K88,K99,987P基因工程三价苗野外应用效果的初步观察

对K_(88)、K_(99)、987P基因工程三价苗野外应用效果观察是通过对几个猪场的纵向比较,邻圈间、棚舍间、猪场间横向平行比较和被动免疫仔猪的接触感染三种方式进行的。通过8个猪场的纵向比较,结果发病率减少11～46.4个百分点,平均减少25.4个百分点;死亡率减少7.6～29.1个百分点,平均减少21.4个百分点。应用基因工程三价苗后,这些场发病率控制在5％左右,死亡率控制在1％左右。横向平行比较结果,邻圈间、棚舍间免疫组发病率减少约40个百分点,死亡率减少约25个百分点。免疫场与对照场间比较,发病率分别减少54个和36个百分点,死亡率分别减少54个和28个百分点。接触感染结果,被动免疫仔猪无一头发病,也无死亡,而寄奶母猪亲生仔猪则发病率100％,死亡率98％。     

仔猪黄痢K88、K99基因工程菌、987P无毒菌三价苗的研制

仔猪黄痢主要危害1月龄以内的新生仔猪,尤其是1周龄内仔猪的发病率和死亡率最高,多以急性、水样腹泻为特征,预防仔猪黄痢最有效的措施是采用疫苗对怀孕母猪免疫接种,新生仔猪通过吮吸母猪初乳获得被动免疫。本疫苗是通过分别带有K88、K99、987P纤毛抗原的大肠埃希氏菌,接种于适     

K88,K99,987P基因工程三价苗的应用效果观察

仔猪黄痢是严重危害新生仔猪的疾病之一。经调查，本市该病的发病率在30％左右，目前虽然可用多种抗菌药物进行治疗，终因新生仔猪日龄小、体质弱而效果不佳。近年来，我们应用K88、K99、987P基因工程三价苗对怀孕母猪作产前兔疫注射，取得了明显的预防效果。1材料与方法1．1疫苗K88K99、987P基因工程三份苗，由上海市畜牧兽医研究所研制并提供，批号：9511。1．2分组1．2．1选择522头怀孕母猪注射基因工程三价苗，另选50头怀孕母猪不注射疫苗作为对照。1．2.2选前胎仔猪有黄痢病史的怀孕母猪42头，用基因工程三价苗免疫，另选前股仔猪有…     

K_(88)、K_(99)基因工程菌菌毛抗原的提纯及其检测

采用SephadexG－100凝胶过滤和酸盐沉淀两种方法从基因工程菌（GHG001）提纯K88、K99菌毛抗原,经SDS－PAGE测定,所提纯的K88、K99抗原的分子量分别为25000和17000道尔顿.     

猪K88、K99、987P、F41埃希氏大肠杆菌高密度发酵培养技术的初步探讨

采用高密度发酵和普通深层通气两种方法培养含K88、K99、987P、F41菌毛抗原的四株猪埃希氏大肠杆菌,对其培养液进行活菌数、OD值、pH值、效价的测定。实验结果表明,运用高密度发酵方法培养,各菌活菌数可达4.1×1010~4.9×1010CFU/mL,效价为211~213;运用普通深层通气方法培养,各菌活菌数为0.51×1010~0.59×1010CFU/mL,效价为24~25,可选择高密度发酵方法替代普通深层通气方法培养,用于制备猪埃希氏大肠杆菌K88、K99、987P、F41四价菌毛提纯苗。     

双价工程菌K_(88)K_(99)表达蛋白提取方法的探讨及抗原性分析

本研究应用酸脱毛法 ,将供试工程菌培养物进行脱毛、提取制备表达蛋白 ,并对酸脱毛法的最适pH值、最佳温度、最佳时间进行了探讨 ,SDS_PAGE分析结果证明 ,酸脱毛法脱毛pH值为 2、脱毛温度为 6 0℃、脱毛时间为 30分钟时 ,表达蛋白分离提取的效果最佳。对提取蛋白进行琼扩 ,SDS_PAGE、Western_blot分析 ,结果表明所提取蛋白具有较高的抗原活性 ,并能被K88K99单克隆抗体所识别。     

猪链球菌三价灭活苗的制备及对小鼠免疫效果的评价

为制备猪链球菌(SS)三价灭活苗并评价其对小鼠的免疫效果,本研究利用筛选出的3株SS菌株(代号/血清型分别为HF2/SS2、BB15-4/SS3、HBgu18-4/SS4)作为疫苗株,甲醛为灭活剂、ISA 201VG矿物油为佐剂制备灭活前分别为1.0×109cfu/mL、2.0×109cfu/mL,4.0×109cfu...     

母源抗体对猪瘟E2基因工程苗免疫效力的影响

通过临床免疫效果的监测,对比研究母源抗体对猪瘟兔化弱毒苗及E2基因工程苗免疫效力的干扰。结果表明,当母源抗体平均阻断率70%时,其对猪瘟兔化弱毒苗存在显著干扰(免疫前、一免后、二免后平均阻断率分别为86.6%,58.4%、67.3%),而对E2重组苗几乎不干扰(免疫前、一免后、二免后平均阻断率分别为86.1%、73.3%、81.4%);在低水平母源抗体时(平均阻断率40%),2种疫苗均能迅速刺激机体产生相应的免疫应答。本次研究结果表明E2基因工程苗既能产生较好的免疫应答反应同时又可对抗母源抗体的干扰。     

仔猪黄痢K88-K99-987p-F41多价菌毛疫苗的制备及小鼠免疫试验

为了更好地预防仔猪黄痢,选取野生分离菌株HN2001（K88ab）、HN2002（K88ac）、HN2003（K88ad）、HN2004（K99）、HN2005（987p）和HN2006（F41）培养后用低温磁力搅拌法提取菌毛,制成5批多价菌毛混合油乳剂灭活苗。试验结果表明,5批多价灭活疫苗对小鼠的平均保护率达95．0％,为进一步进行本体动物试验提供了有价值的参考资料。     

适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选

为筛选卵黄抗体的优良佐剂,以3株猪源致病性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白为模式抗原,分别与6种佐剂制备多价菌毛蛋白疫苗,免疫海兰褐壳蛋鸡。结果显示,3次免疫后,所有试验组蛋鸡产蛋率均有不同程度下降,但SPA、ISCOMs、弗氏佐剂、蜂胶佐剂组的产蛋率下降程度较为轻微;对鸡体血清抗体和制备获得的卵黄抗体的效价检测结果均显示:SPA和ISCOMs组虽较SPB、SPC、弗氏佐剂组抗体水平略低,但持久度较好,且通过对蛋鸡外观形态和注射部位组织变化情况的观察显示,两者不会刺激鸡体热反应或炎症反应,无任何表观副作用。因此,更适合作为蛋鸡制备猪源ETEC卵黄抗体的优良佐剂。     

大肠杆菌MM—3基因工程活菌苗免疫母猪所产仔猪抗K_(88ac)及抗LTB抗体动态

应用BA-ELISA,分别检测了用大肠杆菌MM-3基因工程活菌苗免疫妊娠92d母猪所产仔猪血清和消化液中抗K_(88ac)及抗LTB抗体的动态消长.结果表明,新生仔猪在吃初乳后24h内,血清及消化液中抗K_(88ac)及抗LTB抗体水平均很高,但以后逐渐下降,1周后IgM、2～3周后IgA、3～4周后IgG分别下降到最低水平;仔猪35日龄时,抗体水平有所回升.消化液中抗体水平比血清中抗体水平下降快,并与母体乳汁中的抗体水平呈正相关关系.     

11株新城疫病毒广西分离株P基因的克隆和序列分析

根据基因库的新城疫病毒(NDV)的磷蛋白(P)基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术对11个NDV广西分离株的P基因进行RT-PCR扩增和序列测定,P基因阅读框的核苷酸序列全长均为1188bp,编码395个氨基酸。核苷酸及氨基酸全序列比较分析,结果表明:11个NDV广西分离株与10个参考株的核苷酸序列同源性为81.2%～97.8%,氨基酸同源性为78.8%～97.0%。