诸葛菜基因启动子的分离

利用启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２首次从诸葛菜总ＤＮＡ中克隆了７个具有启动功能的ＤＮＡ片段，转化Ｅ．ｃｏｌｉ表明最高卡那霉素（ｋｎａ）抗性为１４０μｇ／ｍｌ，最低为２０μｇ／ｍｌ。含启动子片段的７个重组质粒子分别命名为ｐＳＵＰＺ１－７，Ｓｏｕｔｈｒｅｎ印迹表明ｐＳＵＰＺ６对Ｋｎａ的抗性功能来源于诸葛菜的１０ｋｂ，５ｋｂ和３．９ｋｂ片段。     

转座子诱变甘蓝黑腐病同黄单胞菌所获胞外多糖突变体的验证

利用转座子Ｔｎ５ｇｇｕｓＡ５上的抗性基因，通过“鸟抢法”克隆到用这种转座子诱变甘蓝黑腐黄单胞菌所获得的三个胞外多糖突变体菌株Ｔ１０６，Ｔ１１３和Ｔ１１７中的转座子及其相邻序死的ＤＮＡ片段，并利用含有这些片段重组质粒，通过标记置换构字突变体。     

新疆棉花枯萎病菌营养亲和群的初步研究

从新疆各植棉区采集棉花枯萎病病株,经分离纯化获４９个单胞菌株。接种试验表明：４９个菌株均使棉花产生枯萎病症状。利用氯酸钾诱变棉花枯萎病菌,产生抗氯酸盐的硝酸盐营养突变株,４９个菌株共诱发获得３３６个ｎｉｔ突变株,将获得的ｎｉｔ突变株作营养亲和性配对反应,可将４９个菌株分为４个亲和群,其中４６个菌株属同一亲和群,它们均与７号小种的ｎｉｔ突变株相亲和,其余３个菌株分别属于其它亲和群。     

白粉菌诱导的小黑麦异多附加系M17特异cDNA克隆的研究

实验以对小麦白粉病菌免疫的小黑麦异多附加系Ｍ１７（１Ｒ″６Ｒ″） 为材料, 一组接种小麦白粉病菌,另一组不接种。分别提取两组叶片的总ＲＮＡ,分离出ｍＲＮＡ,在体外反转录合成ｃＤＮＡ,克隆进λｇｔ１０ 载体,得到了１ 个含９－８ ×１０４ 个重组子的ｃＤＮＡ 文库。两组ｃＤＮＡ 双链经切口平移法制成总ｃＤＮＡ 探针,分别与ｃＤＮＡ文库杂交,通过差别筛选的方法,找到了６ 个与小麦白粉病菌诱导有关的阳性克隆ｃＤＮＡ 克隆。将这６ 个阳性克隆用Ｈｉｎｄ Ⅲ和Ｂｇｌ Ⅱ进行双酶切分析,通过比较２ 个克隆酶切片段的差异,从１ 个克隆中找出１ 个约２－０ ｋｂ 的片段,此片段中包含约０－８６ ｋｂ 的外源ｃＤＮＡ 的片段。     

鸡败血霉形体抗原基因的筛选和DNA电泳鉴定

应用鸡败血霉形体抗血清筛选鸡败血霉形体Ｓ６株基因文库,得到１７９个阳性克隆,不足重组噬菌体的１％。反复筛选后,获得５个强阳性克隆。抽提ＤＮＡ酶切鉴定,发现２个克隆的外源片段在５ｋｂ左右,另２个在２．５ｋｂ左右,一个为３．６ｋｂ,为特异抗原的制备和基因工程疫苗的研究打下良好基础。     

导入外源DNA片段的花生根瘤菌高效基因工程菌株的构建

以柯斯质粒ｐＬＡＦＲ１为载体先构建快生型花生根瘤菌８５－７菌株总ＤＮＡ的基因文库。在协助质粒ｐＲＫ２０１３帮助下用此基因文库分别同菌株８５－７和另一株慢生型花生根瘤菌菌株Ｃ０２－５作三亲本杂交。转移接合子接种沙培条件下生长的花生，通过结瘤试验初筛选和复筛选，共筛选出３株工程菌ＨＮ１１，ＨＮ１２（以８５－７为受体）和ＨＮ１３（以Ｃ０２－５为受体）。其每植株根瘤的固氮酶活分别比出发菌株的提高３０２％（     

钾细菌NBT菌株抗药性研究

钾 细菌 Ｎ Ｂ Ｔ 菌株与 １０ 种农药 混合施用 试 验表 明， 多菌 灵、敌敌 畏、混 灭 威、马 拉 硫磷、三唑酮 、丁草胺 、绿黄隆等 农药对 Ｎ Ｂ Ｔ 菌株 无明显 的抑制作 用，而代 森锰锌、福美双对 Ｎ Ｂ Ｔ 菌 株有强烈的 抑制作用 ；乐果、甲 基１６０５ 农 药在使 用浓度下 ，对 Ｎ Ｂ Ｔ 菌株有较 强的抑 制作用，但 在残 留浓度下， 则无抑制 作用。 Ｎ Ｂ Ｔ 菌 株对所 试农药的 药效无明 显影响 。     

基于诱变和抗性突变的多杀霉素高产菌株的选育

为提高菌株发酵液中多杀霉素产量,本试验利用常温常压等离子体(ARTP)诱变、紫外(UV)诱变和抗性突变技术处理刺糖多孢菌株DS0322-3,结合高通量筛选和摇瓶发酵选育多杀霉素高产菌株。结果显示,通过ARTP诱变和UV诱变育种,筛选获得384株突变菌株,其中有9株突变菌株的效价较原始菌株增加10%以上,且1株效价较原始菌株增加20%以上,经过ARTP诱变30 s,得到的突变菌株AR1019-4效价为547.78 mg/L,较原始菌株增加了21.88%。以ARTP诱变得到的高产突变菌株AR1019-4为出发菌株,通过抗性突变筛选技术筛选获得1 152株突变株,其中13株突变菌株的效价较出发菌株增加10%以上,且2株效价较出发菌株增加15%以上,在0.5 mg/L的氯霉素平板上得到的突变菌株Chl 1215-5效价为637.12 mg/L,较出发菌株增加了16.31%;12 mg/L的庆大霉素抗性突变筛选到了突变菌株Gen 1207-8,效价为597.59 mg/L,该菌株的Spinosyn D组分由10%～15%增加至30%～35%左右,经遗传稳定性试验验证,突变菌株Chl1215-5和Gen1207-8可稳定遗传。试验结果表明ARTP诱变、紫外诱变和抗生素突变技术对选育多杀霉素高产菌株具有重要意义。     

用PCR—差别筛选法分离和克隆水稻抗瘟性相关基因

以水稻抗瘟性近等基因系Ｈ７Ｒ和Ｈ７Ｓ为材料,采用ＰＣＲ－差别筛选的方法分离和克隆水稻受稻瘟病菌诱导的抗性相关基因。第一轮筛选获得４２个差异表达的ｃＤＮＡ克隆,经ＰＣＲ扩增,转膜,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交后,得到了１２个阳性ｃＤＮＡ克隆。本对ＰＣＲ－差别筛选的优缺点以及进一步的鉴定工作亦作了讨论。     

鸡传染性支气管炎病毒D41株S1基因部分序列的测定

通过反转录及变退火温度ＰＣＲ方法扩增出含先导序列的ＩＢＶ广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ,长度约１．７ｋｂ．利用双脱氧链终止法对其５′端测序,准确读到３４２个碱基,并确定了翻译起始密码子ＡＴＧ的位置．     

运用ABI PRISM 310型基因分析仪测定重组人蛋白激酶CK2 α和β亚基cDNA序列

目的：测定重组质粒中编码人蛋白激酶ＣＫ２α和β亚基ｃＤＮＡ序列，筛选含完全正确插入片段的重组质粒。方法：随机选择人蛋白激酶ＣＫ２α和β重组质粒各四个阳性克隆。使用二氯罗丹明荧光标记终止底物循环测序试剂盒，分别加入首尾正反或／和中段正反引物，运用ＡＢＩＰＲＩＳＭ３１０型基因分析仪进行ＤＮＡ测序。结果：在ＣＫ２α和β阳性克隆中各有两个含完全正确的插入片段的重组质粒，其他各两个重组质粒的插入片段中均存在至少一个碱基突变。２４个测序反应的平均精确度为（９８．７±０．４）％；Ｎ平均出现率为（１．４±０．４）％。结论：通过ＤＮＡ测序筛选到了含完全正确的人蛋白激酶ＣＫ２α和β亚基ｃＤＮＡ序列的重组质粒     

粟蠕孢菌(Helminthosporium setariae=Cochliobolus setariae)氯酸钾抗性突变株的筛选

利用菌株对氯酸钾的抗性,在粟蠕孢菌(Helminthosporium setariae)中筛选氮代谢营养缺陷突变株,获得25株性状稳定的突变菌株。     

水稻细菌性条斑病菌DNA多态性与致病性研究

利用６０个随机引物对来自我国不同稻区的水稻细菌性条斑病菌株基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,其中２０个引物均出现清晰和重复性的ＤＮＡ扩增片段,扩增片段大小在０．５ｋｂ至３．５ｋｂ;应用Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ软件ＵＰＧＭＡ程序进行树状聚类分析,聚类结果表明,我国水稻细菌性条斑病菌具有明显的遗传分化,在遗传距离为０．３０时,供试菌株可划分为７个遗传相似组（谱系）。其中第１、第２和第５组为优势组群,分别由７、８、６个菌株组成。根据菌株在１２个已知基因品种上的抗感反应,将供试菌株分为１３个致病型,在遗传距离为０．５０水平上聚类归属于６个簇。菌株的致病类群与其ＤＮＡ的遗传变异具有弱相关性。     

PCR技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸

ＰＣＲ技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸作者在先行构建兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）中国分离ＮＪ株ｃＤＮＡ克隆的研究基础上，采用酶切鉴定和地高辛标记ＮＪ株病毒核酸探针杂交鉴定，从已获得的ｃＤＮＡ克隆中筛选一克隆ＰＧＤ－１２．把其中插入片段亚克隆Ｍ１３噬...     

慢生花生根瘤菌的数值分类和DNA同源性研究

用数值分析法对５２株分离自四川，广东、江西的慢生花生根瘤菌和１２株参考菌株（５株为分类地位已知的慢生根瘤菌，７株为Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ ｓｐ。）进行了１３１项表型性状的测定，并随机选取了部分菌株同慢生型大豆根瘤菌两个种的标准菌株（ＡＴＣＣ１０３２４＾Ｔ和ＵＳＤＡ７６＾Ｔ）进行了ＤＮＡ同源性测定。数值分类除３个菌株外，其余菌株在８２％相似性水平处聚为６个亚群，表现出了明显的多样性。从６个亚群     

马铃薯晚疫病菌基因文库的构建

用酶一氯化苄法制备高分子量晚疫病菌总ＤＮＡ,通过Ｓａｕ３Ａ部分酶切并纯化后得到１５－２５ｋｂ的酶切片段,并以具有广寄主范围的柯斯质粒ＰＬＡ２９１７为载体,用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连成为重组ＤＮＡ,包装到入噬菌体颗粒中,转染受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＳ１７－１。利用四环素和卡那霉素抗性来筛选鉴定重组子,得到１０６５６个重组子,这些重组子群即为晚疫病菌的基因组文库。     

用PCR-差别筛选法分离和克隆水稻抗瘟性相关基因(英文)

以水稻抗瘟性近等基因系Ｈ７Ｒ和Ｈ７Ｓ为材料,采用ＰＣＲ－差别筛选（ＰＣＲｂａｓｅｄｄｉｆｅｒ－ｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）的方法分离和克隆水稻受稻瘟病菌诱导的抗性相关基因．第一轮筛选获得４２个差异表达的ｃＤＮＡ克隆,经ＰＣＲ扩增,转膜,反向Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交后,得到１２个阳性ｃＤＮＡ克隆．本文对ＰＣＲ－差别筛选的优缺点以及进一步的鉴定工作亦作了讨论．     

三个根瘤菌新群的DNA—DNA杂交分析

从数值分类获得苜蓿、草木樨和锦鸡儿根瘤菌的３个新群。本实验对这３个新群内菌株及部分已知种参比菌株进行了ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交分析和Ｇ＋Ｃｍｏｌ％测定。结果表明：三群中心菌株ＸＪ９６０６０，ＸＪ９６４０８，ＮＭ０１９与其相应群内菌株的ＤＮＡ同源性分别为７１．７％￣９７．６％，８０．８％￣９８．７％，８２．７％￣８６．９％，均大于７０％；各群的△Ｔｍ值分别为３．２℃，２．８℃，２．６℃，均小于５℃；与各已     

稻瘟病菌REMI突变体的筛选和鉴定

利用构建的含潮霉素(HygB)抗性标记的质粒pUCATPH在稻瘟病菌菌株M 131中建立一个转化体系,通过限制酶介导整合(REM I)插入诱变技术,以HygB抗性作为突变体筛选标记,获得639个转化子。对其中200个转化子进行表型和致病性测定后,通过点杂交鉴定分别获得6个致病性突变菌株和部分表型突变菌株。对2个表型突变菌株和rep-PCR图谱差异性较大的2个致病性突变菌株进行RFLP分析,结果表明:突变体中均已插入质粒,但转化质粒在M 131中整合具有一定的随机性。     

毛萼田菁茎瘤菌吸氢酶基因克隆的研究

采用强迫克隆的方法,构建含Ａ．ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ ５－７ ｋｂ ＥｃｏＲⅠ酶切片段的质粒库,以Ｂ．ｕａｐｏｎｉｃｕｍ的ｒａｕｐ结构基因为探针,经原位杂交,筛选到带有Ａ;ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ ６．０ｋｂ ＥｃｏＲⅠ酶切片段的阳性克隆,经三亲本杂交,将阳性克隆转入Ａ．ｃａｕｌｉｎｏｄａｎｓ Ｈｕｐ＾－突变株中,所得转移接合子的吸氢酶和固氮酶活性均未恢复,表明所克隆到的基因虽与Ｂ;ｊａｐｏｎｉｃｕ