鸡传染性支气管炎微量血凝抑制试验方法的研究

用胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制成血凝(HA)抗原,HA＝1:16384,用此抗原建立了微量血凝抑制试验(HI)方法检测IBV阳性血清。IBV阳性血清鸡胚病毒中和试验(NT)结果与HI效价呈正相关,相关系数r＝0.29,HI效价达1:8以上可保护鸡胚抵抗200个MLD的IBV攻击,表明HI抗体是保护性抗体,该方法具有较大的实用价值。     

鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）最小有效免疫剂量的研究

为科学指导鸡新城疫基因Ⅶ型灭活标记疫苗（MG7株）的临床免疫剂量,通过测定免疫鸡HI抗体滴度和攻毒保护试验,进行了10日龄和30日龄SPF鸡最小有效免疫剂量的研究。动物实验使用10 μL、20 μL和40 μL三种不同免疫剂量,免疫疫苗后21 d检测HI抗体效价,10日龄SPF鸡001批次疫苗HI抗体平均效价依次为：4.8、6.2和6.5,攻毒保护率依次为80%、100%和100%,30日龄SPF鸡HI抗体平均效价依次为：5.0、6.3和6.5,攻毒保护率依次为70%、100%和100%,结果表明,新城疫灭活标记疫苗（MG7株）HI 抗体效价和保护效力呈正相关, 免疫剂量与HI 抗体效价和保护效力也呈正相关。用NDV基因Ⅶ型强毒G7株进行攻毒保护试验,两种日龄鸡在20 μL的免疫剂量下,疫苗仍能达到良好的免疫保护效果。     

NDV地方分离株与La Sota株抗原交叉性研究

用新城疫弱毒疫苗株La Sota阳性血清测定NDVMM,NDVLD,NDV-NH3株新城疫病毒地方分离株和标准株La Sota,F48E9的HI效价,以La Sota阳性血清对La Sota疫苗株的HI效价为参照,分析NDV地方分离株与疫苗株抗原交叉性。结果表明,NDV-MM,NDV-LD 2个野毒株HI效价与NDV-LD HI效价相近,但比La Sota HI效价低2．3个～2．7个滴度;NDV-NH与F48E9 HI效价相近,比La SotaHI效价低4．2个～4．3个滴度,提示以上3个野毒株与疫苗株之间的抗原相关性差异较大。动物免疫保护试验结果表明,经La Sota免疫（HI效价〉2^5）后攻毒保护率为80％-100％。     

H5亚型禽流感疫苗用于火鸡乌鸡免疫效力试验

将生产场中含有H5亚型禽流感母源抗体的雏火鸡、雏乌鸡和注射过H5亚型禽流感疫苗并产生抗体的青年、成年火鸡与乌鸡,用H5亚型禽流感病毒(DL-602F4)进行攻毒,同时设无H5亚型禽流感抗体的火鸡、乌鸡作为对照,观察其保护情况。结果表明,火鸡与乌鸡在攻毒量约500ELD50/只情况下,雏火鸡的母源抗体HI效价必须≥1∶32,才能达到84.6%(22/26)以上的保护;育成和成年火鸡HI效价≥1∶32,有93.9%(14/15)保护;雏乌鸡的母源抗体HI效价必须≥1∶128时,才有100%(8/8)保护;育成乌鸡HI效价≥1∶16,有100%(10/10)保护;成年乌鸡HI效价≤1∶16,无一保护。火鸡和乌鸡不论体内含有由疫苗产生的抗体还是母源抗体,注射攻毒后受保护不死亡的鸡其肛、咽部均有一定比例排毒,所以说,一定水平的抗体能防止鸡群感染发病,但不能防止排毒。     

禽霍乱禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗免疫攻毒试验与HI试验的平行关系研究

对8批禽霍乱、新城疫二联灭活疫苗进行新城疫组分的效力检验,在检测新城疫血凝抑制效价(HI)的同时,进行新城疫病毒强毒攻击试验,旨在寻找抗攻毒保护与HI抗体效价之间的平行关系。结果表明:免疫剂量与HI抗体效价和攻毒保护率呈正相关,免疫40、20、10、5μL剂量组攻毒保护率和HI抗体效价分别为94.9%(75/79)、5.2 log_2,87.5%(70/80)、4.4 log_2,29.1%(23/79)、2.7 log_2,11.4%(9/79)、2.1 log_2;对照组攻毒保护率为0(0/10),HI抗体效价≤2.0 log_2;新城疫HI抗体效价与攻毒保护率也呈正相关,当HI3.0 log_2,攻毒保护率为4.1%;HI=3.0 log_2,攻毒保护率为22.9%;HI=4.0 log_2,攻毒保护率为87.7%;HI=5.0 log_2,攻毒保护率为94.4%;HI=6.0 log_2,攻毒保护率为100%。本研究为制定疫苗质量标准中新城疫病毒株的效力检验方法和标准提供实验室理论依据。     

鸡新城疫灭活疫苗免疫攻毒试验与血清学(HI)试验的平行关系研究

对19批鸡新城疫(ND)灭活疫苗进行了效力检验,在测定PD50的同时,进行了HI抗体效价的测定,以寻找血清学与抗攻毒保护的平行关系.结果表明,免疫剂量与GMHI抗体效价和攻毒保护率呈正相关:免疫1/12.5剂量组共保护54/60(90%),GMHI抗体效价为5.6 log2;免疫1/25剂量组共保护152/191(79.6%),GMHI抗体效价为4.9 log2;免疫1/50剂量组共保护123/183(67.2%),GMHI抗体效价为4.0 log2;免疫1/100剂量组共保护46/139(33%),GMHI抗体效价为3.0 log2;对照组保护0/89(0),GMHI抗体效价≤2.0 log2.采用PD50测定的18批疫苗中,有15批合格,3批不合格;按照我国现有质量标准,即免疫1/25剂量攻毒的方法进行检验,19批疫苗中有16批合格,3批不合格;血清学方法检验19批疫苗中有17批合格,2批不合格.其中免疫攻毒效检方法与PD50测定方法的不合格疫苗批次完全相同,其中2批为免疫胚制造的疫苗,1批为进口的灭活疫苗,血清学检验不合格的2批疫苗包含在其中,三种检验方法结果基本一致.试验还发现,HI抗体效价和抗攻毒保护呈正相关:未免疫对照组鸡血清HI抗体效价≤2.0 log2,攻毒保护率为0(0/89);免疫ND灭活疫苗后如果血清HI抗体效价＜3.0 log2,攻毒保护率为3.5%(4/113);HI为3.0 log2,攻毒保护率为16.1%(14/87);HI为4.0 log2,攻毒保护率为86.7%(86/99);HI达到5.0 log2,攻毒保护率为97.2%(103/106),HI≥6.0 log2,攻毒保护率为100%(168/168).     

左旋咪唑-葡聚糖微粒在雏鸡新城疫免疫中的佐剂效能

2、4日龄雏鸡经加左旋咪唑-萄聚糖微粒的新城疫Ⅱ系弱毒疫苗(下称加左Ⅱ系苗)首免后的 HI 抗体上升效价极显著高于Ⅱ系苗接种组(P<0.01):抗体效价的升高极少受母源抗体的干扰:抗体下降至有效效价以下的时间明显迟于Ⅱ系苗组.人工造成免疫缺陷雏鸡接种加左Ⅱ系苗后,可使 HI 抗体效价达到健康雏鸡单独应用Ⅱ系苗免疫后的水平(P>0.05)。攻毒后,加左Ⅱ系苗的保护力显著高于Ⅱ系苗(P<0.05),并且两者具有相同的安全性。当雏鸡母源抗体降为零或二免时,该苗无明显提高 HI 抗体效价的作用 (P>0.05).加左Ⅱ系苗免疫雏鸡与Ⅱ系苗免疫雏鸡具有相同的细胞免疫水平(P>0.05).     

“兔瘟”疫苗中不同佐剂对免疫效果的影响

利用“兔瘟”病毒枣(?)毒株(RVZ85)制备的不含佐剂疫苗,甘油佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和矿物油佐剂疫苗免疫接种易感家兔,定期测 HI 抗体效价并进行人工攻毒试验.结果证明,不含佐剂的疫苗产生的保护力最早,免疫后三天即4/4保护.用四种疫苗免疫接种后一年内,对攻毒的保护率均为100%.四种疫苗中,以矿物油佐剂疫苗免疫兔的HI抗体效价最高,氢氧化铝佐剂疫苗次之,甘油佐剂疫苗及不含佐剂疫苗的HI效价较低。氢氧化铝佐剂疫苗在室温保存8.5个月,免疫兔4/4保护;室温保存14个月.免疫兔2/3保护:4℃保存14个月,免疫兔4/4保护.     

H9亚型禽流感病毒流行毒株交叉免疫攻毒保护试验

采用1998-2009年在河北、河南及山东分离的3株禽流感H9亚型流行毒株,分别制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,免疫后21 d,采血测定HI抗体,然后用从上述3个地区及北京分离的共5株禽流感H9亚型流行毒株进行攻击,观察不同时期及地点分离的H9亚型流行毒株的交叉免疫攻毒保护效果。结果显示,用不同时期及地点的3个分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组试验鸡H9亚型禽流感的HI抗体效价均明显上升,不同毒株灭活疫苗所诱导产生的HI抗体效价存在着不同程度的差异,用同源毒株作为抗原测定免疫组鸡的血清样品,可获得较高的HI抗体效价。攻毒试验结果证明,对不同时期及地点分离的禽流感H9亚型流行毒株间产生了较好的交叉保护力。用1998年分离的WD98株制备出的灭活疫苗对目前的流行毒株仍具有较好的保护效力。     

新城疫病毒HN标记疫苗的构建及免疫效力

将新城疫病毒AI4株的HN蛋白胞外区替换成禽副黏病毒2型T4株HN相应部分,构建获得了一株重组病毒r AI4-T4HNECD,该病毒具有较高繁殖性能,且毒力弱。将该病毒制成灭活疫苗免疫2周龄SPF鸡后,定期采血用于血凝抑制试验(HI),免疫后3周以基因Ⅶd亚型NDV强毒株JS-5-05攻毒,攻毒后定期采血用于HI检测。结果显示:免疫后,该疫苗可有效诱导抗体的产生,并能提供较强的免疫保护。血清学测定数据显示:攻毒前,免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价低于2 log_2,但感染后第5、7天免疫组鸡血清对AI4株的HI平均效价可分别达4.3 log_2和9.4 log_2,而免疫未攻毒组对AI4株的HI效价仍低于2 log_2,根据血清对AI4株HI效价的变化可区分免疫动物和感染动物。因此,重组病毒rAI4-T4HNECD可用于新城疫标记疫苗的开发。     

新生水貂肠炎病毒母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果研究

本研究旨在探索水貂肠炎病毒（mink enteritis virus,MEV）的母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果。以免疫母貂所生仔貂为研究对象,采集21、30、45、60日龄仔貂血清,测定水貂病毒性肠炎母源抗体HI效价（MEV HI）;选取25只47~52日龄健康水貂接种制备MEV基因工程亚单位疫苗,免疫前后14 d采血测定MEV HI效价;免疫后14 d进行水貂肠炎病毒攻毒临床症状观察,并测定粪便HA效价;攻毒后14 d对濒死和存活水貂安乐死,采集十二指肠、空肠和回肠进行病理组织学观察和免疫组化检测。结果显示,免疫母貂所产仔貂的MEV HI效价随着日龄的增加逐渐降低,在21日龄时较高,45日龄时少部分仔貂MEV HI效价<1：32,60日龄时大部分仔貂HI效价≤ 1：4;使用制备合格疫苗免疫后14 d对照组水貂的MEV HI效价均不高于1：4,免疫组MEV HI效价升高至1：64~1：512;攻毒保护试验表明,免疫组水貂100%抵抗水貂肠炎病毒强毒的攻击,水貂的精神、饮食、粪便等均未见异常,且攻毒后粪便HA效价为1：8~1：16;病理组织学和免疫组化检测结果表明,MEV基因工程亚单位疫苗能够很好地阻止病毒在肠黏膜上皮细胞的复制和对肠黏膜上皮细胞的损伤。因此,免疫母貂所生仔貂21日龄时体内抗体效价最高,制备的疫苗免疫50日龄左右的水貂时能够突破母源抗体干扰并产生高水平的抗体,能够抵抗水貂肠炎病毒强毒株的攻击。     

兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验替代方法研究

为了采用血凝抑制(HI)试验方法替代兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验的免疫攻毒方法,试验在制备了HI试验用兔出血症病毒血凝(HA)抗原、阳性血清、阴性血清的基础上,研究了免疫攻毒保护与免疫血清HI效价之间的平行关系,并进行了替代方法的应用。结果表明,当免疫血清HI效价不低于1∶32时,两种方法的检验结果符合率为100%,证明了该替代方法的可行性,也为下一步修订兔病毒性出血症灭活疫苗效力检验方法提供了数据支持。     

H9N2亚型禽流感流行分析及疫苗毒株的筛选

本研究旨在筛选新型免疫原性好、广谱的优秀 H9亚型禽流感病毒疫苗株。通过 H9N2分子流行病学调查对分离得到的37株禽流感 H9N2亚型病毒进行 HA 基因分子遗传进化及其关键位点分析,利用交叉 HI 效价及鸡胚中和试验分析毒株间毒力及其相关性,制备疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,从37株病毒中选出12株病毒作为代表,分为3个分支,同分支之间交叉 HI 效价及中和效价最高。HI 试验及鸡胚中和试验均显示同分支毒株间的相关系数高。免疫攻毒保护试验显示同分支疫苗株安全性高。表明我国禽流感 H9N2亚型情况复杂,且疫苗保护效果与疫苗株的抗原匹配性密切相关,生产多种分支 H9疫苗株联合更有利于控制 H9型禽流感,     

新疆和田县2011～2013年禽流感血清学调查与分析

和田地区动物卫生监督所从2011年开始与自治区畜牧科学院进行合作，用3年时间对和田县养禽场进行禽流感H5、H7、H9HI抗体效价的测定，以掌握和田县禽流感免疫效果及存在的风险。结果表明，和田鸡H5禽流感血清HI抗体效价〈70％，免疫效果达不到有效保护，H7禽流感血清HI抗体感染率在4％，2013年共抽检规模户11户，一户未免H9禽流感血清HI抗体感染率35．29％，在没有免疫的情况下有感染抗体存在，存在发病风险。     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

采用不同剂量的鸡新城疫La系疫苗免疫鸡,经HI实验检测血清抗体效价,结果显示当免疫剂量为3倍时HI效价最高。     

宁波地区禽流感免疫效果评估

我局对124户养禽户采集了2218份不同禽群血样进行了禽流感H5抗体水平监测,免疫合格血清样本为1752份,总体免疫合格率为78.99%,平均HI效价为26.45,标准差为22.03。其中鸡群免疫合格率为76.58%,平均HI效价为26.18,标准差为22.16;鸭群免疫合格率为80.96%,平均HI效价为26.71,标准差为22.00;鹅群免疫合格率为83.33%,平均HI效价为26.82,标准差为21.12。     

鸡新城疫灭活疫苗抗原灭活条件的优化

鸡新城疫灭活疫苗的抗原血凝活性随着灭活用甲醛浓度的升高成反比的下降,同时疫苗HI效价和HI效价的稳定性会受到影响,且甲醛浓度越高疫苗的HI效价越低,疫苗的效价下降的越快.鉴于此病原特性,针对疫苗生产中的抗原的灭活做了一系列的尝试性试验,结果表明抗原在甲醛浓度为0.1％、4℃条件下灭活24 h,抗原的血凝活性最高、疫苗的效价最高、疫苗效价的稳定性最好.     

蛋鸭卵黄HI试验不同样品制备方法的比较

试验选用氯仿、PBST、PBS、生理盐水等不同试剂制备蛋鸭卵黄样品,在相同条件下进行禽流感HI试验,并与对应血清进行比对。结果表明,4种制备方式的卵黄HI抗体效价与血清HI抗体效价的差异均不显著,其中氯仿萃取法的样品性状最为稳定,且抗体效价与血清抗体效价差异最小,但操作繁琐;生理盐水直接稀释法结果较为准确,且简单易行,适合基层大样本检测。     

接种不同剂量的新城疫疫苗对鸡免疫应答的影响

采用不同剂量的鸡新城疫La系疫苗免疫鸡，经HI实验检测血清抗体效价，结果显示当免疫剂量为3倍时HI效价最高。     

免疫禽流感疫苗HI抗体的试验研究

对30日龄雏鸡肌注郑州中牧股份生产的禽流感疫苗每只0.5ml,分别于免疫后第3、6、9、12周进行血清学HI检测,3周后H5亚型HI、H9亚型HI抗体均达到6Log2以上,其效价12周时已处于免疫保护临界值状态,60日龄雏鸡免疫疫苗后,其H5、H9HI抗体效价较30日龄雏鸡上升幅度快;对另一批雏鸡分别于30、120日龄免疫两次后第1、2、3、4、5月进行HI检测,抗体较首免产生水平高,1月后抗体可达到8Log2以上,5个月后抗体还达5Log2以上。