马铃薯癌肿病和马铃薯X病毒

Nienhaus和Stille1966年报道,从被马铃薯X病毒(PVX)系统感染的马铃薯植株上发育出来的癌肿病菌孢子囊释放的游动孢子,能将该病毒传播到其它植株上。然而,在接种之前,游动孢子与病毒的悬浮液在试管内混合,使游动孢子与病毒微粒相接触,并不会发生病毒的传播。自从Nien-haus和Stille报导壶菌属的马铃薯癌肿病菌能作为马铃薯X病毒传播的媒介后,这已被广     

马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒胶体金免疫层析试纸条的研制

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒的兔多克隆抗体。用微定量喷头在硝酸纤维素膜上喷好病毒检测线和羊抗兔抗体质控线,制成免疫层析检测试纸条。马铃薯X病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释10000倍(重量/体积)马铃薯Y病毒试纸条检测烟草病汁液可稀释1000倍。10min内即可出检测结果。两种试纸条相互测试,未出现交叉反应。用健康和缓冲液对照测试,两种试纸条结果都为阴性。田间采集的马铃薯叶片用试纸条检测的结果和酶联结果相吻合。在密封、干燥、低温的条件下保存,有利于维持试纸条的稳定性。     

马铃薯X病毒运动蛋白基因的原核表达、抗血清制备及应用

构建马铃薯X病毒运动蛋白(P25)原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中诱导表达融合蛋白,所表达的P25蛋白经SDS-PAGE电泳纯化后免疫小鼠,抗血清效价为1∶4000,抗血清与PVX有特异性反应(P/N>2),且具有较强的反应特异性,而与PVY、TMV均不发生反应.该方法制备的抗血清可用于ELISA检测PVX感病植株及Western blot检测转基因植株.     

马铃薯X病毒汁液的保存期实验

马铃薯Ｘ病毒(ＰｏｔａｔｏｖｉｕｓＸ,ＰＶＸ),虽不是危险性检疫病毒,但它在马铃薯上是发病最普遍最严重的病毒之一。在血清学诊断实验中,酶联诊断试剂盒具有快速、灵敏的特点,提供阳性对照,使之更准确,对提高判断准确率是很重要的。而阳性对照抗原性保存时间的长短,直接影响酶联诊断试剂盒的使用期限。为了解决这一问题,我们进行了ＰＶＸ病毒汁液保存期实验,本文报道了实验结果。1　材料和方法1.1　病毒汁液将马铃薯Ｘ病毒接种在普通烟(ＷｈｉｔｅＢｕｒｌｅｙ)上,放在防虫的温室中,待显症后,取症状明显的叶片,放在研钵中磨成汁液,经双层…     

A-蛋白结合乳胶粒子的乳胶凝集试验检测植物病毒研究

通过对小麦白粉病田间种群扩散指数的研究表明,在发病的初中期,该病在田间的分布趋向于集中,直到发病后期,病株在田间的分布才趋向于均匀。病株率80%以下时,田间病株呈集团分布(负二项分布)型;而当病株率达80%左右时,则呈随机分布(潘松分布)型。在保证可靠概率95%、允许误差不超过1%的条件下调查病株率的适宜理论抽样数量为2500～5000株,并随病株率变化而异。当病株率呈集团分布时应以采用“Z”字取样法为宜。     

A-蛋白结合乳胶粒子的乳胶凝集试验检测植物病毒研究

用 A-蛋白结合乳胶粒子,再吸附烟草坏死病毒(TNV)抗血清中的免疫球蛋白 G(IgG),制成乳胶致敏抗体复合物。这种复合物可检测病株粗提液和部分提纯液中的 TNV,它们的灵敏度分别为1:4096和0.625微克/毫升。特异性强。该方法也适用于白三叶草花叶病毒(WCMV)、大豆花叶病毒(SMV)、苜蓿花叶病毒(AMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)等的检测试验。     

一个马铃薯X病毒分离物的外壳蛋白基因序列分析与株系鉴定

对山东省侵染马铃薯的一个马铃薯X病毒(PVX)分离物PVX—SD1的外壳蛋白(CP)基因进行了克隆和序列分析。以提纯的病毒RNA为模板，应用RT-PCR扩增目的基因，通过常规的基因克隆法将扩增的CP基因导入pUC19载体，测序。结果表明，PVX—SD1的CP基因长719bp，可编码248个氨基酸；与Gen—Bank中报道的15个有代表性的株系或分离物相比较，核苷酸同源性在80．1％-99．7％，氨基酸同源性在89．8％-100％；与欧洲株系UK3仅1个核苷酸不同，同源性为99．7％，氨基酸同源性达100％，表明它们可能为同一株系，属于X^3组．     

检测植物病毒ELISA异种动物抗体双夹心法的研究和应用

 制备南方菜豆叶花叶病毒、大豆花叶病毒、烟草花叶病毒、番茄不孕病毒、苜蓿花叶病毒的兔抗血清和鼠腹水抗体,组合成ELISA异种动物抗体双夹心试验。抗体球蛋白的适宜工作浓度为4微克/毫升;未经纯化的特异抗血清(抗体)的适宜工作浓度为10^-4(即1/10,000)稀释度。检测以上5种病毒的灵敏度:提纯抗原为10-0.64毫微克/毫升;病叶澄清液为1/10,000-1/100,000稀释度。本法灵敏度与ELISA双抗体夹心法相当或略高。一般8小时内可得出结果。适用于大量样品的检测。     

马铃薯X病毒荧光定量PCR检测体系的建立及应用

马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是危害茄科作物的一种重要病毒,为了建立特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系,本研究以PVX-1985分离物中外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列为模板,设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的引物成功构建出标准曲线。利用建立的体系,成功检测到以含pCaPVX440侵染性克隆载体的农杆菌C58C1接种后的本氏烟(Nicotiana benthamiana)中PVX病毒RNA的拷贝数。     

双引物探针RT-Realtime PCR检测马铃薯A病毒

马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)是我国重要的检疫性有害生物。本研究根据PVA中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了两套PCR引物和TaqMan探针,建立了双引物探针RT-RealtimePCR检测PVA的方法。该方法采用实时荧光PCR技术,有效地提高了检测的灵敏度;同时两套引物探针相互验证,有效提高了结果的准确性。实验结果表明,本方法准确、灵敏、简便、快速,检出低限可达0.5fg/μL植物总RNA。     

亚洲玉米螟越冬代成虫扩散行为与迁飞可能性研究

作者于1987和1988两年在河北省衡水市当地越冬代亚洲玉米螟成虫盛发期,采用人工标放回收方法对其扩散行为及迁飞可能性进行了研究。两年分别释放人工饲养的标记玉米螟成虫15万和Lipaphis erysimi(kaltenbach), diamondback moth60万头,在45.5km半径范围内分别回收到标记雄蛾461和2650头,首次明确了我国北方亚洲玉米螟越冬代成虫的田间扩散飞行规律,95％集中在距释放点4km半径范围内;部分个体可扩散到6—30km半径范围内,最远距释放中心45.5km。成虫扩散飞行受风力、风向和温度影响。结果表明,亚洲玉米螟虽有远距离迁飞的潜力,但至少在越冬代发生期基本不存在大量远距离迁飞的可能性。     

Hoaglands营养液栽苗法快速鉴定甜椒疫霉病菌致病性及对杀菌剂敏感性研究初报

 甜椒疫霉病是我国目前甜椒上的一种主要病害。蔬菜育种及植病工作者正在对其进行深入研究。     

黄板诱杀斑潜蝇技术研究

设置黄板诱集成虫是斑潜蝇测报和防治的重要手段.通过在茄果类及瓜类蔬菜田的对比试验,结果表明,柠檬黄色板在贵州诱杀斑潜蝇成虫量是橘黄色、淡黄色板的3倍以上;插板位置,黄板下端高于作物顶部20cm的诱虫量,分别是黄板下端和上端与作物顶部平齐的1.8倍、1.6倍;插板密度,每667m274块的每块诱虫量,分别比每667m245块、27块高31.8%、41.6%.试验为黄板诱杀斑潜蝇的设置技术提供了依据.     

利用RAPD研究松材线虫和拟松材线虫亲缘关系

 用RAPD技术对18个松材线虫株系、8个拟松材线虫株系基因组DNA多态性进行研究。在事先优化的条件下,用15个随机引物进行PCR扩增,一共扩增出165条谱带,多态性为91.5%。通过聚类分析,结果表明:松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的差异性,但种间差异大于种内差异,因而松材线虫和拟松材线虫应为2个独立的种。     

甘肃鼢鼠对农作物的为害程度及防治中经济阈值的初步研究

1989年4—11月,对黄土高原农作区甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)的不同密度,以及对农作物造成的为害程度和防治中的经济阈值诸问题进行了初步研究。根据鼢鼠不同密度及作物损失率,将其对农作物的为害程度分成6个等级。在防治鼢鼠中,作者根据鼢鼠对农作物所造成的损失、防治费用和农产品价格,提出了黄土高原农作区鼢鼠防治的经济阈值模型。并初步确定,鼢鼠密度达到3.1只/ha 时,需开始进行防治。这样将会避免农作物遭受损失。     

甘肃鼢鼠对农作物的为害程度及防治中经济阈值的初步研究

1989年4-11月,对黄土高原农作区甘肃鼢鼠(Myospalax cansus)的不同密度,以及对农作物造成的为害程度和防治中的经济阈值诸问题进行了初步研究。根据鼢鼠不同密度及作物损失率,将其对农作物的为害程度分成6个等级。在防治鼢鼠中,作者根据鼢鼠对农作物所造成的损失、防治费用和农产品价格,提出了黄土高原农作区鼢鼠防治的经济阈值模型。并初步确定,鼢鼠密度达到3.1只/ha时,需开始进行防治。这样将会避免农作物遭受损失。     

A蛋白-金颗粒复合物(pAg)诊断和检测植物病毒的研究

 以A蛋白-金颗粒复合物(Protein A-Gold complexes)标记植物病毒粒体。利用抗原抗体特异性反应和A蛋白与抗体中免疫球蛋白IgG结合的特性,在电镜下观察到同源关系中的金颗粒吸附于病毒粒体周围;而异源关系中,金颗粒则被冲洗掉或随机分布。该法专化性受抗血清稀释度和吸附时间等因素影响。对杆状、线状病毒粒体来说,抗血清最适稀释度为1×10²-10³倍,对球形病毒粒体来说,抗血清稀释度以1.2×10³倍为佳。抗血清吸附时间以3-10分钟的效果最好。     

稻蝗若虫为害水稻损失及经济效益指标在防治中应用的探讨

采用多点试验方法,对稻蝗若虫集中田边为害期导致的水稻产量损失进行测定。结果表明：若虫虫量与产量损失呈正相关（ｒ＝０．９３５３）,损失率回归方程ｙ＝１．２９４７＋５．５７２３ｘ。应用经济效益指标代替目前沿用的经济阈值指标,在生产水平５５０ｋｇ／６６７ｍ２,６月上旬稻田边２ｍ范围内化学防治的虫量指标为３１０头／百丛,较原指标６１头／百丛放宽５倍。     

利用青枯菌胞外蛋白输出缺失突变体防治西红柿青枯病的研究

作者采用转座子Tn5诱变植物青枯菌获得了世界首例植物青枯菌胞外蛋白输出缺失突变体(简称eep突变体)。该突变体在缺失了许多胞外蛋白(包括有植物细胞壁降解酶、果胶酶类和纤维素酶类)外输功能后,也失去了对寄主的致病力。因此,该类突变体有可能被应用于植物青枯病的生物防治。本文主要是针对eep突变体在番茄上的定埴能力和生防效果进行研究。