狼爪瓦松愈伤组织生物反应器培养及提高有效物质积累研究

为筛选狼爪瓦松愈伤组织生物反应器培养的适宜接种量,该试验研究了4种接种量(10.0、12.5、15.0、17.5 g/L)对愈伤组织生长和有效物质积累的影响。结果表明:随着接种量的增加,愈伤组织生物量随之升高,在接种量为15 g/L时,狼爪瓦松愈伤组织中总黄酮、总酚及总多糖的含量和生产量达到了最大值。另外,为促进愈伤组织中有效物质的积累,以茉莉酸甲酯(MeJA)作为诱导子,在愈伤组织培养25 d后用不同浓度的MeJA处理。结果发现MeJA处理对愈伤组织中有效物质的积累有促进作用,当MeJA浓度为100μmol/L时,狼爪瓦松愈伤组织中黄酮、总酚和总多糖的含量及生产量达到最大。     

光照强度对狼爪瓦松愈伤组织有效物质积累的影响

以狼爪瓦松种子诱导的愈伤组织为材料,研究了光照强度对愈伤组织生物量及黄酮积累的影响。结果表明:光照强度为15~30("mol·cm~(-2)·s~(-1))时,有利于狼爪瓦松愈伤组织鲜重和干重的增加;对于狼爪瓦松中酚的积累,光照强度为15("mol·cm~(-2)·s~(-1))时,其含量(17.4mg/g DW)及生产量(68.53mg/L)最高。而当光照强度达到30("mol·cm~(-2)·s~(-1))时,可得到最高的多糖含量(125.8 mg/g DW)和生产量(615.05mg/L)。对于黄酮类物质,光照强度为15("mol·cm~(-2)·s~(-1))时,最有利于山奈酚-3-O-芸香糖苷的积累,而槲皮素、山奈素、表儿茶素没食子酸酯和异槲皮苷的积累在光照强度为30("mol·cm~(-2)·s~(-1))时最佳;总黄酮的含量(3 816.6mg/g DW)和生产量(18 654.0mg/L)在光照强度30("mol·cm~(-2)·s~(-1))时达到最大值。因此,光照强度是狼爪瓦松愈伤组织有效物质积累和生物量增加的影响因素之一,在愈伤组织培养时将光照强度调节为30("mol·cm~(-2)·s~(-1))较为适宜。     

水杨酸对秦艽愈伤组织总酚·总黄酮含量及抗氧化酶活性的影响

[目的]研究添加不同浓度的水杨酸(SA)对秦艽愈伤组织生长量、总黄酮、总酚含量及抗氧化酶活性的影响.[方法]以秦艽种子为原材料诱导出秦艽愈伤组织,在秦艽愈伤组织的继代培养中加入0、10、50、100、150、200μmol/L的SA,暗培养25 d后,测定秦艽愈伤组织的生长量、抗氧化酶活性和总黄酮、总酚含量.[结果]与对照组相比,当SA浓度为150μmol/L时秦艽愈伤组织鲜重达到最大值,SA浓度为100μmol/L时秦艽愈伤组织干重达到最大值,分别为2.8635、0.2017 g,显著高于对照组的鲜重和干重(P<0.05).秦艽愈伤组织SOD活性在SA浓度为150μmol/L时达到最大值,为183.95 U/g,是对照组的2.44倍;CAT活性在SA浓度为200μmol/L时达到最大值,为22.44 U/mg,是对照组的2.56倍;当SA浓度为200μmol/L时,POD活性虽有所上升,但仍然显著低于对照组(P<0.05),为61.16 U/mg,是对照组的0.40倍.SA浓度为100μmol/L时,秦艽愈伤组织总黄酮含量达到最大值,为0.77 mg/g,是对照组的1.35倍;SA浓度为50μmol/L时,总酚含量达到最大值,为0.98 mg/g,是对照组的1.31倍.[结论]一定浓度的SA处理下,有利于秦艽愈伤组织的生长和干物质的积累;适当浓度的SA对秦艽愈伤组织SOD、CAT活性有促进作用,而添加SA会对POD活性有抑制作用;当添加SA浓度为100、50μmol/L时,分别有利于秦艽愈伤组织中总黄酮、总酚含量的积累.     

外源茉莉酸甲酯对牛樟芝产总三萜及多糖含量的影响

为了探讨茉莉酸甲酯(MeJA)对牛樟芝(Antrodia camphorata)发酵产三萜及多糖的影响及Ca~(2+)对MeJA的诱导作用,向牛樟芝发酵基础培养基中加入MeJA溶液,设置不同添加浓度(0、25、50、100、200μmol/L)、不同时间(0、2、4、6、8 d)、不同溶剂3组试验,培养后检测牛樟芝生物量、三萜、胞外多糖及胞内多糖的含量,并同样测试添加CaCl_2的效果。结果表明,用MeJA处理牛樟芝,对其发酵产总三萜、多糖具有积极的促进作用,并且于培养4 d时向发酵培养基中添加用吐温-80溶解的50μmol/L MeJA溶液,促进作用最佳。此外,在添加MeJA的同时添加CaCl_2的处理较仅添加MeJA的处理的牛樟芝生物量、三萜、胞外多糖及胞内多糖含量显著增加。     

高山红景天愈伤组织的玻璃化法保存及植株再生

采用玻璃化法对高山红景天的愈伤组织进行了超低温保存研究.高山红景天愈伤组织在8%蔗糖中暗培养5 d后,先用25℃的60%玻璃化保护剂PVS2预处理20 min,转至100% PVS2于-20℃乙醇浴中处理2 h后,投入液氮进行保存,48 h后使用40℃水浴快速化冻.冻存后的愈伤组织用液体培养基MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+40%蔗糖洗涤3次,再转入MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5 mg/L固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2周后转入光照培养（光照强度800 lx）. 6周后观察到高山红景天愈伤组织呈鲜绿色,长势较为旺盛,存活率可达到78.24%.冻存后的愈伤组织可诱导成苗.      

几种因素对高山红景天愈伤组织诱导和增殖的影响

以高山红景天叶片为材料,研究了BA和NAA浓度对愈伤组织诱导的影响及MS培养基中氮和磷对愈伤组织增殖的影响。结果表明,在MS培养基中加入BA3mg／L和NAA0．3mg／L时高山红景天叶片愈伤组织的诱导效果好于其他BA和NAA浓度处理,诱导率达到62．2％。将诱导出的愈伤组织进行增殖培养时,将MS培养基中NH4＋／NO3-配比由原有的20／40mM调节为30／30mM,PO43-浓度为1．25mM时,愈伤组织增殖生长良好,增殖系数达16．3。     

高山红景天不同继代愈伤组织中红景天甙含量研究

[目的]研究在离体培养条件下红景天甙合成的特征。[方法]以高山红景天的种子和试管苗的茎、叶为外植体诱导愈伤组织,继代培养6次,测定每代愈伤组织中红景天甙的含量。[结果]以不同部位作为外植体诱导的愈伤组织中所含红景天甙的含量不同,茎诱导的愈伤组织中红景天甙含量最高,达6．2100mg／g,其次为种子诱导的愈伤组织,以叶为外植体诱导的愈伤组织中红景天甙含量最小。仅0．9968mg／g;红景天甙的含量在各继代培养的愈伤组织中的含量不同,在1～2代较低,3～5代最高,第6代明显下降。[结论]高山红景天中红景天甙含量与外植体和继代次数有关。     

贯叶连翘愈伤组织和不定根培养的研究

为探索贯叶连翘愈伤组织和不定根反应器大量扩繁的最佳条件,以贯叶连翘种子为材料,对愈伤组织的诱导和增殖条件进行优化,并对不同培养条件下愈伤组织和不定根增殖生长情况进行调查。结果表明,愈伤组织在附加吲哚丁酸(IBA)4mg/L,激动素(KT)0.02mg/L和蔗糖30g/L的MS培养基中增殖效果佳。无论是愈伤组织还是不定根的增殖,反应器培养效果好于固体培养和振荡培养。在生物反应器内培养不定根的过程中,研究了培养基中pH值对不定根增殖生长和不定根中金丝桃素含量的影响,结果pH值为4.8～7.8时不定根生长不受pH值的影响,但金丝桃素的含量在pH值为4.8和5.8处理中显著高于pH值为6.8和7.8的处理,金丝桃素生产量也在pH值为4.8和5.8处理中较高(7.09和6.77mg/L)。说明利用反应器进行愈伤组织和不定根培养是短期内获得有效物质的有效方法之一。     

生物反应器中金线莲丛生芽的增殖及酚和黄酮积累的研究

利用气升式生物反应器研究了反应器培养方式和培养天数对金线莲(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.)丛生芽增殖及总酚和总黄酮含量的影响,同时对诱导子促进酚和黄酮积累的影响也进行了调查。结果表明:在反应器内球体底部搭建"载桥"后进行培养的方式有利于金线莲丛生芽的增殖及酚和黄酮的积累,总酚和总黄酮的生产量最多。金线莲丛生芽在生物反应器培养30d时,酚和黄酮积累最大。因此,30d为最佳的培养周期。水杨酸、茉莉酸甲酯及酵母提取物对金线莲总酚和总黄酮含量均有提高作用,采用525μM的茉莉酸甲酯处理16d的效果最佳。     

茉莉酸甲酯和水杨酸对膜荚黄芪芒柄花苷积累的影响

芒柄花苷为黄芪中黄酮类化合物的代表成分，有促进皮肤生长、增强免疫力等功效。不定根培养是获取植物活性成分的有效途径之一。该研究以膜荚黄芪不定根为材料，研究了茉莉酸甲酯(MeJA)和水杨酸(SA)对芒柄花苷积累的影响。结果表明：MeJA处理显著增加了芒柄花苷的积累，最佳条件为向培养32 d的不定根中加入0.2 mmol/L MeJA、处理6 d,与对照相比增加了540%;SA处理虽然不能直接诱导芒柄花苷积累，但0.1 mmol/L的SA有助于MeJA诱导芒柄花苷的积累，较MeJA单独处理提高了39%。     

采收前短期红膜遮阴处理对高山红景天根的生长及红景天苷产量的影响

[目的]为提高栽培高山红景天的经济价值,研究了采收前短期红膜遮阴处理对高山红景天根生物量、红景天苷含量及产量的影响。[方法]对高山红景天分别进行了10、20、30和40 d的红膜遮阴处理,测定了雌株和雄株高山红景天根中红景天苷的含量和产量。[结果]红膜遮阴处理显著提高了高山红景天根中红景天苷的含量和产量,并且无论是雌株还是雄株,高山红景天根中红景天苷的产量均表现为在红膜遮阴处理20 d时最高,增幅分别达到21.21%和32.91%。[结论]从生产实际出发,在收获前20 d对高山红景天进行遮红膜处理,有利于提高红景天苷的产量。     

培养基及培养条件对青钱柳愈伤组织生长和黄酮含量的影响

在固体培养条件下,研究了不同外植体来源、培养基、植物激素、接种量、培养时间对青钱柳愈伤组织生长和黄酮含量的影响.结果表明:①不同外植体来源的愈伤组织增长量茎段大于叶片,而黄酮含量叶片大于茎段;②8种基本培养基中,改良MS培养基上的愈伤组织增长量及黄酮含量均显著高于其它培养基;③促进青钱柳愈伤组织增长量和黄酮含量积累的最佳激素组合为:1.0 mg.L-1KT+0.5 mg.L-12,4-D+0.3 mg.L-1NAA;④愈伤组织增长量最大时的接种量为0.65 g;⑤愈伤组织培养至12 d增长量最大,培养16 d,黄酮含量达最高值.     

高山红景天叶片愈伤组织诱导与植株再生

以高山红景天叶片作为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、芽增殖、生根的主要因素。结果表明:高山红景天叶片切块诱导愈伤组织的最佳培养基为MS 6-BA 2mg/L NAA0.5mg/L,诱导率达88.33%;高山红景天叶片切块经诱导可产生3种色泽的愈伤组织,其中只有绿色愈伤组织诱芽容易,绿色愈伤组织在附加1mg/L6-BA 0.1mg/LNAA的MS培养基中有利于芽的分化和增殖,培养7周左右,平均每个外植体分化形成的再生小植株数达到21.33个;增殖苗转入1/2MS培养基中生根率高达100%。     

聚乙二醇模拟水分对黄芩愈伤组织生长及黄芩苷含量的影响

对黄芩愈伤组织进行不同聚乙二醇浓度PEG-6000处理培养,探讨不同聚乙二醇(PEG)浓度对黄芩愈伤组织生长及黄芩苷含量的影响。采用不同浓度(0,5%,10%,15%,20%)的PEG-6000模拟水分对黄芩愈伤组织进行处理,测定其鲜重、干重,HPLC法测定黄芩苷含量,计算黄芩苷积累量。结果表明:PEG对黄芩愈伤组织鲜重、干重及黄芩苷含量均有显著影响。在培养周期内随着PEG浓度的升高,黄芩愈伤组织的生长受到不同程度的抑制,且浓度越高,抑制作用越明显,但当浓度为20%时,抑制效果减弱;干重表现与鲜重相反,浓度越高,干重越大,20%处理下的干重最大。黄芩苷含量和积累量在培养周期内随PEG浓度的升高而降低,对照组明显高于处理组,而20%处理下含量有所回升。PEG处理不利于黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的合成,但可以增加干物质的积累,20%处理下黄芩苷含量有所回升。     

不同提取工艺对高山红景天愈伤组织抗氧化活性的影响

为提高高山红景天愈伤组织提取物对DPPH自由基的清除效果,试验以生物反应器培养的高山红景天愈伤组织作为试验材料,对提取溶剂、溶剂浓度、提取时间、提取次数、料液比等条件进行了优化,探明最优提取工艺。结果表明:利用乙醇进行提取时,总黄酮含量最高,同时清除率也最高,达到76.05%。经过优化后,在乙醇浓度为80%,提取时间1 h、料液比1∶10(g∶mL),提取3次的条件下进行提取,清除率达到87.60%。     

3种植物浸提液对土人参愈伤组织多糖和黄酮含量的影响

[目的]探讨胡萝卜、土豆、番茄的浸提液对土人参愈伤组织的多糖和黄酮含量影响。[方法]在土人参愈伤组织诱导培养基中分别添加胡萝卜、土豆、番茄浸提液诱导愈伤组织生成,培养25 d后,用紫外分光光度计法测定土人参愈伤组织多糖和黄酮的含量。[结果]3种浸提液都能提高土人参愈伤组织多糖含量(P0.01);其中以添加胡萝卜浸提液的最高,但胡萝卜浸提液对土人参愈伤组织的黄酮含量没有显著影响(P0.05);土豆浸提液和番茄浸提液则使土人参愈伤组织黄酮含量降低(P0.05)。[结论]培养基中添加胡萝卜、土豆和番茄浸提液有助提高土人参愈伤组织的多糖含量,但未能提高甚至会降低其黄酮含量。     

组织培养生产高山红景天有效成分的研究──Ⅱ．高山红景天愈伤组织药用成分的检测

对高山红景天愈伤组织中有效成分红景天甙、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及氨基酸含量进行了检测．结果表明：愈伤组织红景天甙含量是天然根的５９．４％，具有ＳＯＤ活性，含有丰富的氨基酸等营养物质。     

组织培养生产高山红景天有效成分的研究：II.高山红景天愈…

对高山红景天愈伤组织中有效成分红景天甙、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及氨基酸含量进行了检测。结果表明：愈伤组织红景天甙含量是天然根的５９．４％，具有ＳＯＤ活性，含有丰富的氨基酸等营养物质。     

高山红景天叶片外植体条件对愈伤组织诱导的影响

以高山红景天不同性别植株不同部位、不同切段、不同时期的叶片为外植体,分析了外植体条件对愈伤组织诱导的影响。结果表明:高山红景天不同部位、切段、时期叶片的愈伤组织诱导效果有差异,横切基部段和纵切带叶脉段及上部叶片愈伤组织诱导率高;雌株叶片早期取材、雄株中期取材可能提高诱导效果。     

植物激素对高山红景天试管苗愈伤组织再分化的影响

以高山红景天试管苗叶片为外植体,研究植物激素浓度对高山红景天再分化的影响,比较诱导培养基和分化培养基植物激素对愈伤组织分化的影响,结果表明:高山红景天试管苗叶片愈伤组织再分化与植物激素浓度关系较大,在0.5 mg/L NAA 0.5 mg/L 6-BA配比的诱导培养基上诱导的愈伤组织均在提供的3种分化培养基上分化率最高;MS 0.5 mg/L NAA 5.0 mg/L 6-BA的分化培养基对不同诱导培养基来源的愈伤组织均表现较高的分化率.