影响制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的因素

为了建立活力稳定高效的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,实验以13.5~14.5 d的ICR小鼠胚胎为实验材料,以MTT法测定细胞活力,探讨了用丝裂霉素C处理MEF后,含有不同浓度胎牛血清的培养基对MEF活力的影响,以及不同传代次数的MEF对其活力的影响。结果表明:用含10%的胎牛血清培养液培养丝裂霉素C处理后的MEF,其活力比含2%、5%、20%的FBS培养液稳定。对不同传代次数的MEF进行处理后,第1、3代的MEF活力比第5、7代的MEF活力稳定。结论:用丝裂霉素C处理第1到第3代的MEF,以10%的胎牛血清培养液培养能得到活力稳定高效的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层。     

小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究

研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤雏饲养层中，不同处理条件对小鼠胎儿成纤雏细胞分裂与存活的影响。结果表明：小鼠胎儿成纤雏细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10μg／mL 1-4h,20μg／mL 1—2．5h或21Gy和28Gy各处理1h)，能有效地抑制其分裂，且不影响其活力。     

小鼠胚胎成纤维细胞的分离和饲养层细胞的制备

通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄,探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明,从１０ 、１１ ｄ 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞;用１４ 、１５ ｄ 的胚胎则基本不能获得胚胎成纤维细胞;消化３ ～４ 个１２ ～１３ ｄ 胚胎所获细胞悬液可接种８～９ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。从一只孕鼠的所有胚胎所获的成纤维细胞可接种约２０ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。所获细胞悬液的活细胞百分率可达９０％ ,接种成活率达８５ ％ 。胚胎成纤维细胞贴壁时间为５～６ ｈ ,１２ ｈ 后进入增殖期,４８ ｈ 形成细胞单层。ＥＳ细胞克隆在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上形态典型、增殖迅速、不分化。饲养层寿命可维持２ ～３ 周。     

小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究

为了建立活力稳定的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层,本实验以13．5～14．5d的ICR小鼠胚胎为实验材料,以MTT法测定细胞活力,探讨了不同浓度的丝裂霉素C、丝裂霉素C不同处理时间及不同的成纤维细胞接种密度对MEF活力的影响。结果表明：10μg／ml的丝裂霉素C处理后的MEF活力比其他浓度（1μg／ml、5μg／ml、20μg／ml、30μg／ml）丝裂霉素C处理后的MEF活力稳定;用10μg／ml的丝裂霉素C处理2．5h,MEF活力比处理1．5h、3．5h、4．5h稳定;以2．5～35×10^5／ml密度接种于96孔板上,每孔200μl,MEF活力较接种密度为1．5×10^5／ml、4．5×10^5／ml、7．5×10^5／ml稳定。结论：用10μg／ml丝裂霉素C处理MEF 2．5h,2．5～3．5×10^5／m;密度接种于96孔板上,每孔200μl,以10％的胎牛血清培养液培养能得到活力稳定高效的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层。     

丝裂霉素C对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响

目的：探索不同浓度的丝裂霉素c（MMC）处理对ICR小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备的影响,用于分离和培养干细胞。方法：取13．5d胎龄ICR鼠胚分离原代成纤维细胞,利用不同浓度MMC处理胚胎成纤维细胞制备饲养层,比较观察MMC对细胞增殖的抑制作用,制作细胞生长曲线;取妊娠3．5d的ICR小鼠胚胎在不同浓度MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎贴壁和增殖情况。结果与结论：胎儿成纤维细胞贴壁生长,增殖迅速,6代后细胞逐渐衰老;MMC能有效抑制胎儿成纤维细胞的增殖,最佳处理方法为20μg／ml、2h。妊娠3．5d的ICR小鼠胚胎在10、20μg／mlMMC处理的饲养层上孵出率和贴壁率显著高于5／Lg／mlMMC处理的饲养层,在5、10和20μg／m[MMC处理的饲养层上,内细胞团增殖率无显著差异。因此,ICR小鼠胚胎成纤维细胞最佳处理方法为20μg／mlMMC作用2h。     

小鼠胚胎干细胞成纤维细胞饲养层的制备

胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)是动物体内最原始的细胞,它具有很强的再生、分化能力,在干细胞因子和多种白细胞介素的联合作用下可繁殖分化成各类细胞.为了获得能够稳定传代的干细胞,需要制备饲养层.笔者等以小白鼠胎儿成纤维细胞为材料,通过原代、继代培养,经丝裂霉素C处理,进行饲养层的制备.现报道如下.     

小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的制备

在进行胚胎干细胞、精原干细胞等特殊细胞的研究时,往往需要将这些细胞接种到成纤维细胞的饲养层上,但需要量不大。因此不便于大规模的制备。本实验通过将组织块培养法和酶消化培养法结合起来制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,在一定程度上解决了这一问题。利用该方法制备成纤维细胞饲养层,既简化了实验操作,又节省了实验费用。将精原干细胞接种到该饲养层后,其可在体外进行生长和增殖。     

丝裂霉素C和γ射线对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的影响

用丝裂霉素C和γ射线对小鼠胎儿成纤维细胞进行处理，观察它们对小鼠胎儿成纤维细胞分裂与存活的影响。结果表明，小鼠胎儿成纤维细胞用不同浓度的丝裂霉素C或不同强度的)，射线处理一定时间(5μg／mL 4h、10μg／mL 1～4h、20μg／mL 1．0～2．5h或14Gy 1h、21Gy 1h、28Gy 1h)，能有效地抑制其分裂，且不影响其活力。     

羊栖菜多糖对小鼠胎儿成纤维细胞生长、增殖及代谢的影响

用含5、10、204、0、80 mg/l羊栖菜多糖(SFPS)的培养液培养小鼠胎儿成纤维细胞(MEF),研究SFPS对MEF生长增殖、营养物质吸收利用和细胞因子分泌的影响。结果表明:5、10、20 mg/lSFPS对MEF形态和生长增殖均无显著影响(P0.05),40、80 mg/l SFPS对MEF表现出明显的抑制作用(P0.05),使MEF突触分叉,细胞内颗粒增多;SFPS可显著促进MEF对葡萄糖的摄取利用(P0.05),但对钙和氨基酸的利用无显著影响(P0.05);低浓度SFPS有促进MEF碱性成纤维细胞因子(bFGF)、干细胞生长因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)分泌的趋势,但高浓度SFPS对bFGF、SCF和LIF的分泌无显著影响。     

昆明系小鼠饲养层细胞制备条件的优化

通过分离不同胚龄的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),对MEF进行连续传代培养,并对MEF不同的消化时间进行探讨,研究影响小鼠胚胎成纤维细胞分离与培养的因素.结果表明,分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄是12.5 d～14.5 d;37℃条件下,用2.5 g/L胰蛋白酶作用PMEF,作用时间不应超过15min;离散贴壁的成纤维细胞,作用时间以2 min～3 min为宜;MEF在第2代～第5代增殖旺盛,7代以后细胞出现急剧下降.所以选择第3代MEF是制做饲养层的最佳时机.MEF分离方法简单,来源方便,增殖迅速,是用于胚胎干细胞分离培养的有效培养体系.     

家兔桑椹胚和早期囊胚在饲养层表面的贴壁行为

探讨了不同状态家兔３日龄桑椹胚和４日龄囊胚在饲养层上的贴壁规律。结果表明，去除或保留透明带和胶膜的全胚贴壁最晚，离散胚在培养２４ｈ内即可贴壁，切割胚贴壁大多数发生于体外培养２４～４８ｈ之间。离散胚和切割胚都可能在培养１２ｈ后重新聚集成中空的亚囊胚结构。亚囊胚的贴壁过程是某一部位首先附着于饲养层表面，然后滋胚层铺展形成向下的拉力，使其全部贴壁。液滴培养与四孔板培养法对亚囊胚的贴壁无显著性差异     

饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素

胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一，它与遗传工程，转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述，介绍了饲养层细胞的分类，并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。     

绵羊胚胎成纤维细胞饲养层用于培养人诱导性多能干细胞的效果研究

试验在体外分离培养1月龄绵羊胚胎成纤维细胞（sheep embryonic fibroblast,SEF）,经丝裂霉素C处理后探讨其作为诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSC）体外培养饲养层的可行性。试验以SNL饲养层细胞为对照,人iPSC（hiPSC）为培养对象,通过形态学观察、碱性磷酸酶（AP）染色、以及实时荧光定量PCR和免疫细胞化学对hiPSC标志基因mRNA和蛋白表达的检测,比较了SEF细胞和SNL细胞作为干细胞饲养层的效果。结果表明,在试验期内,与SNL饲养层体外培养的hiPSC相似,SEF饲养层体外培养的hiPSC在形态上呈集落样生长,增殖速度快;AP染色呈蓝紫色,能够维持未分化状态;能正常表达多能性标志基因。两种饲养层细胞培养的hiPSC多能性标志基因c-Myc、Klf4、OCT4和SOX2 mRNA的表达以及OCT4、SOX2、SSEA4和TRA-1-60蛋白的表达并无显著差异（P>0.05）。本研究结果初步表明SEF可作为体外培养iPSC的饲养层细胞,为进一步建立可表达促生长因子的基因修饰SEF细胞系奠定了基础。     

笼养蛋鸭舍环境因子与鸭免疫机能及生产性能的研究

试验检测了春季蛋鸭笼养舍内环境因子分布和蛋鸭生理机能及生产性能变化,为蛋鸭阶梯式笼养模式提出改进建议。结果表明:(1)蛋鸭舍内气载有害菌和粉尘浓度随纵向通风进程持续升高,上层鸭笼大肠杆菌属细菌气溶胶浓度显著低于中层和下层(P<0.05)。平均光照强度自进风口到出风口分布均匀,但上层笼极显著高于下层(P<0.01);(2)上层蛋鸭平均产蛋率(69.37%)显著高于下层蛋鸭(P<0.05);累计死淘率(0.11%)显著低于下层蛋鸭(P<0.05);(3)上层鸭蛋哈氏单位为68.2,极显著高于下层鸭蛋(P<0.01);(4)上层蛋鸭血清过氧化氢酶(CAT)活性、下丘脑GnRH基因表达水平均显著高于下层蛋鸭(P<0.05);下丘脑CRH基因表达水平,脾脏IL-1β、IL-10和TNF-α基因表达水平显著低于下层蛋鸭(P<0.05)。以上结果显示,春季笼养蛋鸭舍内,不同空间位置环境因子分布不均匀,下层蛋鸭长期处于恶劣环境,增加了死亡率,降低了产蛋率和蛋品质。     

影响蛋鸡孵化成绩的因素分析

1 种蛋受精率 种鸡的品种、日龄、营养、健康状况以及饲养管理的细节问题都是影响受精率的重要因素,而受精率是决定出雏率的先决条件.衡量孵化成绩的重要指标是受精率和孵化率,而不能将上孵率作为衡量孵化的指标.在孵化过程中,可以通过早期照蛋和打蛋来检测受精率的情况.照蛋很关键,是判断是否受精和胚胎发育情况的直接依据.有经验的场区在第4～5天进行早期照蛋,能够节约成本,但因精确度问题和技术难于掌握不能进行推广.在第8～10天照蛋很理想,能够较准确淘汰无精蛋和死胎.在第18天照蛋,发育好的颜色暗,发育差的或死胎的颜色发亮.血环蛋可以定位为血蛋或早死蛋,不用打蛋.第8～10天时,选择三盘进行打蛋可以获得无精蛋和早死率,出雏日打蛋可以获得中晚死率.早死率应该小于5%,如果高,则需要调查种蛋处理的全过程.     

盒式蜜蜂自控饲喂器的性能试验

本文介绍了我们研制的一种体积小、使用方便、能够自动控制和调节饲料供给的蜜蜂饲喂器。对本饲喂器的自控性能分别用清水、60%和67%的糖浆进行试验。结果:①从溶液进入饲喂器到实现自动控制的时间,水为5～15秒,60%的糖浆30～40秒,67%的糖浆40～60秒。②20箱蜜蜂为一组,溶液全部进入饲喂器的时间,水为3分钟,60%的糖浆10～15分钟,67%的糖浆12～20分钟。③20箱蜜蜂为一组,平均每群8脾,饲喂60%糖浆10小时饲喂总量达40～50千克,平均每箱饲喂量2～2.5千克。