RAPD技术及其在动物育种中的应用

建立在ＰＣＲ基础上的ＲＡＰＤ标记，是一种可被广泛应用于动植物遗传作图、基因定位、特殊染色体区段的鉴定与分离、动物性别鉴定以及群体遗传变异检测等研究领域的ＤＮＡ多态性标记。本文系统地论述了ＲＡＰＤ的技术原理及研究概况，比较了ＲＡＰＤ与ＲＦＬＰ及同工酶技术，并探讨了这一新的分子标记在动物育种中的应用及其局限性和发展前景。     

利用RAPD标记鉴定豌豆栽培品种(P.sativum)和野生种(P.fulvum)

随机扩增多聚链ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是基于聚合酶反应链（ＰＣＲ）的扩增反应。笔者应用ＲＡＰＤ技术区别Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ和Ｐ．ｆｕｌ－ｖｕｍ１２个品（种）系,并估测这些品（种）系之间的遗传多样性,用１２个１０－ｍｅｒ核苷酸引物扩增出１６８条染色带。估测遗传类型中遗传相似性是基于扩增产品中成对方法比较,遗传树的构建是利用无重量成组方法的平均数（ＵＰＭＧＡ）进行的。７个Ｐ．ｓａｔｉｖｕｍ栽培品种和５个Ｐ．ｆｕｌｖｕｍ材料群集为截然不同的两大组。ＲＡＰＤ的应用将为育种提供豌豆种间遗传关系资料。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ鉴定出的物种特殊的强染色体带可以发展为稳定的物种特殊标记用于基因渗入研究。     

RAPD技术在园艺植物遗传育种研究中的应用

介绍了ＲＡＰＤ技术在园艺植物品种鉴定和分类、系谱分析、构建遗传图谱、杂种鉴定、突变体检测、基因定位遗传育种研究领域的应用。并对该技术在使用中存在的问题及应用前景进行了探讨。     

引物及RAPD标记数对芥菜变种聚类分析的影响

利用ＲＡＰＤ标记对１６个芥菜变种的遗传关系进行研究,并在ＵＰＧＡ聚类分析的基础上建立了亲缘关系系统树图和利用不同的引物数和不同的ＲＡＰＤ标记数对芥菜进行聚类分析。结果表明,聚类结果基本一致。即都可将１６个芥菜变种划分为３组：Ｃ组只有茎瘤芥１个变种,Ａ组和Ｂ组的变种数则略有差异。说明少至２种引物的扩增产物（２７个ＲＡＰＤ标记）也能基本反映１６个芥菜变种间的遗传关系。但随着引物数和ＲＡＰＤ标记数的减少,１６个芥菜变种间的平均遗传距离递减,即从１９种引物、２４０个ＲＡＰＤ标记的７．３４减少到２种引物、２７个ＲＡＰＤ标记的２．３４。而遗传距离的变小,使划分芥菜变种的亲缘关系更加困难。因此,在利用ＲＡＰＤ技术研究芥菜变种间的遗传关系时,有必要保证一定数量的引物和ＲＡＰＤ标记。     

RAPD技术在水产经济动物种质资源和遗传育种研究中的应用

本文概述了ＲＡＰＤ技术在水产经济动物种质资源鉴定和遗传育种研究中的应用情况。主要包括物种基因组ＤＮＡ多态性的检测、物种及品种的分类与鉴定、亲缘关系及系统发育的分析、遗传图谱的构建和分子标记辅助育种。同时指出了ＲＡＰＤ技术的局限性和在水产经济动物遗传育种中的应用前景     

RAPD标记及其在茶叶科学领域的应用

随机扩增多态性ＲＡＰＤ是用于作物种质资源鉴定及其育种的分子标记,近年发展非常迅速,应用范围很广,从几个方面介绍ＲＡＰＤ标记在茶叶科学研究上的应用：（１）茶叶品种遗传连锁图谱的绘制;（２）茶叶种质资源鉴定及分类;（３）茶叶目标性关基因的标记研究。     

大豆育种过程中亲子遗传关系的RAPD研究初报

试验以组合８００２４×中１９亲本及其育成品系Ｂ_１，Ｂ_２为材料，用ＲＡＰＤ技术对其亲子关系进行了研究．１０个随机引物（１０ｂｐｓｅ）的ＰＣＲ扩增结果表明，双亲在遗传上有较大差异，母本８００２４有１３条特征带，父本中１９有６条特征带．其在子代中能够重组，使Ｂ_１，Ｂ_２均具有双亲ＲＡＰＤ标记的特征．但经过多代选择，双亲ＲＡＰＤ特征在育成的子代品系中的分布是不均衡的．Ｂ_１更多地继承了母本８００２４的绝大部分ＲＡＰＤ特征，遗传上更近于母本．Ｂ_２则表现出倾向于父本．这一结果与田间观察结果基本一致，说明用ＲＡＰＤ追踪育种过程，探讨亲子遗传关系是可行的．另外，试验观察到子代品系在继承双亲ＲＡＰＤ特征的同时，还出现了新的子代所特有的ＲＡＰＤ特征．产生这种超亲ＲＡＰＤ特征的真实原因及其意义有待进一步研究．     

大豆RFLP和RAPD研究现状

ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术近年来发展迅速．应用这些技术于作物遗传育种实践的前提条件是建立ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ分子标记连锁图，进而建立分子标记与重要在艺性状的连锁关系．大豆有些抗病性、生育期性状、形态性和品质性状等与ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ分子标记有连锁关系，分子标记有可能用于大豆育种的选择过程．ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术可用于评估大豆群体和品种资源，探索育种方法的分子基础，研究进行和分类，分析细胞质ＤＮＡ遗传变异．     

分子标记在植物遗传育种中的应用

本文介绍了同工酶、ＲＦＬＰ、ＤＮＡ指纹和ＰＡＲＤ４种分子标记的发展、原理和特点，对它们在植物遗传图谱构建、基因定位、变异后代的鉴定和选择、杂交育种、回交育种、杂种优势等研究领域中的应用作一展望和概述。     

家蚕的RAPD及其品种间差异

采用ＲＡＰＤ技术对家蚕基因组ＤＮＡ进行多态性研究，分析了各供试品种材料之间的遗传差异。结果表明，ＲＡＰＤ能反映各基因组之间丰富的多态性，聚类分析所得的各供试品种材料之间的亲缘关系和常规遗传分析的结论相一致。因此，认为ＲＡＰＤ可以作为家蚕分类及系统学研究的一种方法．     

应用RAPD技术分析大蒜种质遗传特性和检测蒜种纯度的研究

报道了用RAPD技术鉴定大蒜种质遗传特性和蒜种纯度的研究结果。从 10 5个随机引物 (OperonNo 1～ 5 ,OPE1～ 2 0 ,OPF1～ 2 0 ,OPG1～ 2 0 ,OPH1～ 2 0 ,OPI1～ 2 0 )中筛选出 12个有鉴别作用的引物。用筛选出的引物与 80份来自澳大利亚、泰国和我国 17个省、市的大蒜种质进行RAPD测定。确立了大蒜PCR反应体系、条件和程序 ,制定了凝胶电泳操作规程。所得RAPD带谱具有良好的多态性和特异性。大蒜种质的RAPD带谱差异与其农艺学性状差异吻合。根据RAPD带谱分析了大蒜种质的遗传特性和亲疏关系 ,研究区分了同物异名、同名异物的大蒜种质 ,进行了蒜种纯度鉴定试验。试验证明 ,RAPD技术是鉴定大蒜种质遗传特性和蒜种纯度的有效技术之一     

应用RAPD技术探讨红叶李、李和杏的亲缘关系

为了对红叶李Prunus cerasifera cv.Atropurpurea,李P.salicina和杏P.armeniaca的亲缘关系、品种识别及资源保存提供分子生物学依据,也为了验证传统的形态学分类方法,从132个随机引物中筛选出20个引物对红叶李、李和杏的8个材料进行了基因组DNA扩增,均具有多态性,共扩增出264条带,平均每个引物产生13.2个RAPD片段.RAPD带型及聚类分析表明:RAPD技术能将红叶李、李属植物和杏属植物完全分开,红叶李、李和杏之间表现出一定的亲缘关系,各属品种之间都有不同的遗传距离,证明RAPD技术可作为种和属水平的分类鉴定依据;利用红叶李、李和杏品种的特异谱带结合DNA指纹,可将参试的各品种鉴别出来,从而说明了RAPD技术能够用于种或品种之间的鉴定.图2表2参12     

利用RAPD分子标记分析玉米种质遗传多样性

以RAPD分子标记技术对玉米的10个品种的全基因组DNA进行PCR扩增,再用Popgene32软件和SPSS13.0软件分析扩增结果,研究10个玉米的种质资源遗传关系。结果表明:(1)所选20个引物可扩增出214条RAPD条带;(2)所选引物扩增条带的多态性比率为86.4%,RAPD分子标记扩增10个玉米品种间的相似性系数分别在0.316￣0.654之间;(3)用RAPD-PCR扩增条带的分析结果建立了遗传相关系数矩阵、构建了分子树状图、可将10个玉米品种分为3个类群;(4)RAPD分子标记适合于构建玉米的DNA指纹图谱,进行品种鉴定和遗传分析。     

RAPD技术在果树研究上的应用

RAPD技术是一种新兴的分子标记技术，它已在生物学领域得到广泛的应用和重视。但由于果树自身的特点，采用该技术研究起步较晚。对PAPD在果树品种鉴定、系谱分析、遗传图谱构建、基因标记等方面的应用及其研究进展进行了简要阐述。     

杏RAPD两种凝胶电泳指纹特点及PCR扩增片段的序列分析

为更好地将RAPD技术应用于杏品种资源鉴定及遗传基础的研究,文章首次在选用11碱基长度引物的优化技术体系基础上,分别使用两种凝胶对16个杏品种RAPD的PCR扩增产物进行电泳检测与DNA指纹比较。结果表明,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测出的谱带总数量以及多态性谱带的数量均高于琼脂糖凝胶,前者不存在或很少存在共迁移性的现象。根据两种电泳系统获得的标记信息对16个杏品种的遗传关系的分析发现,两者聚类结果存在一定差异。以此,提出了科学利用两种电泳的RAPD标记技术的策略。对随机挑选的24个片段进行克隆与测序,结果发现24个片段都是对应引物的RAPD扩增产物。在不同的11条序列中有3条是编码蛋白的基因片段,说明了RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时可以扩增编码蛋白的基因片段,能够较全面客观地反映不同杏品种间遗传上的差异。     

应用RAPD 技术探讨红叶李、李和杏的亲缘关系

为了对红叶李Prunus cerasifera cv .Atropurpurea , 李P .salicina 和杏P .armeniaca 的亲缘关系、品种识别及资源保存提供分子生物学依据, 也为了验证传统的形态学分类方法,从132 个随机引物中筛选出20 个引物对红叶李、李和杏的8 个材料进行了基因组DNA 扩增,均具有多态性, 共扩增出264 条带, 平均每个引物产生13.2 个RAPD 片段。RAPD 带型及聚类分析表明:RAPD 技术能将红叶李、李属植物和杏属植物完全分开, 红叶李、李和杏之间表现出一定的亲缘关系, 各属品种之间都有不同的遗传距离, 证明RAPD 技术可作为种和属水平的分类鉴定依据;利用红叶李、李和杏品种的特异谱带结合DNA 指纹, 可将参试的各品种鉴别出来, 从而说明了RAPD 技术能够用于种或品种之间的鉴定。图2 表2 参12     

梨RAPD扩增产物两种凝胶电泳指纹特点及其序列分析

尽管RAPD技术已经应用于梨种质资源遗传多样性研究,但是尚没有对11个碱基引物的RAPD优化技术在梨品种鉴定方面的深入研究,也缺乏对梨RAPD的PCR产物特点进行分析的报道。鉴于此,该实验首次开展了选用11个碱基引物的RAPD鉴定梨品种上的研究,并对PCR扩增产物的琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳的指纹图谱加以比较分析。结果表明PAGE电泳检测出的谱带的总数量以及多态性谱带的数量均高于前者。两种电泳指纹标记资料进行梨品种聚类的结果存在一定差异。通过对随机挑取的21个片段进行克隆与测序分析,结果发现21个片段都是对应RAPD引物的扩增产物,其中3条为编码蛋白序列,18条为非编码蛋白序列。     

RAPD技术在植物遗传多样性研究中的应用

从品种鉴定、分类、种质分析与收集、物种起源和进化、濒危植物检测 5个方面就RAPD技术在植物遗传多样性研究中的应用进行了综合评述 ,并对RAPD技术的局限性及其改进途径进行了讨论     

李属果树的RAPD分子标记研究进展

阐述了RAPD标记技术的基本原理与特点,同时综述了该技术近年内在李属果树品种(系)鉴定与分类、遗传多样性分析、亲缘关系分析、遗传连锁图谱构建以及基因标记等方面的研究进展,并对该技术存在的问题以及应用前景进行了探讨。     

弯孢属斑点组种间随机扩增多态性DNA(RAPD)分析

在形态分类的基础上,用筛选出的15个随机引物对弯孢属斑点组(Maculans group)内一些相似种,疑难种间及部分种内23个菌株进行了RAPD分析.结果显示,相似种和疑难种从树状聚类图上可以明确区分,与形态上的鉴定结果一致.说明了从形态上对这几个种鉴定的准确性;RAPD分析可以作为区分弯孢属相近种及明确疑难种分类地位的一种简便有效的手段;画眉草弯孢和间型弯孢种内存在较大的遗传分化,个别菌株如CU767和其他种聚在一起,其分类地位有待于进一步确定.