链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草叶片生理生化特性的影响

以空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)成株为材料,采用植物抗性生理分析测定技术研究了链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草叶片细胞膜透性、叶片内MDA含量、SOD、POD和CAT酶活性变化的影响。结果表明,空心莲子草叶片经细交链孢菌酮酸处理后,细胞膜透性随着细交链孢菌酮酸浓度的增加而增高,MDA含量在500μg/ml以下,随着毒素浓度的增加而升高,500μg/ml以上,又有所下降;随着细交链孢菌酮酸浓度的升高,SOD、POD、CAT活性下降,与对照相比,在1 000μg/ml时,SOD、POD和CAT活性达到最低,分别比对照(CK1)活性降低了86.24%、72.72%和82.05%。可见,细交链孢菌酮酸可严重降低空心莲子草叶片的生理生化活性,显示了其生防潜力。     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸在土壤中的降解研究

细交链孢菌酮酸是病原真菌链格孢菌（A lternaria sp．）产生的主要毒素之一,在霉变的粮食、感病的植物和腐烂的水果中都能检测到,其具有较强的动物毒性,给食品安全带来一定的隐患。分别在实验室和大田条件下对链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸在土壤中的降解动态进行了观察。结果表明,在实验室条件下,微生物对细交链孢菌酮酸在土壤中的降解影响较大,光照的影响较弱,不灭菌条件下,其半衰期小于10d,加药10d时,其降解率就大于50％;灭菌条件下,其半衰期大于30d,加药40d时,其降解率才超过50％。土壤含水量的增加和土壤温度在一定范围内的升高可促进其降解,土壤含水量为12．5％-50％,其半衰期为11．38-5．14d,加药10d时其降解率为38．98％-62．14％,温度为20—40℃时,其半衰期为14．26-5．11d,加药10d时其降解率为36．94％-62．45％。田间研究表明．细交链孢菌酮酸在自然条件下降解的半衰期约为3．22d,20d后就可完全降解。可认为细交链孢菌酮酸属于易降解类物质。     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性

以空心莲子草离体叶片和植株为材料,采用离体叶片针刺法及离体植株培养法研究链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对空心莲子草的致病性。结果表明,细交链孢菌酮酸对空心莲子草叶片具有较强的致病性。在31.25 ～ 500.00 μg/mL浓度范围内,随着毒素浓度的升高,空心莲子草叶片的病斑直径增大,500.00 μg/mL时为2.41 mm;浓度为20.00 μg/mL时,毒素对空心莲子草植株不同部位叶片的致病性存在差异,对幼嫩的顶部叶片致病性较强;细交链孢菌酮酸对空心莲子草植株的生长产生抑制作用,抑制强度随浓度的升高而增强,与对照相比,当浓度达到125.00 μg/mL时,毒素对植株生长的长度、鲜重及平均根长的抑制作用达到显著水平,浓度达到250.00 μg/mL时,植株的生根数也受到显著抑制,在最高浓度500.00 μg/mL时,植株处于零生长,生长长度和生根数均为0,鲜重为负增长,达－0.77 g。本研究表明细交链孢菌酮酸具有开发为防除空心莲子草生物源除草剂的潜力。     

QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定婴幼儿辅食果泥中5种链格孢霉毒素

建立婴幼儿辅食果泥中细交链孢菌酮酸、腾毒素、交链孢酚单甲醚、交链孢酚和交链孢烯5种链格孢霉毒素的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱分析方法。待测样品经乙腈-水-甲酸混合液(79∶20∶1,V/V/V)提取,4 g 无水硫酸镁、0.5 g 无水乙酸钠和0.5 g 氯化钠脱水盐析,100 mg C18净化,经Waters ACQUITY UPLC^® HSS T3 (2.1 mm×100 mm, 1.8 μm)液相色谱柱分离,以5 mmol·L^-1 的乙酸铵水溶液和甲醇作为流动相梯度洗脱,在电喷雾离子源电离,多反应监测模式条件下进行测定,基质外标法定量。该方法在0.1~200 μg·L^-1 范围内线性关系良好,决定系数(R²)均大于0.998,检测限和定量限分别为0.1 μg·kg^-1 和0.3 μg·kg^-1。不同加标水平的平均回收率为73.8%~118.0%,相对标准偏差为2.3%~8.5%。结果表明,该方法高效、准确、灵敏,适用于婴幼儿辅食果泥中5种链格孢霉毒素确证检测。     

赤峰市售小麦粉交链孢霉毒素污染现状

目的 测定赤峰地区市售小麦粉中交链孢菌酮酸(TeA)、交链孢酚(AOH)、腾毒素(TEN)和交链孢酚单甲醚(AME)含量,评估其污染现状,分析原因,为保障人们的饮食安全提供科学依据。方法从不同地区随机采集样品经提取液(乙睛—甲醇—磷酸二氢钠)超声提取,低温高速离心,上清液过HLB固相萃取柱净化, 采用细交链孢霉菌酮酸-¹³C2(TeA-¹³C2)为内标物,液相色谱串联质谱法(LC/MS—MS)测定四中交链孢霉毒素。结果 共检测120份样品,其中其中TeA检出率90.0%,AOH检出率为98.3%,TEN和AME的检出率均为100%。结论 赤峰地区市售小麦粉中中四中交链孢霉毒素污染率很高,应引起农业,食药监等有关部门重视,加强交链孢霉毒素污染的预防及监测工作,以保障人们的主食安全。     

梨黑斑链格孢菌次生代谢产物的分离鉴定及毒素含量分析

通过分离鉴定梨黑斑链格孢菌次生代谢产物,比较分析梨链格孢菌利用库尔勒香梨、苹果、西红柿、马铃薯、大米、燕麦等不同营养基质后的毒素含量。采用硅胶柱色谱、制备高效液相色谱、1D2D NMR技术等方法,分离鉴定梨黑斑链格孢菌次生代谢产物,高效液相色谱法分析毒素含量。从梨链格孢菌中分离鉴定了6个次生代谢产物,分别为交链孢烯(1)、链格苝醇(2)、交链格孢酚(3)、交链格孢酚单甲醚(4)、土曲霉酮(5)和7-氨基-1,3-二羟基-苯丙酮(6);发现梨链格孢菌利用不同营养基质所产生物毒素(化合物1-4)结构种类相同,但含量存在显著差异。对梨链格孢菌生物毒素成分进行了定性定量分析,明确了毒素成分的主要结构,揭示了该菌利用不同营养基质所产生物毒素含量差异的特点。     

新疆红枣枣果主要致病菌交链格孢菌产生毒素种类及黑斑病病果毒素含量测定

【目的】研究新疆红枣缩果病和枣果黑斑病两种病害的主要致病菌交链格孢菌(Alternaria alternate)产生的主要毒素种类,以及栆果黑斑病病果中的毒素种类和含量,为红枣加工和食用的安全性评价提供依据。【方法】采用超高效液相色谱-串联质谱法,测定10株链格孢菌产生的毒素种类及含量,并对枣果黑斑病不同严重度发病枣果和人工接种果实中毒素种类及含量进行测定。【结果】10株交链格孢供试菌株可产生4种毒素,分别为链格孢酚(alternariol,AOH)、交链格孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交链孢烯(altenuene,ALT)和细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)。TeA、ALT、AME和AOH在不同病级发病枣果和人工培养条件下均有检出,其中TeA检出含量最高,范围为3.1×103~5.5×103mg/kg;AME、AOH和ALT的含量范围分别为7.2×102~6.4×102mg/kg,1.2~3.8×102mg/kg和0.09~5.08 mg/kg。人工接种链格孢菌后,无伤、有伤枣果内均检测到大量TeA。不止在发病枣果中检测到了毒素,无伤接种未发病枣果亦发现大量毒素,且未接种健康枣果中亦有少量链格孢霉毒素。【结论】新疆红枣枣缩果病和枣果黑斑病病原菌两种病害的主要致病菌交链格孢菌(Alternaria alternate)均可产生链格孢霉毒素,且产毒量高,危害严重,影响了新疆红枣的产量及商品价值,患病枣果无法安全食用。在红枣鲜食加工和风险评估中应引起关注和重视,并在红枣种植和贮存期间减少病原菌侵染,以避免更多的污染。     

链格孢菌（Alternaria tenuissima）cDNA酵母表达文库的构建

为了解细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)遗传学背景,克隆及研究该菌功能基因,根据Gateway技术构建了既能在酵母细胞中表达外源基因又能在原核细胞大量复制的酵母表达载体pRS-DEST42,构建了细极链格孢菌(A.tenuissima)cDNA酵母表达文库.经检测,文库的平均滴度为2.44×106 cfu/ml,文库总容量为2.44×107 cfu(colony-forming unit),阳性克隆率为100%,平均插入片段约为1.38 kb.细极链格孢菌cDNA酵母表达文库是一个质量较高的表达文库,为克隆与分离全长目的基因及其功能奠定了坚实的基础.     

红枣中链格孢菌的多重PCR检测

为快速、灵敏并且特异性地检测红枣中链格孢菌,选取2对链格孢菌特异引物,优化多重PCR检测中的引物比例、退火温度、d NTP浓度及Mg2+浓度等条件,结果表明多重PCR扩增出了预计的链格孢菌PCR产物,优化的条件为Alt-F2\R2∶Alt-F1\R1=3∶1、退火温度52℃、d NTP浓度0.05 mmol/L、Mg2+浓度1.5 mmol/L。该方法在检测红枣链格孢菌中具有很好的应用和开发前景。     

链格孢菌毒素对中国月季主要营养物质含量的影响

用链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸(Te A)处理中国月季叶片后,用凯氏定氮法、烘干法、蒽酮比色法和电感偶合等离子发射光谱仪(ICP-OES)分别测定处理2、6、10、14、20 d后,处理部位叶片和位于处理叶片上方和下方的叶片中蛋白质、水分、可溶性糖和矿质元素的含量。结果表明:与健康叶片相比,用Te A处理后的叶片其蛋白质、水分和可溶性糖含量均明显下降,蛋白质含量变化较复杂,在处理6 d后,其含量显著增加,之后又随处理时间的增加而降低。蛋白质含量从208.41 mg/g降低至45.09 mg/g;水分含量从77.36%下降到69.56%,下降了7.79%;可溶性糖含量从12.58 mg/g降低到8.45 mg/g。中国月季用链格孢菌毒素Te A处理后多种矿质元素含量发生变化,Ca、Mg、K、S、P、Zn等元素含量降低,Al、Cu、Mn、Na等元素含量升高。并且Te A处理具有空间效应,对位于处理部位上方和下方的叶片的营养元素都有影响。