不同方法对金黄色葡萄球菌基因组DNA提取效果的比较

分别采用酶解法、CTAB法、SDS法、CTAB/NaCl法等4种方法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,并进行比较改良。结果表明,SDS法提取的DNA含量最高;当金黄色葡萄球菌的DNA质量稀释至1.975×10-4pg时,SDS法提取的DNA仍能用于PCR扩增;此外,该方法稳定性好、经济性高,是理想的金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法。     

优化金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取方法

为提取金黄色葡萄球菌DNA,比较了酶解法、丙酮-酶解法、玻璃珠机械法等破壁方法,确定玻璃珠破壁法为最优提取方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA。     

沙门氏菌和金黄色葡萄球菌3种DNA提取方法的比较

[目的]对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌不同的DNA提取方法进行评价。[方法]采取3种不同的方法对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的DNA进行提取,利用全波长紫外/可见光扫描分光光度计比较其浓度和纯度。[结果]方法 3提取的DNA质量最好,浓度和纯度都较高,方法 1提取的DNA质量次之,纯度较高,浓度次之,方法 2提取的DNA浓度一般,但存在碳水化合物或盐类污染。[结论]方法 3是一种适用于沙门氏菌和金黄色葡萄球菌以及其他病原菌的有效提取方法。     

CTAB法在金黄色葡萄球菌DNA提取中的应用

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aures（以下简称金葡菌）是革兰氏阳性球状菌,直径0．8～1．0μm,呈葡萄状排列,有些菌株具有荚膜或黏层,广泛分布于空气、土壤、水、食具以及患有化脓性皮肤病人畜的皮肤上。金葡菌是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种主要细菌,食品受其污染后,不仅腐败变质,     

枳壳基因组DNA提取方法的比较研究

以枳壳(酸橙)叶片为试验材料,采用改良CTAB法、CTAB-硅珠法、SDS法、高盐低pH法和周世良法5种方法提取枳壳基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及SSR-PCR扩增3种检测方法比较DNA的提取效果,以期找到枳壳DNA的最佳提取方法.结果表明,5种方法中SDS法提取的DNA浓度最高(平均为900ng/μl),纯度最好(OD260/OD280平均值为1.90),且以SDS法提取的DNA为模板进行SSR-PCR扩增检测,目的条带清晰、亮度均一、稳定性和重复性好.因此,SDS法是枳壳DNA最佳提取方法,可用于分子检测试验.     

金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)中已知的群体效应系统是Agr系统和LuxS/AI-2系统,其在细菌浓度等于或大于1×10~7 CFU/mL时会被激活,通过调控相应基因,间接或直接调控生物被膜的产生和降解、细菌毒素的分泌以及细菌的生长。综述了金黄色葡萄球菌的群体效应研究进展,旨在为今后对金黄色葡萄球菌的研究寻找新方向,金黄色葡萄球菌致病性及生物被膜的形成与金黄色葡萄球菌的群体效应系统之间存在必然联系。     

提取大白菜基因组DNA的几种方法比较

对用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄和CTAB法提取的大白菜基因组DNA进行了比较,结果表明,改良SDS法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A20／A280为1．7－1．9,A260／A230为1．8－2．0,叶片的DNA产量为400μg/g。用该法提取的大白菜DNA适于进行RAPD分析。     

稻飞虱基因组DNA提取方法的比较

 以褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）为材料,分别采用SDS法,CTAB法,冰KAc法和饱和NaCl法提取褐飞虱的基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA数量与质量。结果表明： CTAB法和SDS法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和饱和NaCl法,适于PCR扩增。并且SDS法提取的DNA经过PCR扩增后得到较多的多态性位点。因此,SDS法是实验室提取稻飞虱基因组有效,经济实用的方法。     

兰科植物天麻基因组DNA提取方法的比较研究

天麻Gastrodia elata组织内含有大量的糖类、酚类等次生代谢物质，用常规的CTAB(十六烷基溴化铵)法或SDS(十二烷基硫酸钠)法难以获得高质量的DNA模板。为获得高质量的DNA，笔者通过对兰科植物天麻基因组DNA几种提取方法以及天麻不同部位所得的DNA质量进行分析。结果表明，SDS—CTAB法是较理想的提取方法，能满足普通PCR的需要。天麻不同部位DNA提取的结果表明，幼嫩花茎是获得高质量DNA的最佳部位。     

板栗基因组DNA几种提取方法比较研究

通过对板栗基因组ＤＮＡ几种提取方法获得的ＤＮＡ质量分析,表明改良ＳＤＳ法是最为理想的提取方法,能满足ＲＡＰＤ及其他分子生物学研究的需要。     

不同DNA提取方法对4种重要作物DNA提取效率的比较

以大豆、黄瓜、水稻、玉米的幼嫩叶片为材料,采用4种不同的DNA提取方法,比较不同方法的DNA提取效率。结果表明,不同作物采用不同的提取方法,DNA的质量和产率有显著差异。大豆、黄瓜、水稻采用CTAB法,玉米采用SDS法,其DNA提取效率高。     

翦股颖属植物基因组DNA提取方法的比较

采用试剂盒法、高盐低pH法、改良高盐低pH法、吸附柱法、SDS法、改良CTAB法,分别对翦股颖属植物品种Penncross、Seaside、PennA-4、粤选1号和新品系粤选10号的基因组DNA进行提取并经DNA电泳检测、蛋白分析仪分析和RAPD分析.结果表明:改良的CTAB法、改良高盐低pH法能够分离出产率高、纯度高、质量好的DNA,而吸附柱法的DNA产率偏低、但纯度较高,3种方法均能扩增出清晰的条带.     

牛肉中金黄色葡萄球菌的复核鉴定研究

[目的]采用2种方法复核检出牛肉中金黄色葡萄球菌阳性结果,确保检测结果的准确性。[方法]按照GB 4789.10—2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》方法前增菌、选择性分离培养、革兰氏染色和血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌,应用SN/T1870—2007《食品中致病菌检测方法实时PCR法》对疑似阳性结果进行了进一步验证和复核。[结果]经过2种方法验证可疑菌落,该批牛肉中检出金黄色葡萄球菌。[结论]分离并鉴定牛肉中金黄色葡萄球菌可疑样品时,可采用不同方法进行验证和复核,该方法可提高检测结果的准确性,可用于畜禽肉中致病菌的检测。     

金黄色葡萄球菌TraP蛋白单克隆抗体制备

研究通过骨髓瘤细胞SP2／O与经金黄色葡萄球菌（S．aureus）Trap蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选种单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,其中8株McAb（2A1、3A6、381、184、2C5、4C7、5C3和2D8）亚类为IgGl,3株McAb（2A7、3A1和1c4）亚类为IgM,轻链均为K链。8株IgGl型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1：128000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S．aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western—blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

建立一种快速聚合酶链反应(PCR)方法,用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.针对金黄色葡萄球菌独有的SEA基因设计1对引物,在PCR体系中对相应片断进行扩增,最后通过电泳技术与阳性对照进行对比来判断阴阳性.结果表明,该方法检出率高,样品中模板DNA含量仅有0.05 pg即可检出金黄色葡萄球菌,24 h即可报告结果.因此,PCR方法是一种高效、敏感、特异性高的检测技术,可用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测.     

面包虾中金黄色葡萄球菌生长预测模型的建立

为了研究金黄色葡萄球菌在面包虾中的生长规律,通过测定14、18、22、27、32、37℃下金黄色葡萄球菌在面包虾中的生长数据,采用修正Gompertz、修正Logistic、Baranyi、Weibull模型拟合生长曲线.通过比较4种模型的相关系数和标准差,采用最优模型拟合一级模型,将最优一级模型拟合出的最大比生长速率(μm)与迟滞期(λ)建立与温度的二级模型.结果表明,修正Gompertz模型最适合拟合生长曲线,模型经偏差因子(Bf)和准确因子(Af)验证,均在合适的范围内,表明所建模型能有效预测金黄色葡萄球菌在面包虾中的生长情况.     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布与时序性表达

【目的】研究食源性金黄色葡萄球菌各血清型肠毒素基因的分布,并进一步分析其时序性表达规律。【方法】针对51株各类食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株,应用PCR技术对11种葡萄球菌肠毒素进行基因分型;提取细菌总RNA,以ftsZ和ropB作为内标基因,使用反转录荧光定量PCR研究各肠毒素基因在细菌生长周期中的表达水平变化。【结果】除see、ses和set外,其余8种肠毒素基因在51株食源性金黄色葡萄球菌菌株中均有检出,且sei和seg的检出率最高（27.45%）。各肠毒素基因在mRNA水平的时序性表达规律基本一致,均在对数后期达到峰值,随后快速下降。以内标基因为参照,同一菌株中不同肠毒素基因的相对表达量以及不同菌株中同一肠毒素基因的相对表达量均差异较大。【结论】本文系统研究了肠毒素基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布,并探究了肠毒素基因的时序性表达规律,对金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制具有参考意义。     

大蒜素对金黄色葡萄球菌抑菌作用的研究

[目的]研究不同种类,不同处理方法蒜液抑菌效果及大蒜素最低抑菌浓度和对金黄色葡萄球菌生长曲线的影响,为进一步利用大蒜素资源提供理论依据。[方法]用大蒜提取蒜液为材料,定硫法测定其中蒜素含量,研究大蒜素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。[结果]大蒜液中含有的大蒜素对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用,经过机械破碎或挤压得到的蒜液抑菌效果比蒸煮后蒜液好,紫蒜抑菌效果优于白蒜,蒜素的最低抑菌浓度为32 mg/ml。细菌生长曲线表明,对数生长期的金黄色葡萄球菌对大蒜素敏感,而稳定期的菌体抑制作用较弱。[结论]大蒜素在体外对金黄色葡萄球菌有很好的抑菌作用。