

以常规方法对9个辣椒品种（品系）种子中的可溶性糖和可溶性蛋白含量进行测定和比较分析,结果表明,辣椒种子中可溶性糖含量较高,不同品种间差异较大;可溶性蛋白含量亦较高,不同类别材料间差异较大,同类别品种差异不大。     

中华蜜蜂气味结合蛋白AcerOBP7的表达及结合特性

[目的]中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)是我国本土蜂种,也是重要的传粉昆虫和经济昆虫.气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)是蜜蜂嗅觉感知中的关键蛋白.在前人对中蜂AcerOBP7基因序列特征分析的基础上,本研究进一步对其表达特性及与气味物质的结合能力进行探究,...     

甜高粱SAI基因的表达与茎秆糖分积累的相关性分析

【目的】通过检测不同甜高粱品种在各个生育时期叶片和茎秆中SAI基因的差异表达量与含糖量,探讨二者之间的相关性,为研究甜高粱糖分积累机制提供理论依据。【方法】高效液相色谱（HPLC）测定甜高粱品种不同生育时期茎秆中的含糖量,qRT-PCR分析叶片和茎秆中SAI基因的表达水平。【结果】拔节期蔗糖含量很低,主要是还原性糖,抽穗和开花期蔗糖含量显著增加,灌浆和成熟期持续增加至最高值,成熟后又有所下降。高糖品种整个生育时期叶片中SAI基因的表达水平高于中糖、低糖和髓干型三类品种,茎秆中SAI基因的表达水平则相反。甜高粱成熟期糖分含量与叶片中SAI基因的表达量呈显著正相关关系,相关系数达0.7239,而与茎秆中的表达量呈负相关关系,相关系数为-0.5971。【结论】甜高粱茎秆蔗糖积累与SAI基因在叶片和茎秆中的表达水平具有相关性,叶片中SAI基因的表达与蔗糖积累正相关,茎秆中SAI基因表达与蔗糖积累负相关,叶片的相关系数高于茎秆。     

植物病毒沉默抑制子P25的原核表达及纯化

通过体外DNA重组技术将P25基因连接在pET28a（＋）载体上，构建成重组质粒。经PCR扩增、酶切鉴定及DNA序列分析，融合的P25基因序列正确。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异丙基β-D硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，经过亲和层析得到纯品目的蛋白P25。     

鸡Ii基因的克隆、鉴定及其原核表达

从ConA诱导的5周龄SPF鸡脾细胞中提取总RNA,用自行设计的一对引物通过RT—PCR方法扩增出鸡恒定链(invariant chain,Ii)基因片段。经酶切鉴定后,再将该片段克隆到pcDNA3载体中,测定其DNA序列,结果表明该片段长度为669bp,其DNA序列与GenBank登录的基本一致。再将该片段插入原核表达载体PGEX-4T-1,并导入菌株BL21,经诱导培养、蛋白提取和SDS—PAGE,获得分子量约为50kD的特定蛋白条带,表明所克隆的鸡Ii基因在原核细胞中得到表达。     

人工用材林的产业链化经营

在分析我国人工用材林的发展现状和存在问题的基础上,以规模经济和产业关联理论为指导,依据产业链化经营的一般类型,提出了人工用材林产业链化经营组织形式,阐述了建立和完善人工用材林产业链化经营的主要措施.     

应用碱性过氧化氢法提取黑豆皮可溶性膳食纤维及其胆酸结合能力的研究

本文以提高黑豆皮中可溶性膳食纤维提取率及其胆酸结合能力为目的,利用碱性过氧化氢对黑豆皮进行改性,分别研究了H_2O_2浓度、pH、料液比和反应时间对黑豆皮中可溶性膳食纤维提取率的影响;利用正交实验设计L_9(3~4),确定碱性过氧化氢最佳改性条件为H_2O_2浓度15%(V/V),pH 11,料液比1∶18(m/V)及反应时间0.5h。最佳改性条件处理后的黑豆皮可溶性膳食纤维提取率可由原始样品的7.75%提高至16.85%。胆酸结合实验证明改性后的黑豆皮可溶性膳食纤维有着较强的胆酸结合能力,且在低浓度下结合能力更强,说明改性后的黑豆皮膳食纤维具有潜在的降血脂功能,有望被开发成一种预防心血管疾病的食品添加剂。     

pCold~(TM)TF载体原核表达FocA可溶性蛋白的研究

为了较好地表达和纯化尿道致病性大肠杆菌F1C菌毛主要亚单位Foc A蛋白,研究以p Cold ~(TM) TF为载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中原核表达F1C菌毛主要亚单位Foc A,验证表达的蛋白是否为可溶性蛋白,并对foc A基因表达的最佳条件进行了优化。结果表明:目的基因foc A在p Cold表达系统中于15℃下诱导24 h蛋白表达量最高,IPTG浓度在0.1~1.0 mmol/L范围内都能表达目的基因,且不同浓度对目的蛋白表达量无明显差异;表达出来的Foc A蛋白为可溶性蛋白。     

放牧藏绵羊瘤胃热休克蛋白70家族基因表达特征及其与微生物的互作研究

为探讨不同时期藏绵羊瘤胃热休克蛋白70家族基因的表达特征及瘤胃微生物菌群结构在瘤胃免疫功能中的关系。采用Real-time PCR技术和16S rRNA测序对放牧藏绵羊不同时期(4月、6月、10月和12月)热休克蛋白70家族基因( HSPA1A和 HSPA8)(n=12)的表达特征和瘤胃微生物菌群(n=24)进行分析,并采用Spearman对瘤胃微生物与基因表达进行相关性分析。结果表明,不同时期 HSPA1A和 HSPA8表达量存在显著差异, HSPA1A和 HSPA8表达量在4月和6月显著高于10月和12月;不同时期的瘤胃微生物丰度和多样性存在显著差异,Bacteroidetes、Rikenellaceae＿RC9＿gut＿group在12月显著高于6月和10月;Firmicutes、Succiniclasticum和 Butyrivibrio＿2在6月显著高于4月和12月。相关性分析发现,不同时期瘤胃微生物与基因表达存在一定相关性,即瘤胃微生物在一定程度上可以对宿主的瘤胃免疫功能产生影响,这为藏绵羊瘤胃微生物与宿主免疫的互作研究提供基础数据。     

水稻VDAC3蛋白的可溶性外源表达及纯化

[目的]获得外源表达的可溶性水稻VDAC3蛋白.[方法]将osvdac3基因克隆到含有GST标签的pGEX-4T-1原核表达载体中,转化入BL21表达菌株,经IPTG诱导,并使用SDS-PAGE和Western Blot检测分析表达产物,通过Glutathione Resin亲和层析系统纯化获得较纯的目的蛋白.[结果]试验成功构建了pGEX-4T-1-osvdac3原核表达载体并转化大肠杆菌.通过SDS-PAGE和Western Blot试验证实56 kD处的蛋白条带是具有可溶性表达的VDAC3蛋白.[结论]经Glutathione Resin亲和层析系统纯化得到可溶性带GST标签的VDAC3蛋白.该研究结果为水稻VDAC蛋白的功能研究进一步奠定了基础.