四川部分地区山羊腹泻病主要病原菌的分离鉴定及耐药性检测

为了解四川部分地区山羊细菌性腹泻的主要病原菌及其对抗菌药物的敏感性,试验采用产肠毒素大肠杆菌K99基因、沙门氏杆菌invA基因、志贺氏菌ipaH基因和奇异变形杆菌ureR基因的特异性引物,以山羊粪便样本提取的总DNA为模板,采用四重PCR方法检测,并对检出的阳性样本进行细菌的分离鉴定,同时采用药敏纸片法检测分离菌对18种抗菌药物的敏感性。结果表明:在226份粪便样本中产肠毒素大肠杆菌的PCR阳性检出率为55.3%(125/226),沙门氏杆菌的PCR阳性检出率为18.6%(42/226),志贺氏菌的PCR阳性检出率为29.2%(66/226),奇异变形杆菌的PCR阳性检出率为15.9%(36/226),同时检出两种和两种以上病原菌的阳性检出率为29.6%(67/226)。从226份粪便样本中分离到产肠毒素大肠杆菌104株,分离率为46.0%(104/226);沙门氏杆菌32株,分离率为14.2%(32/226);志贺氏菌54株,分离率为23.9%(54/226);奇异变形杆菌23株,分离率为10.2%(23/226);4种病原菌的PCR阳性检出率明显高于分离率。4种病原菌对头孢噻肟、大观霉素、丁胺卡那霉素、头孢拉定4种抗生素高度敏感,而对其余14种抗菌药物均呈不同程度的耐药。说明四川部分地区山羊粪便中4种病原菌的带菌率较高,是引起山羊腹泻的重要病原菌。     

火烈鸟腹泻沙门菌分离鉴定、致病性及耐药性检测

为了分析火烈鸟(Phoenicopterus ruber)腹泻沙门菌(Salmonella)的致病性及耐药性情况,2016—2020年采集动物园中患腹泻火烈鸟的粪便、肛拭子和死亡火烈鸟的肝脏等病料组织102份,采用细菌分离鉴定和PCR方法进行沙门菌鉴定,采用人工感染小白鼠致病性试验和K-B药敏纸片法分别检测分离菌株的致病性和耐药表型情况。结果显示:从102份病料组织中分离得到89株沙门菌,其中75株沙门菌对小白鼠具有致病性,这75株沙门菌分离菌株对链霉素、阿莫西林、氨苄西林等14种药物耐药率在45.3%以上,对其他药物的耐药率为13.3%～22.7%,且呈现多重耐药性,耐12、11、10种药物的分离菌株最多,分别占分离菌株的16.0%、18.7%和17.3%。说明该动物园分离的火烈鸟腹泻沙门菌对小白鼠具有致病性,耐药性严重且呈现多重耐药性。     

吉林省规模化猪场沙门菌携带情况调查

为了解吉林省规模化猪场表观健康猪群中沙门菌的携带及耐药性流行情况,本研究采集吉林省猪直肠棉拭子450份,经过理化鉴定与分子生物学鉴定,共获得17株沙门菌,分离率为3.78%(17/450)。17株沙门菌分离株进一步血清学鉴定,其中鼠伤寒沙门菌8株、猪霍乱沙门菌有7株、德尔卑沙门菌2株。对15种抗生素耐药性实验结果显示,17株猪源沙门菌分离株在4重耐药与11重耐药之间均有分布。     

河南省肉鸡沙门菌血清型分布及耐药检测

为了解河南省肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌血清型分布及耐药性,采用随机抽样的方法采集肉鸡屠宰加工厂的肉鸡样本,按照国家标准进行沙门菌的定性检测和血清型鉴定,通过微量肉汤稀释法对阳性分离株进行药敏试验。结果表明:554份肉鸡样本中检出沙门菌77份,其中肛拭子阳性率(32份)8.7%,肉鸡胴体阳性率(45份)24.2%。共鉴定出5种血清型,以印第安纳沙门菌和肠炎沙门菌为主。耐药性结果显示分离株对磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类等均具有严重的多重耐药性,其中,喹诺酮类耐药性高达100.0%,耐药最小抑菌浓度分布主要集中在中高浓度区间。提示河南省肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌污染以印第安纳沙门菌和肠炎沙门菌血清型为主,且存在较严重的耐药性,应从源头加强肉鸡孵育、养殖环节卫生控制,减少沙门菌的污染和抗菌药物的使用。     

新疆部分地区肉牛源沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

了解新疆部分地区表观健康肉牛沙门菌带菌状况及分离株的耐药性,为沙门菌的防控及合理用药提供科学依据。采用传统培养基培养、生化鉴定与PCR相结合的方法对新疆部分地区肉牛养殖场采集的753份肛拭子进行沙门菌的分离鉴定,并采用微量肉汤稀释法对分离株进行药敏试验。结果显示,共分离到沙门菌阳性菌株63株,总污染率为8.37%(63/753);63株沙门菌分离株对10种抗菌药物表现出不同程度的耐药性,对甲氧苄啶、氯霉素、四环素、磺胺异恶唑、链霉素、氨苄西林、阿莫西林、诺氟沙星、环丙沙星、氟苯尼考的耐药率依次为97.4%、95.7%、74.7%、61.5%、54.2%、29.9%、45.5%、16.6%、14%和11.2%。结果表明,新疆部分地区表观健康肉牛存在一定程度的沙门菌污染,沙门菌分离株耐药状况较为严重。     

冷鲜肉食品中沙门菌检测及生物学特性分析

为了分析都江堰地区冷鲜肉食品中沙门菌的生物学特性,从都江堰地区冷鲜肉食品加工厂、超市等采集冷鲜肉食品样品53份。采用细菌分离、形态学观察、培养特性、生化试验和PCR等方法对采集的53份样品进行沙门菌检测,结果显示,从53份冷鲜肉食品样品中分离到30株沙门菌。致病性试验结果显示,24株分离菌株为致病性沙门菌。采用玻板凝集试验检测沙门菌血清分型情况,结果显示,分离的30株沙门菌包括8种血清型,其中以猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌为主要流行血清型,分别占分离菌株的23.3%、20%、20%。耐药性结果显示,30株沙门菌分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、新霉素等6种药物耐药性比较严重,耐药率在50.0%~100%之间,且呈现多重耐药性。表明都江堰地区冷鲜肉食品中沙门菌污染严重,血型分型呈现多样性分布,耐药性严重,呈现多重耐药性,应引起重视。     

贵州省山羊源流产细菌调查及致病机理初探

为调查贵州省细菌性山羊流产疫病的主要原因,分析山羊源流产细菌对正常怀孕动物免疫平衡的影响,本试验采集贵州省6个地区(州、市)12个规模养羊场临床健康和发病流产山羊的胎儿、子宫和母羊的阴道棉拭子样本共计107份进行细菌分离和鉴定,采用药敏纸片琼脂扩散法对3种主要羊源分离菌进行20种抗生素的耐药性调查,并用羊源流产细菌建立BALB/c小鼠流产模型,通过ELISA方法对妊娠相关细胞因子和激素进行测定。结果显示,从采集的107份样本中共分离到13个属细菌共302株,其中发病流产山羊生殖器官中分离的细菌种类多于临床健康山羊;流产山羊生殖器官中分离的羊源细菌耐药率高于临床健康山羊细菌耐药率;3种主要羊源流产细菌埃希氏菌、葡萄球菌和链球菌均可引起怀孕BALB/c小鼠发生不同程度的流产,流产率为埃希氏菌>葡萄球菌>链球菌;胚胎吸收率为埃希氏菌>葡萄球菌>链球菌;与空白对照组相比,各试验组BALB/c小鼠血清中的IFN-γ、IL-2含量上升,而IL-4、IL-10和孕酮含量降低。结果表明,贵州省细菌性山羊流产的发生与山羊生殖器官细菌种类多少、耐药性高低有一定相关性,推测山羊源流产细菌可能通过影响怀孕山羊的主要妊娠相关细胞因子和激素的含量导致山羊流产。     

致仔猪腹泻沙门菌分离鉴定与耐药性分析

为了鉴定致仔猪腹泻沙门菌并分析耐药性。从中牟地区规模化的养殖场采集患腹泻仔猪粪便、肠内容物等样品120份,通过分离鉴定的方法鉴定出57株沙门菌。人工感染小鼠致病试验结果表明,32株为致病性沙门菌。采用K-B药敏纸片法对32株致病性沙门菌进行药敏试验并分析耐药性,结果显示,32株致病性沙门菌对头孢曲松、头孢他啶、环丙沙星等4种药物耐药性在25. 0%～37. 5%之间;对氟苯尼考、阿米卡星、强力霉素等7种药物耐药性在40. 6%～78. 1%之间;对大观霉素、新霉素、阿莫西林等5种药物耐药性在87. 5%～100%之间。结果表明,从腹泻仔猪体内分离到32株致病性沙门菌对常用的抗生素具有很强的耐药性。     

青海西宁地区猪肉食品中致病性沙门菌耐药性分析

为了分析青海西宁地区猪肉食品中沙门菌致病性、血清型及耐药性流行情况,从青海西宁地区屠宰场、零售店、超市等采集猪肉食品样品246份进行沙门菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验、Kauffmann-White法、K-B药敏纸片法分别检测沙门菌的致病性、血清型及耐药性。结果显示,分离得到117株沙门菌中56株对小鼠具有致病性;分离的56株致病性沙门菌属于10种血清型,以猪霍乱沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌3种血清为主要流行致病血清型,分别占致病菌株的26.8%、21.4%和19.6%;分离的56株致病性沙门菌分离株对氨苄西林、新霉素、阿莫西林等9种药物耐药率在50%以上,对其他药物耐药率在12.5%～35.7%。表明青海西宁地区猪肉食品中分离沙门菌血清型较为复杂,且耐药性严重。     

华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。     

山羊4种腹泻病原菌多重PCR检测方法的建立

为建立检测引起山羊腹泻的4种主要病原菌的多重PCR方法,本研究针对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K99基因,沙门菌invA基因,志贺氏菌侵袭性质粒H(ipaH)基因和奇异变形杆菌ureR基因设计4对特异性引物,通过对反应条件优化,建立快速检测引起山羊腹泻的4种主要病原菌的多重PCR方法,并应用该方法检测山羊腹泻样品。结果显示该多重PCR方法对巴氏杆菌等其它6种细菌无扩增;其敏感性分别为ETEC103cfu/mL、沙门菌102 cfu/mL、奇异变形杆菌102 cfu/mL、志贺氏菌103 cfu/mL;经检测该方法稳定性也好。应用该多重PCR方法对21份山羊临床腹泻样品的检测结果与细菌分离鉴定结果一致,无漏检。本研究建立的多重PCR方法可实现从山羊粪便样品中同时检测4种腹泻病原菌,对山羊腹泻病原菌的快速检测提供了技术支持。     

华中地区鸡源沙门菌分离鉴定及耐药性分析

为了探明华中地区种鸡场沙门菌(Salmonella)的优势血清型和耐药情况,本研究从湖北、河南、湖南等省市22个规模化鸡场采集病鸡、死胚及弱雏组织样品3 724份,通过分离培养、生化试验、PCR鉴定及血清型试验确定分离菌种属及其血清型,并采用Kirby-Bauer法对分离菌株进行了耐药性分析。结果显示,本试验从3 724份病料中共分离鉴定出124株沙门菌,其中79株为D群肠炎沙门菌(63.71%,79/124),34株为D群鸡白痢沙门菌(27.42%,34/124),8株为B群鼠伤寒沙门菌(6.45%,8/124),有3株沙门菌未能确定血清型。O抗原鉴定79株肠炎沙门菌和34株鸡白痢沙门菌为O9,8株鼠伤寒沙门菌为O4。H抗原鉴定79株肠炎沙门菌为Hg,m,8株鼠伤寒沙门菌为Hi。药敏试验结果显示,124株分离菌株对萘啶酸、氨苄青霉素、四环素和多西环素耐药率分别为95.97%(119/124)、91.94%(114/124)、57.26%(71/124)和70.16%(87/124);对复方新诺明和红霉素耐药率分别为25.81%(32/124)和12.10%(15/124);对氯霉素、庆大霉素、头孢噻肟和卡那霉素耐药率分别为6.45%(8/124)、1.61%(2/124)、1.61%(2/124)和0.81%(1/124);对左氧氟沙星、阿米卡星和多黏菌素B完全敏感。99.19%(123/124)的分离株至少对一种药物耐药,87.10%(108/124)的分离株表现多重耐药。本研究为华中地区养鸡场沙门菌的诊断及防控提供了数据支撑。     

广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。     

华东地区沙门菌流行病学及耐药性分析

沙门菌病是一种严重危害人类健康和养殖业发展的人畜共患病,为了解华东地区沙门菌的分子流行情况,本研究采用选择性培养基和PCR分离鉴定沙门菌,然后利用PCR检测沙门菌临床分离株的血清型及毒力因子,并用药敏纸片法检测其耐药性。结果显示,本研究分离鉴定出48株沙门菌,分离率为16.84%。血清学结果显示所检测的48株沙门菌中鼠伤寒沙门菌占64.58%,肠炎沙门菌占6.25%,其他血清型占29.17%。毒力基因检测发现除sopE基因分布率为25%外,其他15个毒力基因分布率可达97%以上。药敏试验结果显示沙门菌分离株对常见抗生素具有不同的抗性和敏感性,并且耐药性十分严重,对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、新霉素、大观霉素、四环素、利福平、复方新诺明等抗生素的耐药率均超过50%以上。检测结果说明,华东地区沙门菌主要血清型为鼠伤寒沙门菌,且毒力基因分布广泛,多重耐药性菌株十分流行。     

云南省红河州某县生猪屠宰场沙门菌的分离鉴定分析

沙门菌是重要的食源性病原菌,当今严重威胁着人类健康.为探究云南省红河州某县生猪屠宰场沙门菌污染情况,此次自2019年9月至2021年10月分别进行9次样品采集,每次采样大于100份不同的样本,共采集屠宰场样品1530份,总的样本中分离沙门菌272株,总检出率为17.8％.通过分离签定及耐药性试验得出屠宰环节不同,导致生猪胴体沙门菌的污染的影响也不同,通过不同环节菌株的分离签定是分析沙门菌在屠宰生产环节的动态变化的基础.     

禽源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

2013年对江苏、安徽、山东、浙江等地的禽场进行了沙门菌分离、鉴定和耐药性分析。从506份样品中分离获得119株沙门菌,鸡、鸭和鹅的沙门菌分离率分别为28.35%(114/402)、5.40%(4/74)和33.33%(1/30)。鸡源菌株均属于D群,鹅源菌株属于C1群,鸭源菌株分属于C1和E1群。择70株进行了21种抗菌药敏感性试验,结果显示,所有分离株均表现出不同程度的耐药性,分离株对萘啶酸耐药最为普遍,耐药率高达90.00%,其次为四环素(72.86%)、强力霉素(69.57%)、链霉素(62.86%)、复方新诺明(58.57%)和大观霉素(52.86%)。87.14%的分离株耐3种以上抗菌药,其中有1株可耐9种药物。耐6种抗菌药的菌株数量最多,约占37.14%,最常见的多重耐药谱为强力霉素/萘啶酸/链霉素/大观霉素/四环素/复方新诺明。     

2株犬源沙门菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解泰安市部分地区宠物源沙门菌的感染情况、耐药表型与产超广谱β内酰胺酶（Extended-SpectrumΒ-Lactamases,ESBLs）等耐药基因的携带情况。在泰安市3家宠物医院采集84份犬、猫的肛拭子样品进行沙门菌的分离培养,分别使用微生物质谱鉴定和PCR方法鉴定沙门菌;使用血清凝集试验对分离株进行沙门菌的血清型鉴定;同时检测分离株对14种抗生素的敏感性;采用双纸片协同法对沙门菌进行产ESBLs初筛和确证实验,并检测了4类常用抗生素的18种耐药基因。本研究共分离到2株来自健康犬的沙门菌,且均为肠炎沙门菌,犬源沙门菌的分离率为3.45%(2/58)。2株沙门菌均只对红霉素具有耐药性。其中1株菌检测到β-内酰胺类中的blaCTX-M基因,氨基糖苷类中的aaC4基因,喹诺酮类中的aac (6’)-Ib-cr,qnrA,oqxA基因。本研究从84份犬、猫样品中分离到2株肠炎沙门菌,看似表观健康的犬,存在沙门菌感染情况,提示需要重视宠物来源人兽共患病原菌所带来的的潜在风险。     

市售鲜畜肉中沙门菌的血清型及耐药性研究

为了研究市售新鲜畜肉(猪肉、牛肉)中污染的沙门菌血清型及其耐药性,试验以2012—2014年南宁市售384份新鲜猪肉、牛肉分离得到的92株沙门菌疑似菌株为研究对象,试验采用GB4789.4—2010血清学鉴定的方法以及Kirby-Bauer法分别检测分离株的血清型及耐药性。结果表明:从分离株中共鉴定出21种血清型,主要血清型为德比沙门菌(51.1%)以及伦敦沙门菌(13.0%);分离株对四环素的耐药率最高(70.7%),其次为氯霉素、甲氧嘧啶、复方新诺明及氨苄西林,除11株对20种测试药物全部敏感外,其余81株均表现不同程度的耐药性,其中三重及以上的耐药菌株占56.5%,分离株最多可耐10种抗生素。说明南宁市售新鲜猪肉、牛肉中污染的沙门菌血清型复杂,多重耐药性问题比较严重。     

断奶仔猪腹泻病原菌的分离鉴定及药敏试验

为鉴定承德地区断奶仔猪腹泻病原菌并分析其耐药性,从承德地区不同养猪场采集腹泻断奶仔猪的肝脏、肛拭子、粪便等样品120份,试验采用细菌学鉴定法、K-B药敏纸片法进行细菌分离鉴定与药敏试验。结果显示,从采集的120份样品中分离得到了大肠杆菌42株、沙门菌23珠、志贺菌12株,42株大肠杆菌分离株对阿莫西林、氟苯尼考、新霉素等7种药物耐药率在59.5%以上,对头孢噻呋、头孢曲松、恩诺沙星等4种药物耐药率为14.3%～31.0%;23株沙门菌分离株对阿莫西林、氟苯尼考、新霉素等8种药物的耐药率在47.8%以上,对头孢噻呋、头孢曲松、恩诺沙星3种药物的耐药率为13.1%～34.8%;12株志贺菌分离株对阿莫西林、氟苯尼考、新霉素等7种药物的耐药率在50.0%以上,对头孢噻呋、头孢曲松、恩诺沙星等4种药物耐药率为16.7%～33.3%。研究为该地区断奶仔猪细菌性腹泻的防控提供理论基础。     

莱阳地区鸡场沙门菌分离鉴定与耐药性分析

为了分析莱阳地区鸡场中沙门菌的流行情况和耐药性情况,2022-2023年采集莱阳地区中56个鸡场中疑似沙门菌感染的鸡的肛拭子、粪便、肝脏、脾脏及肾脏病料组织样品213份,采用细菌分离培养、革兰氏染色、生化试验鉴定及PCR扩增鉴定等多种方法进行沙门菌分离鉴定。采用人工感染试验动物和K-B药敏纸片法对分别检测分离的沙门菌的致病性及对常用药物的耐药性。结果表明,从莱阳地区中56个鸡场中疑似沙门菌感染的鸡的肛拭子、粪便、肝脏、脾脏及肾脏病料组织样品213份中分离得到119株沙门菌,其中82株菌可以引起雏鸡的发病与死亡,对雏鸡的死亡率在40%之间;82株致病性沙门菌对磺胺间甲氧嘧啶、多西环素、新霉素等8种药物耐药率在58.5%～100.0%之间,对其他药物存在不同程度耐药性。结果表明,从莱阳地区鸡场中得到92株致病性沙门菌对常用的抗菌药产生不同的耐药性。本研究为莱阳地区鸡场中沙门菌的流行病调查及指导临床合理用药提供参考依据。