濒危药用植物延龄草RAPD反应体系的建立

以濒危药用植物延龄草(Trillium tschonoskiiM.)的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA进行RAPD扩增,优化了RAPD扩增反应的程序及模板、引物、dNTP、Taq酶浓度等参数。结果表明:适合延龄草的RAPD扩增程序为:94℃预变性5 min,然后执行40个循环,每个循环中94℃变性1 min,36℃退火1 min,72℃延伸2 min,最后72℃延伸10min;适宜的反应体系为:25μL总体积中含DNA模板50 ng,Mg2+2.5 mM,引物0.6μM,dNTP 0.2 mM,Taq DNA聚合酶3 U。     

亚侧耳RAPD反应体系的优化

经过RAPD优化试验,确定适合亚侧耳PCR扩增体系(总体积25μL)为:10×PCR Buff-er 2.0μL、2.5mM/L dNTPs3.0μL、5U/μL Taq酶0.20μL、5μM/L引物1.5μL、200ng/μl模板DNA 2.0μL、去离子水16.30μL。PCR扩增程序为:94℃预变性3min,94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸2min,40个循环,72℃延伸10min。     

漾濞核桃RAPD反应优化体系的建立

以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0 mmol.L-1Mg+2,0.3 mmol.L-1引物,含1.6 mg.L-1模板,2.5 ul 10×Buffer,dNTPs各0.2 mmol.L-1。扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s。     

红楠ISSR-PCR反应体系的建立和优化

为建立稳定的红楠ISSR-PCR最佳反应体系,在探索红楠基因组DNA提取的基础上,利用单因子试验和正交试验设计对反应体系进行优化。首先采用单因子试验对Mg²⁺、引物、模板DNA、dNTPs的不同浓度水平进行优化,找出ISSR-PCR反应各因素的最佳浓度;同时为进一步增加结果的可靠性,采用正交试验设计方法 对Mg²⁺、引物、模板DNA、dNTPs 4个因素3个浓度水平进行优化和筛选。综合两种试验方法结果,最终获得了红楠ISSR-PCR最佳反应体系:反应体系为20 μL,Taq酶0.05 U·μL^-1,Mg²⁺ 2.0 mmol·L^-1,模板DNA 1 ng·L^-1,dNTPs 0.3 mmol·L^-1,引物(835) 0.5 μmol·L^-1,1×PCR缓冲液。建立重复性好、稳定性优良的ISSR-PCR反应体系,为下一步红楠群体遗传结构和遗传变异研究提供了技术支持。     

金樱子SRAP-PCR反应体系的建立与优化

以广西南宁产的金樱子叶片为材料,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物和模板DNA用量5因素进行了优化。结果表明:适用于金樱子SRAP-PCR的最佳反应体系为:反应总体积10μL,包含2.0 mmol/L Mg2+、0.4 mmol/L dNTPs、0.5 UTaqDNA聚合酶、3μmol/L引物、25ng DNA及10×PCR Buffer;各因素对PCR反应影响由大到小依次为:Mg2+、DNA、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶。用7份不同来源的金樱子材料对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证,均获得了条带清晰、多态性丰富的扩增图谱,证实了该体系的稳定可靠。     

我省板栗主栽品种(无性系)RAPD反应体系的建立

在RAPD反应中,有许多影响结果的稳定性和准确性.本项研究采用浙江省8个板栗主栽品种(无性系),对RAPD各种反应条件进行了探索,结果表明,板栗理想的反应体系为20μl反应体积含有100mmol/LTris-Hcl,500mmo1/LKCl,20mmol/LMgCL2,0.01%Gelatin,dATP、dTTP、dCTP、dGTP的量各为100μmol/L,50~200ng引物,0.75～1.0单位Taq酶,2～10ng模板DNA.反应条件为94℃预变性2min,再94℃30s、40℃30s、72℃1.5min扩增38个循环;最后在72℃延伸7min.应用上述反应体系进行板栗RAPD反应,扩增产物在1.0%琼脂糖凝胶中电泳,经EB染色后在紫外灯下观察照相,可获得满意的DNA指纹图谱.     

RAPD分子标记在真菌研究中的应用

简要评价了RAPD分子标记,并对其在真菌研究中的各种应用进行了阐述。     

桑树相似品种的RAPD分子标记遗传分析

应用筛选出的12条RAPD引物对8个形态学特征相似的桑树材料进行品种鉴定,结果显示扩增片段长度多态性高,不同种质间呈现较为丰富的遗传变异位点。I组中昌潍大白条、白条桑亲缘关系最近,大白条次之,益都大白条与其他3种材料亲缘关系最远;地理起源相近的昌潍大白条与大白条存在较大遗传变异。II组中荷叶白、荷叶白(4×)亲缘关系最近,龙门荷叶次之,团头荷叶白与本组其他3种材料亲缘关系较远。     

一种适用于林地土壤微生物RAPD体系的建立

RAPD作为近年来新兴起来的分子标记,以其效率高、样品用量少、灵敏度高和特异性强等优点在土壤微生物基因组分析、多态性研究等方面有着广泛的应用。但是由于本项技术所用的引物较短（通常为10bp）,所以对反应条件较为敏感,通过对退火温度、Mg^2＋浓度、Taq酶用量进行优化,建立了较为稳定、重复性较好的适用与土壤微生物RAPD体系。     

基于SSR分子标记的杜仲遗传多样性体系建立

In order to set up the genetic diversity system of Eucommia ulmoides Oliver based on SSR molecular markers, the establishment of SSR-PCR reaction system and screening out SSR marker primer showing high polymorphism were studied. A L₉(3⁴) orthogonal design was performed to optimize the main factors of the SSR-PCR reaction system. The results indicated that the best SSR-PCR reaction system for E.ulmoides was DNA template 1 μL (30~60 ng·μL^-1), 2×Taq PCR Master Mix 10 μL, primer 1 μL with the total volume of 25 μL. The PCR reaction system had high stability and repeatability, the pairs of SSR primers with high polymorphism were gotten. The 8 E.ulmoides samples' DNA sequence was amplified with 13 pairs of SSR primers by SSR-PCR technique, 34 alleles were detected, 2.6 alleles were detected from per site on average. Each allele's effective number was 1.751 5, and the h value was 0.379 8, the average I value was 0.643 3. This study is helpful in using SSR molecular marker to analyze genetic diversity and genetic relationship in E. ulmoides.     

核桃RAPD条件的优化

对核桃RAPD分析中Mgh、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶浓度及复性温度等因素进行了比较影响分析。建立了适合核桃DNA多态性分析的RAPD反应体系：25μL反应液中,3．5mM Mg^2＋、0．2mM dNTPs、0．2μM随机引物、1．0UT aq酶、50ng～100ng模板DNA;反应过程为45个循环,94℃变性60s,36℃退火60s,72℃延伸120s。     

濒危植物巴东木莲RAPD扩增反应体系的建立

以巴东木莲叶片为材料,通过对反应体系中Mg2+、dNTP、Taq酶、模板、引物浓度等影响因素的优化,确定了一套适于巴东木莲RAPD分析的稳定反应体系,即25μl的总反应体系中:模板DNA 100 ng,Mg2+2.1 mM,引物0.7μM,dNTP0.20 mM,TaqDNA聚合酶3 U。     

家蚕来源肠球菌RAPD反应体系的优化

通过调整 Mg2 、DNA模板、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs的浓度及PCR反应循环次数,建立并优化了家蚕来源肠球菌的RAPD-PCR反应体系及条件.结果表明,在25 μl反应体系下,当Mg2 的浓度为3.5 mmol/L、DNA模板加入量为50 ng、引物浓度为15 pmol/L、Taq DNA聚合酶加入量为3U、 PCR反应循环次数为45时,扩增结果最好.在本实验室,为家蚕来源肠球菌的遗传多样性研究建立了一种最佳RAPD分析模型.     

木荷种源遗传多样性和种源区初步划分

利用RAPD分子标记研究我国高效生物防火和优良用材树种木荷主要分布区15个地理种源的遗传多样性和遗传结构.结果显示,木荷具有丰富的遗传多样性,木荷种内平均基因多样度为0.363 6.研究发现木荷种源Shannon表型多样性与产地纬度呈显著的负相关,南部种源的遗传多样性显著高于北部种源,从而推测25°N左右的自然分布区可能是木荷的分布中心.木荷有27.14%的遗传变异存在于种源间,而72.86%的遗传变异来自于地理种源内.基于分子水平上的种源聚类,可将木荷分布区划分为3个种源区:北缘种源区(安徽南部和浙江北部)、中部种源区(南岭以北、浙江南部以南)和南部种源区(南岭以南),而南部种源区和中部种源区又都可再分为东部和西部2个种源亚区.     

广东银杏遗传多态性的RAPD分析

采用RAPD分析法对32个银杏品种或群体的叶片DNA进行遗传多态性分析,从56个随机引物中筛选出8个单引物和4对双引物进行RAPD扩增及琼脂糖凝胶电泳,并进行UPGMA聚类分析.结果表明,8个单引物和4对双引物的RAPD扩增共得到85条DNA带,其大小主要分布于300～2 500 bp之间,其中81条具有多态性,多态百分率为95%,每条(对)引物产生DNA带的平均数为7.08.根据聚类分析的结果,供试的样品可分为两大类,北京梅核、南雄上矽(雄)、华口大白果为一类,其它的为第二类.在四个泰兴品种中,泰兴2号和泰兴3号的相似性系数达0.97,表明它们的遗传关系非常接近,可能为同一品种;而原产广东的不同品种或群体之间的遗传差异较大,可能有不同的起源.此外,若将32个银杏品种或群体按照综合分类法进行品种类群划分,不同品种类群之间的界限并不清晰,有较多的品种交叉.     

RAPD技术及其在葡萄属植物研究上的应用

对ＲＡＰＤ技术、原理及其在基因组研究方面所具有的特点和优势进行讨论，综述了ＲＡＰＤ技术在葡萄上的研究进展，并展望了ＲＡＰＤ技术在葡萄属植物研究上的应用前景。