鸡眼区相关淋巴组织ND疫苗点眼免疫应答 Ⅱ.局部T淋巴细胞亚群的变化

本研究采用流式细胞仪技术对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫疫苗点眼免疫后的局部 Ｔ 淋巴细胞亚群的变化进行了研究。研究发现, Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后眼区相关淋巴组织对 Ｎ Ｄ 疫苗可 产生良好的细胞免疫应答,免疫组 Ｃ Ｄ＋４ Ｔ及 Ｃ Ｄ＋８ Ｔ 淋巴细胞数量于点眼免疫后迅速升高,其百分比含量明显高于非免疫组。     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗的点眼免疫应答 Ⅰ.局部体液免疫应答

本研究采用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ、免疫组织化学方法、病理组织学方法对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫（ Ｎｅｗ ｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ, Ｎ Ｄ）疫苗点眼免疫后的局部体液免疫应答进行了研究。研究发现, Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ 疫苗点眼免疫后鸡眼区相关淋巴组织（ Ｈｅａｄａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍ ｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ, Ｈ Ａ Ｌ Ｔ）对 Ｎ Ｄ 疫苗可产生高效的局部体液免疫应答：①免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 抗体及哈氏腺（ Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｉａｎｄ, Ｈ Ｇ）中 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ 型浆细胞出现较对照组早,且抗体滴度及浆细胞数量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。免疫组泪液和血清中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ｇ 抗体滴度及哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞数量也均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）,且哈氏腺中 Ｉｇ Ｇ 型浆细胞的出现早于对照组;②点眼免疫后泪液中 Ｎ Ｄ Ｖ特异性 Ｉｇ Ａ、 Ｉｇ Ｍ抗体出现较血清中的早,且抗体滴度也显著高于血清中（ Ｐ＜ ０．０５）;③ Ｌａｓｏｔａ 系 Ｎ Ｄ苗点眼免疫后可使结膜相关淋巴组织的形成和发育明显提前,免疫组结膜相关淋巴组织中的淋巴滤泡数量极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．     

鸡眼区相关淋巴组织对ND疫苗点眼免疫频答：Ⅱ.眼区局部T淋巴细？…

本研究采用流式细胞仪技术对鸡眼区相关淋巴组织在鸡新城疫疫苗点眼免疫后的局部Ｔ淋巴细胞亚群的变化进行了研究,研究发现,ＬａＳｏｔａ等疫苗点眼免疫后眼区相关淋巴组织对ＮＤ疫苗可产生良好的细胞免疫应答。免疫组结膜相关淋巴组织和哈氏腺中ＣＤ＾４＋和和ＣＮＨＮＸＬＥＱＯＶＪＧＧＦ ＵＴＨ ＱＫＱ ＲＧ ＮＦＧＫＴＡＫ ＹＭ 。ＱＫＵＭＡＤＷＥＵＪ ＃粒模? ＤＪ ＷＶ ＸＸ ＷＹＮＫＪＧ ＪＥＪＯＹＭ ＧＦ     

鸡结膜结合淋巴组织（CALT）对新城疫疫苗点眼免疫应答

１８０只１日龄公雏平均分成Ａ、Ｂ、Ｃ三组。Ａ组于１日龄手术切除下眼睑结膜。Ａ、Ｂ两组于１０日龄和２０日龄用鸡新城疫Ⅱ系（ＮＤⅡ）弱毒疫苗点眼首免和二免，Ｃ组为对照组。定期收集泪液、血清、ＣＡＬＴ和哈德氏腺，比较观察其抗体ＨＩ效价消长规律与免疫组织细胞变化特点。结果，Ｃ组非免鸡泪液ＨＩ效价比血清ＨＩ效价稍低，１０至３４日龄均呈直线下降，３４至４８日龄维持在极低的水平上（１．２￣２Ｌｏｇ２）。Ｂ组点眼     

接种IBDV雏鸡在接种ND疫苗后免疫器官组织抗体生成细胞的变化

无ＩＢＤＶ母源抗体的健康滨白１日龄公雏接种ＩＢＤＶ，同时设健康对照鸡。接种鸡及对照鸡均分成两组。接种鸡中的一组在１４日龄时经点眼，滴鼻免疫接种ＬａＳｏｔａ苗，对照鸡的一组也同样免疫，称为感染一次免疫鸡和对照一次免疫鸡；感染鸡的另一组在首次免疫（１４日龄）后２周（２８日龄）进行ＮＤ二次免疫，对照鸡的另一组也进行同样处理，称为感染二次免疫鸡和对照二次免疫鸡。在免疫后不同时期检测各组鸡氏囊，胸腺，脾脏，     

结膜相关淋巴组织和哈氏腺免疫协同关系的研究Ⅰ．结膜相关淋巴组织缺失对哈氏腺点眼免疫应答的影响

采用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学方法、手术切除结膜相关淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ，ＣＡＬＴ）法对结膜相关淋巴组织和哈氏腺（Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｌａｎｄ，ＨＧ）在点眼免疫应答过程中的相互协同关系进行了研究。研究发现，采用外科手术于１日龄切除结 膜相关淋巴组织后切除组点眼免疫后泪液中ＮＤＶ－特异性ＩｇＡ、ＩｇＭ型抗体滴度及哈氏腺中ＩｇＡ、ＩｇＭ     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C三组。A组于1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于12日龄时结扎鼻泪管，用新城疫克隆30苗点眼。C组为对照组。23日龄分别采取其CALT和哈德氏腺，比较观察其组织细胞。结果，1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失，点眼免疫后，哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少，而正常接种ND克隆30（B组）后，CALT发生早，生长快，淋巴细胞数量多，故本实验证实CALT对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。CALT缺失鸡是研究黏膜免疫系统比较理想的模型。     

贫血病雏鸡Lasota疫苗免疫后免疫器官组织T细胞亚群变化

应用微波间接酶标抗体染色法(WIEAS)对鸡贫血病毒(CAV)感染雏鸡Lasota疫苗免疫后免疫器官组织的CD4^ 、CD8^ T细胞数量及CD4^-与CD8^ T细胞比值的变化进行了动态研究，结果发现，CAV感染1日龄雏鸡Lasota疫苗免疫后，其胸腺、脾脏和盲肠扁桃体的CD4^ 、CD8^ T细胞数量及CD4^ 与CD8^ T细胞比值均程度不同地低于CAV未感染Lasota疫苗免疫对照雏鸡。表明，CAV感染雏鸡免疫器官组织对Lasota疫苗的细胞免疫应答机能降低或减弱。     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗点眼免疫反应 Ⅱ.组织学与免疫组织化学研究

60只 1日龄健康雏鸡随机分为 A、B、C三组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜。A、B两组于 12日龄时结扎鼻泪管 ,用新城疫克隆 30苗点眼。C组为对照组。 2 3日龄分别采取其 CAL T和哈德氏腺 ,比较观察其组织细胞。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡 CAL T缺失 ,点眼免疫后 ,哈氏腺的免疫细胞也较正常免疫鸡少 ,而正常接种 ND克隆 30 (B组 )后 ,CAL T发生早 ,生长快 ,淋巴细胞数量多 ,故本实验证实 CAL T对哈氏腺免疫细胞的数量与成分有一定的调控作用。 CAL T缺失鸡是研究黏膜免疫系统比较理想的模型     

感染CIAV雏鸡免疫器官对ND疫苗的细胞免疫应答

对１日龄感染ＣＩＡＶ雏鸡接种ＮＤ疫苗后，其免疫器官组织Ｔ细胞数量的动态变化进行研究．结果，感染ＣＩＡＶ雏鸡ＮＤ疫苗免疫局，其胸腺和脾脏以及盲肠扁桃体和哈德尔腺的Ｔ细胞数量，于接种ＮＤ疫苗后较未感染ＣＩＡＶ免疫对照雏鸡明显减少，表明感染雏鸡的中枢和外周免疫器官及局部免疫组织对ＮＤ疫苗的细胞免疫应答功能明显降低．ＮＤ强毒攻击后，感染免疫鸡的免疫保护率明显低于未感染免疫对照鸡．     

切除结膜结合淋巴组织鸡对新城疫疫苗的免疫反应Ⅰ.局部与循环抗体检测

实验将 60只 1日龄健康雏鸡随机分为A、B、C 3组。A组为CALT缺失组 ,B组为免疫组 ,C组为非免疫对照组。A组于 1日龄手术切除下眼睑结膜 ,A、B两组于 1 2日龄结扎鼻泪管后进行点眼免疫接种新城疫克隆 30疫苗。2 3日龄时 ,收集A、B、C各实验组鸡的血清和泪液 ,做红细胞凝集抑制试验 (HI试验 )、酶联免疫吸附试验(ELISA)。比较观察各实验组雏鸡血清和泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量的变化特点。结果 ,1日龄手术切除下眼睑结膜后造成鸡CALT缺失 ,CALT缺失鸡点眼免疫后 ,泪液抗体HI效价与IgA、IgG、IgM含量比免疫组雏鸡低。但对雏鸡的抗体生成的规律并不产影响。故实验证实了CALT对眼区局部抗体的产生及其种类有重要的调控作用 ,协同哈氏腺完成局部免疫的功能     

鸡新城疫疫苗点眼免疫后哈氏腺中IgA、IgM、IgG型浆细胞的数量变化及分布特点

用Lasota系ND疫苗分别于10、20日龄进行点眼免疫后采用SLAB免疫组织化学对鸡哈氏腺在新新城疫（Newcastle Disease,ND)疫苗点眼免疫后IgA、IgM、IgG型浆细胞的数量变化及分布特征进行了研究。研究发现，Lasota系ND疫苗点眼免疫后鸡哈氏腺中（Harderian Gland,HG)中IgA、IgM、IgG型浆细胞的出现较对照组早，并于48日龄达到峰值，一免及二免后三种类型的浆细胞数量均极高于对照组（P＜0．01），其中IgA浆细胞的数量最多，IgM型浆细胞次之，IgG型浆细胞的数量最少。IgA、IgM、IgG三种浆细胞均散在分布于哈氏腺的间质中，且主要围绕各级管腔上皮及腺上皮分布，其中成熟的浆细胞紧贴腺上皮及管腔上皮分布。表明Lasonta系ND疫苗点眼免疫后可促进哈氏腺中的IgA、IgM、IgG型浆细胞的分化、成熟，这些浆细胞分泌的抗体成分可通过上皮而被分泌到管腔中去，最后到达泪液中，在眼区及上呼吸道起到保护作用。     

脂质体对鸡新城疫疫苗免疫增强作用的研究

应用薄膜分散法(TFDM)和反相蒸发法(REM)制备了两种脂质体一新城疫(L-ND)疫苗.由REM制备的L-ND疫苗,无论应用于高母源抗体鸡,还是低母源抗体鸡,L-ND疫苗组的HI抗体效价均明显高于单纯疫苗组(P<0.05);在免疫后2～3周内,其ANAE~+淋巴细胞百分数也均高于单纯疫苗组(P<0.05);对高母源抗体鸡的有效免疫期比单纯ND疫苗延长1周,对低母源抗体鸡的有效免疫期延长3周.     

淫羊藿多糖对雏鸡免疫器官及新城疫疫苗免疫效果的影响

疫苗免疫接种是预防和控制传染病的重要措施,而佐剂是疫苗研究的重要组成部分.选择合适的佐剂不仅可以增强疫苗的免疫效果,而且可以提高机体的抵抗力.本研究将50、100、150 g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化,制备疫苗免疫雏鸡,通过检测抗体效价和免疫器官指数,探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响.结果表明,100 g/L和150 g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生,提高脾脏指数,但对法氏囊指数的促进作用不明显.     

类脂作为佐剂对新城疫灭活疫苗免疫效果的影响

对免疫新城疫(ND)类脂灭活疫苗的雏鸡分别于免疫后2、7、14、21、28、35和42 d进行法氏囊、脾脏、胸腺指数测定,以注射生理盐水、ND抗原、类脂的鸡只为对照.结果表明,免疫后2～14 d,各组指数差异不显著,14 d以后,疫苗组与其他组比较差异显著,与类脂组差异不显著.表明,类脂作为佐剂用于制备ND疫苗,具有较强的免疫增强作用.     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

卡介菌多糖核酸对新城疫疫苗免疫雏鸡抗氧化及免疫活性的影响

本试验将卡介菌多糖核酸应用于新城疫疫苗免疫雏鸡,观察其抗氧化和对鸡体免疫功能的影响。将200只1日龄AA肉鸡随机分为5组,每组40只,分别为卡介菌多糖核酸高（0.12 mg/只）、中（0.06 mg/只）、低（0.03 mg/只）剂量组,黄芪多糖组（阳性对照,0.06 mg/只）和空白对照组。每组鸡7日龄时免疫新城疫疫苗并同时按分组要求注射药物,连续7 d,空白对照组以生理盐水代替。分别于用药后5、10、15和20 d分批剖杀鸡,采取胸腺、脾脏、法氏囊和颈静脉血,测定免疫器官系数,鸡新城疫病毒（NDV）抗体滴度,血浆IgG、IgM、超氧化物歧化酶（SOD）、脂质过氧化物（LPO）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量。结果表明,卡介菌多糖核酸能显著提高鸡血清中SOD和GSH-Px含量,降低LPO含量（P＜0.05）,具有良好的抗氧化功能;能显著提高受试鸡的免疫器官系数、NDV抗体滴度、血清中IgG和IgM含量（P＜0.05）,具有良好的免疫佐剂效应。     

左旋咪唑对鸡新城疫La Sota疫苗免疫效果的影响

为研究左旋咪唑对鸡新城疫LaSota疫苗免疫效果的影响,试验采用1日龄健康AA+肉仔鸡200只,随机分为4组,每组50只,第4天开始,Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组分别以左旋咪唑5、10和20mg/kg·W,一天1次,连饮3d,Ⅳ组为对照组。7日龄时I组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别按说明书注射新城疫LaSota疫苗。分别于14、21、35、42日龄采用反向间接血凝抑制试验、ANAE+法测定新城疫抗体水平和免疫器官中T淋巴细胞数,同时测定免疫器官指数。结果表明,左旋咪唑中、低剂量组能明显提高新城疫LaSota疫苗特异性免疫应答抗体水平,免疫器官指数、血液中ANAE+T淋巴细胞百分率显著提高。说明中、低剂量左旋咪唑对鸡新城疫LaSota疫苗有免疫增强作用,且适合剂量为10mg/kg·W。     

CpG ODN对鸡新城疫LaSota活疫苗的免疫增强效应

将3种不同的未甲基化CpGODN分别与新城疫LaSota活疫苗混合后，经滴鼻和点眼免疫鸡，通过检测鸡血清中HI抗体、外周血T淋巴细胞增殖活性、诱导巨噬细胞分泌NO含量，以及刺激外周血淋巴细胞表达IFN-γ、IL-6与IL-1β mRNA量，分析各CpGODN对新城疫LaSota活疫苗免疫效果的影响。结果表明，经2次免疫后，含GTCGTT核心基序的CpG ODN1组，鸡血清平均HI抗体效价最高达8．2log2、淋巴细胞刺激指数达9．836、NO分泌量达35．833μmol／L，分别比疫苗单独免疫组高出2个滴度（P〈0．05）、4．4（P〈0．01）、27．6μmol／L（P〈0．01）；含GACGTT核心基序的CpG ODN2组增强作用不明显．与疫苗单独免疫组无差异；而CpGODN3的免疫刺激活性由于受其侧翼序列的影响，作用明显减弱甚至丧失。对细胞因子的影响，CpGODN3组IFN-γ mRNA表达量稍高于CpG ODN1组，而其余细胞因子均以CpG ODN1组表达水平最高（P〈0．05）。由此证明CpG ODN1能显著增强鸡对新城疫LaSota活疫苗的体液和细胞免疫反应，可以作为高效的免疫增强剂。