6种漂浮液对球虫卵囊浮集效果的比较试验

６种漂浮液对球虫卵囊浮集效果的比较试验商云霞，吕美兰（新疆石河子大学农学院动物科学系·８３２００３）检查粪样中的球也卵囊经常使用饱和食盐水，我们在工作中，特别是球虫实验室工作中，球虫卵囊的纯化是一项基础性工作，卵囊浮集效果的好坏直接影响卵囊计数的准确...     

漂浮液反向分离收集肝片形吸虫卵试验

肝片形吸虫寄生于反刍兽等肝胆管内引起的一种人兽共患吸虫病.以往对本病的诊断主要依赖于反复水洗沉淀法检查虫卵,此方法虽然简便易行、准确,漂浮法是利用比重比虫卵大的溶液将粪便中比重小的虫卵浮集于液体表面.主要应用漂浮比重较小的线虫卵、绦虫卵、球虫卵囊.吸虫卵因比重较大不能漂浮,但粪便中的微小杂质可以通过漂浮液上浮于液体表面.利用这一特点笔者选择饱和食盐水、尿素溶液作为漂浮液和清水对比,利用离心机短时间低速离心.试图将肝片形吸虫卵从牛粪便中反向分离出来(漂浮去渣集卵).试探一种更加快速、准确、含杂质少的收集吸虫卵方法.     

毒害艾美耳球虫未孢子化卵囊壁的分离与纯化

用毒害艾美耳球虫孢子化卵囊接种50只15日龄无球虫感染的雏鸡,感染后第6~12天,每隔12 h收集1次粪便,按常规方法分离卵囊。未孢子化卵囊经次氯酸钠溶液处理后,用1.1 mol/L蔗糖溶液漂浮法纯化卵囊。采用玻璃珠涡旋法破碎卵囊壁,最后用孔径10.0μm的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜过滤获得纯化的卵囊壁。研究结果为进一步研究毒害艾美耳球虫卵囊壁的结构及其蛋白组成奠定了基础。     

牛隐孢子虫卵囊分离和纯化方法的比较试验

运用3种粪便漂浮法、3种染色法和2种分离提纯法对10头犊牛的粪便进行卵囊检查、分离纯化，对这些方法进行比较。试验结果显示：饱和硫酸锌漂浮法结合姬姆萨氏染色法检查隐孢子虫卵囊，检出率最高、效果最佳；蔗糖密度梯度离心法分离纯化隐孢子虫卵囊。收集的卵囊最多，效果最好。     

尿素溶液浮集兔球虫卵囊效果试验

检查、收集兔粪样中的球虫卵囊,通常采用溶液漂浮法,其原理是任何大于球虫卵囊比重的溶液都可使球虫卵囊漂浮,但不同溶液浮集球虫卵囊效果各不一样。鉴于缺乏尿素溶液与其他溶液浮集卵囊效果比较,为此选择了尿素溶液、饱和食盐水、硫酸镁溶液和砂糖溶液,进行浮集卵囊比较试验。     

不同漂浮法对畜禽线虫卵的漂浮比较效果

在兽医临床家畜寄生虫检查中,粪便中查找寄生虫卵是临床常规检查项目之一.提高虫卵的检出率,寻求一种操作简便、检出率高的漂浮液,可为临床提供可靠的诊断资料.当前临床应用最广的是饱和盐水漂浮液.本论文通过对饱和盐水和sheather's蔗糖溶液以及馏水稀释sheather's蔗糖溶液配制成的不同密度的蔗糖溶液对于线虫卵的漂浮效果进行了比较.结果显示,饱和盐水溶液漂浮率明显高于sheather's蔗糖溶液漂浮率,此法具有方便易行,检出率高等特点,是一种便于在基层和临床检验室推广和使用的漂浮液.     

鼠隐孢子虫卵囊及子孢子的纯化

应用不连续蔗糖密度梯度离心法，对犊牛粪便中的鼠隐孢子虫卵囊进行了提取，经过两次漂浮和一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到纯净的卵囊，其中含有极少量的杂质，不含其他微生物。卵囊的回收率为３７％。纯化的卵囊脱囊后，经过一次不连续蔗糖密度梯度离心，得到很纯的子孢子。子孢子的回收率为４７．６％。纯化的卵囊及于孢子可用于隐孢子虫的核酸分析、生物化学、免疫学及细胞培养等方面的研究。该法具有简便、快速、大量分离卵囊的优点。     

鸡堆型艾美耳球虫南昌株分离纯化与初步鉴定

对南昌市场购买的成年鸡肠道,采用饱和盐水漂浮法检查,同时从肠内容物中获取混合球虫卵囊.在制备好的琼脂薄层的载玻片上滴加稀释适度的混合卵囊液.在显微镜下用手术刀片小心切割琼脂薄层,达到琼脂薄层上仅剩单一卵囊的严格要求.把单一卵囊包襄后经口感染雏鸡,又从感染雏鸡粪便中收集大量球虫卵囊待孢子化后再次重度感染雏鸡,掌握该球虫虫...     

柔嫩艾美耳球虫卵囊DEAE凝胶纯化法的建立

目的建立柔嫩艾美耳球虫卵囊DEAE凝胶纯化方法。方法常规方法从鸡盲肠内容物或粪便漂浮、离心获取卵囊,孢子化后经初步纯化,用EDAE凝胶阴离子交换再次纯化,同时进行了2种缓冲液的选择。结果缓冲液1效果更好,回收率达到79．2％,得到纯度更高。结论本研究建立了的柔嫩艾美耳球虫卵囊纯化方法简单易行,纯化效果好。     

牛源环孢子虫的形态学特征观察

对首次在乳牛粪便中发现的疑似环孢子虫卵囊的形状、大小、抗酸染色和孢子化等形态学特征进行了观察，探讨了该原虫的纯化方法。结果显示，牛源环孢子虫卵囊呈球形，直径6～10μm。直接涂片时可见卵囊内含折光性较强的成团小球体，呈桑椹胚状，淡绿色。碘液染色不着色。经改良抗酸染色后，卵囊着色变化较大，呈淡红色、深红色或不着色。新排出的未孢子化卵囊培养后可观察到孢子化的卵囊，内含2个孢子囊，每个孢子囊内含有2个折光性较强的子孢子。这些特征与人或其他动物的环孢子虫一致。环孢子虫感染阳性的粪便经Sheather＇s蔗糖漂浮法浓集后，再经蔗糖密度梯度离心，可以得到较为纯净的卵囊。     

兔的隐孢子虫在鸡胚上培养成功

本试验采用硫酸锌漂浮法收集兔粪中的隐孢子虫卵囊,并用蔗糖梯度离心法进行纯化,卵囊经胰酶和兔胆汁消化脱囊产生子孢子后,由尿囊腔途径接种10日龄鸡胚,8 d后收获检查。结果发现尿囊绒毛膜(CAM)上有大量不同发育阶段的隐孢子虫虫体,并     

应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。     

4种漂浮液对猫粪样中曼氏迭宫绦虫卵的浮集效果

以水洗沉淀法作对比,比较了硫代硫酸钠、硫酸镁、氯化钠和硫酸锌4 种漂浮液对猫粪便中曼氏迭宫绦虫卵的浮集效果。结果表明,沉淀法的阳性粪便检出率为100%,硫代硫酸钠、硫酸锌、硫酸镁和氯化钠4 种漂浮液的阳性粪便检出率分别为100%, 97. 5%,62.5%和35%; 4 种漂浮液的浮集率分别为98.7%,10.1%,30.2%和3.0%。经F检验和多重比较方法分析,结果表明,硫代硫酸钠、硫酸镁、氯化钠和硫酸锌4种漂浮液中对虫卵的浮集效果差异显著,硫代硫酸钠漂浮液与沉淀法检查结果差异不显著,表明硫代硫酸钠漂浮液可替代沉淀法检查猫曼氏迭宫绦虫卵。     

影响鸡球虫单卵囊分离纯化的因素分析

单卵囊分离技术是获得品种单一、基因型纯净的卵囊,以便更有效的鉴别球虫种类和建立球虫纯种体系的重要手段.论文主要从雏鸡日龄、卵囊侵袭力、分离方法和材料的选择三个方面来分析其对鸡球虫单卵囊分离纯化的影响,从而为单卵囊分离技术的改进提供指导,进一步为球虫的各项研究提供基础.     

鸡球虫单卵囊分离技术与雏鸡感染试验

把收集到的新鲜带血鸡粪用饱和食盐水漂浮法收集鸡球虫卵囊,在装有25 g/L重铬酸钾溶液的平皿中保存,置于29℃的恒温箱中2 d~3 d,得到混合种孢子化卵囊。生理盐水稀释卵囊液至每滴1个~2个卵囊,在载玻片上用自制的毛细吸管在显微镜下吸取1个卵囊于备好的40 g/L琼脂糖薄片上,确保只有1个卵囊,用手术刀切割琼脂糖薄片并包埋卵囊,即完成单卵囊分离。将包埋好的单卵囊感染雏鸡,感染率为60%~90%。     

堆型艾美耳球虫与柔嫩艾美耳球虫卵囊最短孢子发育时间的测定

将收集到的新排出的堆型艾美耳球虫(E.acervulina)与柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)卵囊于29℃静态系统中孢化。以30min为间隔，对卵囊孢子发育的4个阶段在显微镜下进行观察。以1h为间隔，用发育中的卵囊连续接种无球虫鸡，以确定最短孢子发育时间(MST)。对影响孢子发育的外部因素进行了初步探讨。用堆型艾美耳球虫比较不同卵囊浓度，不同悬液深度在卵囊孢化过程中第20h时子孢子形成的卵囊百分率。E.acervulina与E.tenella的MST分别为11b与18b。卵囊浓度和悬液深度与孢子发育时间呈明显反比关系。     

巢式PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊,从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作起始PCR(Primary PCR)模板,以起始PCR的产物为模板进行巢式PCR(Nested PCR),用2对人工合成寡核苷酸分别作为两个PCR的引物,扩增片段大小分别为1325bp和820bp。优化了Mg2+浓度、引物浓度和dNTP浓度,并进行了特异性检验。建立的巢式PCR具有隐孢子虫属特异性,不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段,而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后,起始PCR和巢式PCR最低检测值卵囊分别为2 86×103个/ml和≤2 86个/ml;从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA,尔后经过DNA纯化试剂盒纯化,其起始PCR和巢式PCR粪便中卵囊最低检测值分别为2 86×107个/g和≤2 86个/g。有望发展为试剂盒。     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

肠道寄生虫检查方法的改进

应用粪便样品彻底过筛的方法,对寄生虫病患者,委托人和兽医人员都有好处。在兽医临床中应用最多的粪便漂浮法,对虫卵和卵囊只有80‰的检出效果,而且不能发现大部分吸虫卵和线虫的幼虫(表1)。用改良法能发现寄生虫感染的更广泛的种类和数量,因此,减少了重复检查和诊断的不可靠性。漂浮法的依据是原虫的卵囊和蠕虫虫卵与某些化学溶液(糖、盐、硫酸锌、硝酸钠等)之间的比重不同。虫卵和卵囊浮在表面,而较重的粪渣沉于底层。有些卵,例如吸虫卵有象粪渣一样的重力,因而漂浮     

用核酸染色和小鼠感染力方法评估脱囊和热处理后的隐孢子虫卵囊的活力

温度是影响隐孢子虫活力的重要环境因素之一.对于疾病暴发的风险评估需要有效的方法来准确分析卵囊的活力.本试验应用核酸染色和小鼠感染力2种方法研究了脱囊和热处理后完整卵囊和不完整卵囊的活力,并与新鲜卵囊进行了对比.结果表明,脱囊和中性温度热处理后的完整卵囊保持活力.然而,高温处理后的完整卵囊以及脱囊和热处理后的不完整卵囊完全丧失活力.对于新鲜卵囊,灭活卵囊,以及在脱囊后或在40℃和70℃处理后的完整和非完整卵囊,核酸染色法和小鼠感染力法的结果相对应;但是对于50℃和60℃处理后的完整卵囊这2种方法不对应.