中国美利奴超细型与哈萨克羊毛囊兴盛期皮肤组织消减cDNA文库的构建

【目的】筛选影响绵羊羊毛性状的重要候选基因,为研究羊毛性状形成的分子机制奠定基础。【方法】利用抑制性消减杂交技术构建中国美利奴超细型和哈萨克羊兴盛期皮肤组织间正、反向消减cDNA文库,并对差异基因进行测序和生物信息学分析;应用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR对部分差异基因进行鉴定。【结果】①从所构建绵羊皮肤组织的正、反向消减cDNA文库中分别获得153和143个ESTs,其中分别包括5和4个未知功能的ESTs,推测可能是新基因;对部分已知功能ESTs进行了GO聚类分析、通路分析和蛋白互作分析,结果显示粗、细毛羊之间存在一定差异;②文库中的3个差异基因KRTAP8-2、Trichohyalin和KRTAP3-2均能在皮肤中特异性地高表达,其中KRTAP8-2和Trichohyalin基因在中国美利奴超细型羊皮肤组织中的表达丰度分别是哈萨克羊的3.45和2.07倍,而KRTAP3-2基因在哈萨克羊皮肤组织表达丰度是中国美利奴超细型羊的1.87倍。【结论】成功构建了中国美利奴超细型和哈萨克羊皮肤组织间抑制性消减cDNA文库,初步筛选出一批可能影响羊毛性状的差异表达ESTs。     

澳洲美利奴羊在中国

澳大利亚是世界上美利奴羊最多的国家,其所产细羊毛的数量和质量均占世界首位。1984年有羊1.4亿只,羊毛产量72.9万吨。由于本国人口少,毛纺工业不发达,羊毛自用量很少,每年羊毛出口量占90％以上,占世界商品毛的54.3％。美利奴羊占其全国绵羊总数的73％,其美利奴羊根据分布地区和羊毛细度的不同,分为细毛型、中毛型和强毛型。羊毛细度结构上有58、60、64和70支以上的,毛长8.5厘米以上,羊毛综合品质好,全国绵羊每只平均剪毛量5.3公斤,折净毛产量3.2公斤,仅次于新西兰,居世界第二位,其所产美利奴羊毛在国际市场上占垄断地位,美利奴羊也是世界上最好的细毛品种。     

Hoxc13基因在苏博美利奴羊胎羔生长发育期不同组织中的表达分析

【目的】分析苏博美利奴羊不同组织中Hoxc13基因mRNA的表达量差异,为分子标记辅助育种以及,研究细毛羊主要经济性状,奠定理论基础。【方法】使用RT-PCR技术检测Hoxc13基因在苏博美利奴羊65和135 d皮肤、肌肉和不同内脏组织(心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏)中mRNA的表达量,并采用相对定量法对其表达量进行统计分析。【结果】在苏博美利奴羊皮肤、肌肉和不同内脏组织中均有Hoxc13基因的表达,并且在皮肤中的表达量显著高于其它组织(P<0.05),毛囊的形成和毛发生长与Hoxc13基因密切相关。【结论】建立了胎龄分别在65和135 d的苏博美利奴羊,其不同组织中适于定量检测的Hoxc13基因表达量的RT-PCR方法,从分子水平探讨了苏博美利奴羊的组织器官与Hoxc13基因表达之间的内在联系。     

利用平均信息最大似然法估计中国美利奴羊羊毛性状遗传参数

[目的]估计巩乃斯种羊场中国美利奴羊羊毛性状遗传力及性状间的遗传相关,为种羊选择及育种方案的制定提供依据.[方法]测定巩乃斯种羊场1 351只中国美利奴羊周岁母羊羊毛自然长度、剪毛量、羊毛纤维直径、羊毛纤维直径变异系数等性状,利用DMUv6软件及SAS v8.2,对测定数据进行分析,采用多性状动物模型和平均信息最大似然法(AIREML)分析各性状的方差组分,估计遗传参数.[结果]研究估计出中国美利奴羊羊毛自然长度、羊毛纤维直径、羊毛纤维直径变异系数、剪毛量的遗传力分别为0.39、0.52、0.30、0.37.羊毛纤维直径及羊毛纤维直径变异系数间遗传相关为-0.73,羊毛自然长度与剪毛量、羊毛纤维直径与羊毛自然长度之问遗传相关为0.24、0.33.[结论]研究估计出中国美利奴羊羊毛自然长度、剪毛量、羊毛纤维直径、羊毛纤维直径变异系数以及剪毛量的遗传力,可为今后制定中国美利奴羊育种方案、种羊遗传评估提供数据支持.     

农业部"十五"重点推广的毛绒用羊良种

(一)澳洲美利奴羊：澳洲美利奴羊产于澳大利亚，是由西班牙美利奴羊(英国、南非)、兰布列羊(法国、美国)等进行杂交选育而成的著名细毛羊品种。我国引入多年，并以此为素材之一培育出了中国美利奴羊。澳洲美利奴羊具有毛丛结构好、羊毛长而明显弯曲、油汗洁白、光泽好、净毛率高、毛密度大、细度均匀的特点，对各种环境气候有很强的适应性。体型近似长方形，腿短、体宽、背部平直，后躯肌肉丰满；     

利用PCR-SacⅡ-RFLP技术检测绵羊IGFBP-3基因多态性的研究

[目的]将IGFBP-3基因作为候选基因,寻找与绵羊羊毛品质等经济性状相关的SNP位点.[方法]利用PCR-SSCP和DNA测序快速筛查SNP位点;在此基础上建立PCR-RFLP检测方法,分析该位点在不同品种绵羊中的基因型和等位基因分布情况;通过多重比较分析不同基因型与中国美利奴羊部分羊毛性状的关联性.[结果]以绵羊基因组DNA为模板扩增得到了249 bp的特异条带,PCR-SSCP及测序分析显示在该序列的140碱基处发生了G/T突变,导致SacⅡ酶切位点消失.经PCR-SacⅡ-RFLP检测,哈萨克羊和中国美利奴羊细毛羊得到三种基因型:TT(249 bp)、GG(139 bp/110 bp)和TG(249 bp/139 bp/110 bp);杜泊羊中出现GG和TG两种基因型;湖羊、小尾寒羊以及萨福克羊中只有GG一种基因型.关联性分析表明不同基因型与部分羊毛性状没有明显的相关性.[结论]在绵羊IGFBP-3基因嫩含子4区发现一个新的SNP位点,玻建立PCR-SacⅡ-RFLP检测方法;该位点不同等位基因和基因型在不同绵羊品种中的分布具有一定规律性;不同基因型与中国美利奴细毛羊部分羊毛性状中间没有明显的相关性.     

中国美利奴羊羊毛弯曲相关microRNA的筛选

【目的】 研究miRNA在不同羊毛弯曲中国美利奴羊皮肤组织中的表达差异及其可能参与的调控通路,筛选出与中国美利奴羊羊毛弯曲相关的miRNA,为进一步探究细毛羊羊毛弯曲性状的调控机理提供理论依据。【方法】 运用高通量测序技术对羊毛弯曲频率有极端差异表型值(大弯曲组与小弯曲组)细毛羊个体皮肤的miRNA组进行测序与比较分析。【结果】 共鉴定出425个miRNAs,其中包括143个已知miRNAs和282个新发现的miRNAs。在大弯曲组与小弯曲组共筛选到8个上调和17个下调的miRNAs。对差异miRNA的预测靶基因进行简单的Gene Ontology与KEGG Pathway富集分析。差异表达的miRNA的靶基因主要参与跨膜信号受体活动、信号转导活动、分子转导活动、膜的组成等过程。15 761个靶基因注释到252个信号通路。【结论】 筛选出了25个与细毛羊羊毛弯曲性状相关的候选miRNAs。     

优质细毛羊与中国美利奴羊生长发育及生产性能对比试验初报

优质细毛羊是近几年在进口羊基础上经选育扩繁形成的国内最新的品种群。为了有效地开发这一品种，了解该品种的生产性能水平及其在同类品种中所处的地位是十分必要的。本试验通过与国内最具代表性的中国美利奴羊采用同期同龄同环境饲养的对比方法，进行了两品种间对比试验，得出初步结果，中国美利奴羊在生产发育、毛量、毛长和羊毛生长等性状较为突出，体现了强毛型品种特征，而优质细毛羊在羊毛品质性状方面较为突出，尤其是细度在６６～８０支纱范围，比中国美利奴羊高出一个档次，具有明显的细型美利奴品种特征。     

绵羊角蛋白中间丝I型基因多态性及其与羊毛性状的关系

采用PCR-RFLP分子标记技术,检测了湖羊、哈萨克羊及中国美利奴多胎羊、"A"型羊和细型、超细型羊5个群体,共314只个体,角蛋白中间丝I型基因第1外显子的遗传多态性,并进行与绵羊羊毛性状相关性分析.结果表明:480 bp PCR产物经MspⅠ消化分析后在5个绵羊群体中均有2个等位基因突变(M占0.910 8,N占0.089 2)和3种基因型(MM占0.839 2,MN占0.141 5,NN占0.019 3),优势等位基因M基因频率比欧洲绵羊和印度绵羊品种高.序列比对发现,第1个MspⅠ酶切位点发生1个碱基C→T突变(g.160 C>T).中国美利奴羊在该位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05),其中中国美利奴细型、超细型群体在该位点处于Hardy-Weinberg 极不平衡状态(P<0.01).该位点与羊毛纤维直径不相关.     

中国美利奴羊（军垦型）羊毛的超微结构

利用透射式和扫描式电子显微镜对中国美利奴羊军垦A型、B型品系的羊毛进行了超微结构的观察。比较了澳洲美利奴羊羊毛和军垦细毛羊羊毛的形态与结构,对它们的角质层、皮质层以及皮质层内的巨纤维、微纤维的精细结构进行了初步观察和分析。初步认为,中国美利奴羊羊毛与澳洲美利奴羊羊毛大略相同,但军垦细毛羊羊毛与澳洲美利奴羊羊毛和中国美利奴羊（军垦型）的羊毛略有差异。     

中国美利奴羊（新疆军垦型）核因子I/B基因的克隆及表达

【目的】研究绵羊核因子I/B （nuclear factor I/B,NFIB）基因的组织表达规律,并克隆中国美利奴羊（新疆军垦型）NFIB基因的全长编码区（coding sequence,CDS区）序列。【方法】采用半定量RT-PCR的方法分析NFIB基因的组织表达谱和皮肤表达特性,利用RT-PCR扩增绵羊NFIB基因的全长CDS区、克隆测序,并进行序列分析。【结果】①NFIB基因在绵羊多种内脏器官和皮肤组织中都有着不同程度的表达,且在皮肤组织中表达较高;NFIB基因在超细毛品系体表不同部位皮肤组织中的表达水平不存在显著性差异（P＞0.05）;同时在6个不同品系/品种绵羊体侧部皮肤组织中的表达水平也不存在显著性差异（P＞0.05）;超细毛品系绵羊皮肤组织NFIB基因的表达水平在不同季节存在显著性差异（P＜0.05）;②绵羊NFIB基因编码区至少存在3种剪接形式,其开放阅读框（open reading frame,ORF）的长度依次为1 263、1 128 和1 038 bp,分别编码420、375和345个氨基酸。【结论】中国美利奴羊（新疆军垦型）NFIB基因在皮肤组织中的表达量较高,其在超细毛品系羊体侧部皮肤组织中的表达量具有显著的季节性差异;绵羊NFIB基因至少可以编码3种不同的蛋白剪接体（protein isoform）。     

原花青素对脂多糖诱导的环氧合酶-2表达的抑制作用

以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为模型,研究原花青素对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞中环氧合酶-2(COX-2)mRNA转录的抑制机制。采用RT-PCR法测定原花青素对LPS诱导的RAW264.7细胞中COX-2mRNA转录的影响,采用Western blot和免疫组化法考察原花青素对LPS诱导的RAW264.7细胞核转录因子κB(NF-κB)亚基p65(NF-κB/p65)及NF-κB结合蛋白(I-κB)表达的影响。结果发现LPS处理RAW264.7细胞可以明显上调COX-2 mRNA的表达,同时降低胞质蛋白I-κB的表达水平,增加NF-κB的水平。原花青素对RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的转录有较强抑制作用,抑制NF-κB/p65的表达及I-κB的降解,原花青素可能是通过抑制NF-κB/p65的表达及I-κB/p65的降解而抑制COX-2的表达。     

绵羊肉品质性状的测定与分析

[目的]分析绵羊的肉品理化性状,揭示绵羊肉品品质的内在特性。[方法]对德克萨尔羊、中国美利奴新疆军垦型和湖羊3个绵羊品种的背最长肌的肌肉失水率、肌内脂肪、水分、熟肉率、肌纤维密度及肌纤维直径进行测定和比较。[结果]德克萨尔羊的肌内脂肪含量最高,显著高于中国美利奴新疆军垦型和湖羊,德克萨尔羊的熟肉率极显著高于中国美利奴新疆军垦型和湖羊,失水率低于中国美利奴新疆军垦型和湖羊,水分各品种羊差异均不显著;德克萨尔羊肌纤维密度最大且极显著高于湖羊、显著高于中国美利奴新疆军垦型,湖羊肌纤维直径极显著高于中国美利奴新疆军垦型和德克萨尔羊。[结论]该研究为羊的肉质评定提供了理论依据。     

利用RAPD技术分析绵羊品种间遗传关系

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术研究分析了三种绵羊杂交品种及一种纯种绵羊的基因组DNA多态性。用 10个随机引物对各品种实验羊的基因组DNA进行扩增 ,平均每个品种观察到约 94个标记。扩增结果以RAPDistanceProgram软件分析表明 :中国美利奴羊A品系与中国美利奴羊B品系的随机扩增多态DNA共享度最高 ,它们构成的姊妹群依次与哈萨克羊、中国美利奴羊多胎品系成为对应的姊妹品种。     

中国美利奴羊(新疆型)羊毛长度与产毛量的全基因组关联分析

【目的】对中国美利奴羊(新疆型)羊毛长度和产毛量性状进行全基因组关联分析（GWAS）,挖掘影响这2个性状的遗传标记,揭示这些性状产生的遗传机制。【方法】以366只中国美利奴羊(新疆型)为对象,对其周岁羊（16月龄）和成年羊（30月龄）个体的羊毛长度和产毛量(污毛质量)性状进行描述性统计。提取试验羊DNA,采用Illumina OvineSNP50 BeadChip中密度芯片(包括54 241个SNP位点),对周岁羊和成年羊的羊毛长度和产毛量进行GWAS。基于single-locus回归方法、permutation方法、Ovisaries Annotation Release 100和绵羊数量性状位点数据库（Sheep QTLdb）进行统计分析、基因注释和SNP验证。【结果】试验羊群体羊毛性状的平均值均在正常范围内,最大值和最小值均符合正态分析要求,可进行GWAS。从试验羊群体中共筛选出44 798个SNP,每条染色体上的SNP数量为672～5 150个,SNP间的距离为49.97～65.59 kb。挖掘出21个与羊毛性状相关的SNP,其中s65179.1、OAR25_10510703.1、OAR3_112640501.1和s56106.1 4个SNP分别位于KIF16B、RYR2、ANAPC1和DPP6基因内,并且这4个SNP位置均位于基因的编码区;其他SNP注释在FIBIN、HSD17B11、PIAS1基因附近。QTL分析结果表明,OAR25_10510703.1定位到2个与纤维长度相关的QTL和1个与污毛质量相关的QTL,OAR7_15117952.1定位到1个与纤维长度相关的QTL和1个与初级纤维直径变异系数相关的QTL,可见这2个位点对中国美利奴羊（新疆型）羊毛长度和产毛量具有显著性作用。【结论】在周岁和成年中国美利奴羊（新疆型）鉴定出了21个与羊毛长度与产毛量显著相关的SNP,揭示了中国美利奴羊纤维长度和产毛量性状的遗传结构。     

小鼠NF-κB p65亚基真核表达质粒的构建

[目的]构建小鼠NF-κB p65亚基真核表达质粒。[方法]扩增NF-κB p65亚基,然后构建其真核表达质粒(m-NF-κB-p65-p EGFPC1),并通过PCR和测序验证重组质粒中p65亚基的正确性;然后提取无内毒素的质粒,转染Hep G2细胞,通过观测重组蛋白所融合的绿色荧光蛋白,检测目的蛋白表达情况。[结果]PCR产物的电泳结果显示,成功扩增了小鼠NF-κB p65亚基,成功构建了小鼠NF-κB p65亚基的真核表达质粒,将其命名为m-NF-κB-p65-p EGFP-C1。在真核细胞中,重组质粒可以成功表达小鼠NF-κB p65亚基融合绿色荧光蛋白的目的蛋白。[结论]重组质粒NF-κB-p65-p EGFP构建成功,为后续开展NF-κB信号通路的相关研究奠定了基础。     

中国美利奴“U”系羊毛品质分析

1992年用绵羊冷冻胚胎,移植给中国美利奴新疆军垦型母羊,于1993年顺利产羔.经一年的培育,于1994年5月10日通过了由农业部组织的专家评审,并通过品种鉴定,正式命名为中国美利奴“U”系羊.在周岁时,我们对中国美利奴“U”系羊毛品质进行了室内分析. 1 材料与方法 1.1 测试羊 测试羊为12月龄的中国美利奴“U”系羊,公羊29只,母羊32只.测试公羊体重80.31±5.17 kg,母羊63.78±5.55 kg. 1.2 测定项目 测试内容有羊毛密度、毛纤维强伸度、毛纤维细度、弯曲、毛丛长度、伸直长度和净毛率,测试毛样均采于体侧部.     

中国美利奴羊（新疆型）各品系间毛性状的差异分析

【目的】以新疆巩乃斯种羊场的985只中国美利奴羊（新疆型）母羊为研究对象,采集其毛样,分析各品系间毛性状的差异并做相关分析。【方法】收集整理所有个体鉴定记录和剪毛记录,实验室完成平均纤维直径、纤维直径变异系数和弯曲数的测定。利用SAS8．1软件,分析品系及出生季节合并效应和群别效应对中国美利奴羊（新疆型）毛性状的影响,明确各性状间的相关关系。【结果】品系与出生季节合并效应对自然毛长、弯曲数、体格大小、剪毛量、剪毛后体重、鉴定时体重和细度支数有极显著的影响（P＜0.01）,对纤维直径变异系数有显著影响（P＜0.05）;群别效应对羊毛平均纤维直径、弯曲数、油汗、鉴定时体重和细度支数有极显著影响（P＜0.01）,各毛性状之间存在不同程度的相关。【结论】比较各品系间毛性状的差异,明确各性状间的相关关系,为中国美利奴羊（新疆型）羊毛品质评定提供理论依据,增加选育工作的预见性。     

肝片吸虫感染对绵羊细胞因子质量浓度及表达的影响

为揭示肝片吸虫感染对和田羊与中国美利奴羊细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)质量浓度及其mRNA表达的影响。以和田羊和中国美利奴羊为研究对象,随机分为感染组(N=5)和对照组(N=3),感染组每组经口感染250个肝片吸虫囊蚴。在感染后第0、4、7、16周测定血清细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)的质量浓度,并检测感染16周后肝脏细胞因子(IL-2、TNF-α、IFN-γ)mRNA的表达量。结果表明,感染肝片吸虫7周后,和田羊和中国美利奴羊感染组血清IL-2、IFN-γ质量浓度均显著高于对照组(P0.05);和田羊感染组血清TNF-α质量浓度显著高于对照组(P0.05),而中国美利奴羊感染组与对照组差异不显著(P0.05)。感染16周后,和田羊感染组血清TNF-α、IFN-γ质量浓度及其肝脏mRNA表达量均显著高于对照组(P0.05);中国美利奴羊感染组血清TNF-α质量浓度及其肝脏mRNA表达量均显著高于对照组(P0.05)。揭示和田羊与中国美利奴羊对肝片吸虫的细胞免疫反应存在一定差异。     

美利奴羊有养头儿

美利奴羊以产毛细长而闻名于世,羊毛直径仅16～18微米,价格昂贵,素有“国宝”和“软黄金”之美誉。美利奴羊一公一母平均年产羊毛9.8公斤。而我国的品种产毛仅为3公斤,虽然山羊毛的细度可与美利奴羊相媲美,但是,每只山羊年产毛洗净后仅为2两多。为了迅速调整我国畜牧业养殖结构