中国猪源HSN1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定

猪是禽流感病毒"禽-猪-人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为动物流感及人流感的疾病预测及防制提供重要依据.1999～2001年间进行的血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染(李海燕等,2002).2002～2003年,我们进一步对来自全国14个省市的1936份血清进行了H9亚型猪流感的检测,同时在广东、福建等省进行了H5亚型猪流感的检测.2002年辽宁、广东、山东及重庆猪血清中出现H9亚型流感抗体,阳性率分别为7.3%、6.8%、5.1%和1.6%.2003年采集的猪血清H9亚型流感抗体均为阴性,同时发现广东、福建两省2003年出现H5亚型流感阳性猪群,阳性率分别为4.7%和8.2%.从2001～2003年收集和送检的样品中分离鉴定了6株H9N2亚型和2株H5N1亚型猪流感病毒,部分序列分析发现H9和H5亚型猪流感病毒均与我国分离的禽流感病毒高度同源.本研究进一步确证了我国猪群中存在H9N2亚型流感病毒,并且首次发现我国猪群已出现H5N1亚型流感病毒,为人类流感及动物流感的防制敲响了警钟.对这两个亚型流感病毒所具有的公共卫生和兽医公共卫生危害性应予以高度重视.     

东莞市H1N1亚型猪流感抗体血清学调查

为了解东莞市猪群感染H1N1亚型猪流感病毒的情况,2015~2017年在东莞市猪养殖场采集猪血清937份,采用ELISA方法进行H1N1亚型猪流感抗体检测,抗体阳性数411份,抗体阳性率为43.86%,其中2015~2017年的抗体阳性率分别为62.83%、57.08%、26.06%。结果表明,东莞市养殖场的猪群普遍存在H1N1亚型猪流感病毒的感染,分析3年的感染抗体阳性率,2015~2017年有下降的趋势可能与猪流感流行的毒株有关。     

近5年来东莞市H3N2亚型猪流感血清学调查分析

为了解东莞市近年来H3N2亚型猪流感的流行情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2010—2014年东莞市猪群进行了H3N2亚型猪流感血清学调查。结果表明:在被检的3 694份猪血清样品中,有1 008份为H3N2亚型猪流感抗体阳性样品,平均抗体阳性率为27.29%;其中2010年、2011年的H3N2亚型猪流感年平均抗体阳性率均在15%左右;2012年、2013年的H3N2亚型猪流感年平均抗体阳性率则突升至40%以上;2014年回落至2010年、2011年的水平;对监测结果进行季度性分析,发现H3N2亚型猪流感抗体并不存在明显的季节性。     

部分省市猪群猪流感的血清学调查及猪流感病毒的分离与鉴定

对黑龙江、吉林、辽宁、安徽、山东、内蒙、河南、河北、江苏、安徽、浙江、湖北、福建、广东、海南、上海等省、市猪群进行了猪流感的血清学和病原学调查研究。从 130 6份猪鼻棉拭子样品和死亡猪肺、气管样品中分离到 39株H3N2亚型猪流感病毒 ,12株 H1亚型猪流感病毒及其它亚型猪流感病毒 ,病毒粒子在透射电镜下呈现典型的正粘病毒特征 ,有囊膜和纤突 ,多为椭圆形、圆形、或杆形 ,直径约 80～ 12 0 nm。对 1997- 2 0 0 1年 3895份猪血清的血清学调查结果表明 ,近年中国多个地区猪群存在抗SWTN77(H1)、SWCO77(H3)、DKAT6 9(H1)、TKUK6 3(H3)流感病毒抗体 ;1998年来自河北的猪血清中抗 SWTN77阳性率高达 33.3% ;1999年来自内蒙的猪血清中抗 TKUK6 3和SWCO77阳性率分别为 13.3%和 2 6 .7% ;2 0 0 0- 2 0 0 1年调查的所有省市的猪群中均存在抗SWCO77抗体 ,阳性率从 3.2 %～ 10 0 %。说明近年我国猪群中 H3亚型猪流感的污染相当普遍     

猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法的建立

对我国分离到的猪流感病毒和GenBank数据库中已有的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型毒株的HA、NA基因核苷酸序列进行分析,分别选出各个病毒亚型HA和NA基因中高度保守且特异的核苷酸区域,设计扩增猪流感病毒H1和H3、N1和N2亚型的2套多重PCR特异性引物,建立了猪流感H1N1、H1N2和H3N2亚型病毒多重RT-PCR诊断方法。采用该方法对H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒标准参考株进行RT-PCR检测,结果均呈阳性,对扩增得到的片段进行序列测定和BLAST比较,表明为目的基因片段。其它几种常见猪病病毒和其它亚型猪流感病毒的RT-PCR扩增结果都呈阴性。对107EID50/0.1mL病毒进行稀释,提取RNA进行敏感性试验,RT-PCR最少可检测到102EID50的病毒量核酸。对40份阳性临床样品的检测结果是H1N1、H1N2和H3N2亚型分别为16份、1份和20份,其它3份样品同时含有H1N1和H3N2亚型猪流感病毒,和鸡胚分离病毒结果100%一致。试验证明建立的猪流感病毒H1N1、H1N2和H3N2亚型多重RT-PCR诊断方法是一种特异敏感的诊断方法,可用于临床样品的早期快速诊断和分型。     

广西部分地区猪流感病毒的血清学调查

为了解广西猪群中猪流感(SI)的流行情况,以猪流感病毒H3N2亚型作为诊断抗原,采用微量血凝抑制试验(HI)方法,对广西部分市(县)的猪群进行猪流感的血清学调查.在12个市(县)采集的1000份血清中,有10个市(县)检出H3N2抗体,共有257份血清呈H3N2抗体阳性,平均阳性率为25.7%.百色的阳性率最高,达到82.9%,贵港和南宁市郊两地没有检出阳性,其它9个市(县)的阳性率在13.0%～45.7%之间.结果表明我区猪群中很可能存在H3N2亚型猪流感感染,其中百色地区猪流感的感染率比较高.     

供港猪群流感病毒的分离鉴定及流行病学调查

为了对供港猪群中的猪流感流行情况进行分析,从华南地区供港猪群中用无菌棉拭子采集鼻腔粘液样品,采用鸡胚接种方法,从供港猪群中分离出了2株不同亚型的猪流感病毒株,经国家流感中心鉴定分别为H1N1和H3N2亚型。本研究设计了猪流感常见亚型的HA和NA分型特异性引物,建立了猪流感型特异性RT-PCR检测方法;对分离鉴定的2株猪流感病毒和禽流感H5N1 HI检测抗原进行了RT-PCR检测,并对其部分HA和NA基因进行克隆测序分析。对供港猪群的血清检测结果表明:供港猪群中H1N1和H3N2亚型抗体阳性率分别为26.87%、38.26%,禽流感H5N1和H9N2亚型抗体阳性率均为0%。     

华南地区猪群猪流感病毒病原学和血清学调查

为了解华南地区猪群中猪流感病毒(SIV)的流行及其遗传变异情况,本研究从2016年~2017年广东、广西等地猪群236份猪肺脏病料组织和143份鼻拭子样品中分离鉴定得到3株SIV,全基因组测序和遗传演化分析结果显示,3个分离株均属于H1N1亚型欧亚类禽分支SIV,并且均与pdm09分支病毒株发生了重组。HA蛋白分子特征分析结果显示,A/Swine/Guangxi/NK/2016 HA蛋白第23位糖基化位点发生了缺失。3265份血清样品抗体监测结果显示,欧亚类禽H1N1、pdm09 H1N1和H3N2 SIV的血清抗体阳性率分别为27.53%、20.98%和34.85%。另外,0.64%的(21份)血清样品为H9N2亚型流感病毒抗体阳性,并且猪群中不同亚型和不同分支SIV之间混合感染的情况非常普遍。猪群中流感病毒血清抗体监测结果显示,EA H1N1、pdm09和H3N2亚型SIV HI抗体滴度最高均可达到1:1280,而H9N2亚型HI抗体滴度最高为1:160,表明H9N2 AIV虽然可以感染猪,但对猪还不适应。各月份的血清抗体阳性率分析显示,SIV的流行具有季节性,冬季(11月、12月和1月份)的流行最为严重。本研究可为华南地区猪群SI防控及疫苗株的筛选提供参考依据。     

2016年我国部分地区屠宰场猪流感血清学调查

目前,全球范围内流行的猪流感病毒亚型主要有3种:H1N1、H3N2、H1N2,此外,H1N7、H4N6、H9N2、H5N1、H3N3、H3N1和H2N3等亚型病毒也在猪体内分离到,但没有证据显示这些病毒在猪体内建立稳定的谱系。为了解我国屠宰场猪群中流感病毒的感染与流行情况,选取2009年甲型H1N1(pdm/09)、欧洲类禽H1N1(EA H1)、经典H1N1(经典H1)、新型三源重排H1N1(ReH1)、H3N2(H3)、H9N2(H9)流感病毒制备的血凝抑制(HI)标准抗原作为检测抗原,对全国25个屠宰场的猪血清进行了HI抗体的检测。结果显示,2016年我国屠宰场样品中,pdm/09、EA H1、经典H1、Re H1、H3、H9抗体阳性率分别为23.18%、28.12%、19.34%、24.97%、7%、7.41%;在所监测地区中,华南地区屠宰场猪流感血清平均抗体阳性率最高。结果表明,2016年我国屠宰场猪群中H1N1亚型猪流感病毒感染比较普遍,H3N2和H9N2亚型猪流感病毒抗体阳性率较低。     

H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法的建立与应用

为了建立适用于临床诊断的H1N1亚型猪流感病毒快速检测方法,本研究根据GenBank已登录的H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因序列设计RT-PCR扩增引物,以H1N1亚型猪流感病毒、H3N2亚型猪流感病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒为试验对照,通过优化RT-PCR反应条件和反应体系,建立了H1N1亚型猪流感病毒HA和NA基因双重RT-PCR定型检测方法。同时,运用H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法和本研究建立的方法对165份猪病料样品进行了对比验证。结果表明,本研究建立的H1N1亚型猪流感病毒双重RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、重复性,所扩增的目的基因片段大小分别为428 bp和678 bp左右,可检出最小基因组RNA浓度为2.9×10-5μg/μL。本研究建立的方法和H1N1亚型猪流感病毒血凝和血凝抑制试验方法均从同一份猪肺脏样品中检测出H1N1亚型猪流感病毒,其余样品中均未检出H1N1亚型猪流感病毒,两种方法符合率为100%。本研究建立的方法适用于H1N1亚型猪流感病毒双基因定型检测,可在H1N1亚型猪流感病毒流行病学调查和临床诊断中应用。     

国内部分猪场猪流感检测情况分析

采用ELISA试验对上海市及部分外省市24个猪场的365份猪血清样品进行了猪流感病毒H1、H3亚型抗体的检测。结果：在被调查的24个猪场中,H1N1猪流感型抗体阳性率为30．96％,H3N2猪流感抗体阳性率为14．79％;在育肥猪和种猪的检测中,H1N1猪流感型抗体阳性率为36．6％,H3N2猪流感抗体阳性率为17．6％。表明在所调查的猪场中,猪流感病毒的感染较为普遍,大部分猪场都曾被H1、H3亚型感染,其中育肥猪和种猪的感染占主要地位。     

猪流感病毒的分离与鉴定

从广东某猪场表现发热和流鼻涕等呼吸道症状的猪群采集28份样品,用鸡胚分离到9株病毒。将病毒传代至第6代,经血清学鉴定、理化特性检查、电镜观察、生物学特性检查和人工致病试验,结果表明,4株分离株为H1N1亚型猪流感病毒,5株为H3N2亚型猪流感病毒。     

天津地区猪流感血清学调查

2002年-2005年期间,采用血凝抑制试验对天津市10个区县44个养猪场进行了猪流感病毒抗体检测,结果75%的被调查猪场抗体检测结果有阳性,检测的648份血清样品中,69.6%为阳性。流感病毒抗体亚型调查结果显示该地区流行的猪流感病毒主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为55.4%和39.4%。部分猪群中存在抗H9亚型流感病毒抗体,阳性率为5.4%,但未发现H5亚型流感病毒抗体。此外,部分猪群中同时存在2种或3种亚型(H1,H3和H9)流感病毒的抗体,表明这些猪曾经同时被2种或3种不同亚型的流感病毒感染。     

西班牙养猪密集地区同时流行A型流感病毒H1N2、H1N1和H3N2亚型的证据

本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清,以进行抗H1N1、H3N2和H1N2亚型病毒的血凝抑制试验(HI);再借助鸡胚病毒分离法和商品薄膜免疫分析法,对采自有呼吸道疾患的225份病猪肺样本进行检测以确定是否存在猪流感病毒。通过HI和逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,再辅以cDNA部分序列的测定,对分离毒株进行鉴定。对血清所作的HI试验表明,在83%受测猪群和76·3%受测猪中至少存在抗一种猪流感病毒亚型的抗体。在受检的600份母猪血清中,仅含抗H1N2、H3N2或H1N1亚型病毒抗体的样本数分别为109份(占总样本比例的18·2%)、60份(10%)和41(6·8%)。从有呼吸道疾患的猪肺样本中分离到12株H3N2亚型病毒、9株H1N1亚型病毒和1株H1N2病毒。对H1N2亚型分离株的神经氨酸酶基因436个核苷酸序列进行的分析,进一步证实了其身份。显然,猪流感依然流行于所研究猪群中,同时一种新的亚型病毒(即H1N2亚型病毒)可能正在开始流行,并且也在西班牙引起了临床发病。     

广东部分地区H1和H3亚型猪流感抗体监测和病毒分离

从广东省17个未免疫猪流感病毒(SIV)疫苗的规模化猪场和3个肉联厂的待屠宰猪群中采集2 155份血清样品,采用ELISA方法进行猪流感的血清学调查。结果发现,种猪和肉猪H1亚型猪流感抗体阳性率分别为39.6%(329/830)和37.6%(498/1325),H3亚型抗体阳性率分别为10.8%(90/830)和4.6%(61/1325),H1+H3阳性率分别为5.2%(43/830)和1.8%(25/1325)。从281份猪鼻拭样品和肺样品中分离并鉴定出5株猪流感病毒,其中H1N1亚型3株,H3N2亚型和H1N2亚型各1株。     

安徽省部分地区猪繁殖与呼吸综合征及猪流感的血清学调查

采集了安徽省南部10个地区79个发病猪场348份猪血清,用ELISA试剂盒检测了血清中猪繁殖与呼吸综合征及H1N2和H3N1亚型猪流感病毒抗体水平.结果表明,10个地区猪血清中PRRSV抗体均为阳性,阳性率为70.4%;6个地区猪血清中H1N1亚型和H3N2亚型猪流感抗体为阳性,但阳性率分别只有3.5%和4.0%.提示在2006年夏季,发生于安徽省南部部分地区的"猪高热病"的原发病之一为猪繁殖与呼吸综合征.     

无锡地区猪流感病毒的分离与鉴定

对从江苏省无锡市几个呼吸道症状明显、高热发病的猪群中采集到的棉拭子和猪肺样品进行病毒分离,经纯化后,对病毒的血清型进行鉴定。结果表明:分离获得猪流感病毒(SIV)H3N2亚型1株、H1N1亚型1株、H9N2亚型毒株2株。这一结果为该市有效防控猪流感、深入研究SIV的传播机制和遗传演化规律提供了良好的流行病学资料。     

我国部分省份猪群中流感病毒血清学抗体的调查

为了解近年来我国猪群中流感病毒的感染与流行情况,本研究分别对2013年11~12月期间采集于福建等9个重点养猪省份的2 198份以及2014年3~4月期间采自于广东和湖南两省的3 654份猪血清样品进行了血凝抑制(HI)抗体的检测。选取欧亚类禽型猪H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(2009/H1N1)、H3N2亚型猪流感病毒(SIV)、H5N1禽流感病毒(AIV)、H9N2 AIV及H7N9流感病毒制备的HI标准抗原作为检测抗原。结果显示,2013年我国猪群中EA H1N1、2009/H1N1、H3N2 SIV、H5N1 AIV、H9N2 AIV及H7N9流感病毒平均抗体阳性率分别为49.73%、11.87%、1.71%、0、0、1.36%;2014年分别为48.52%、12.10%、1.04%、0、0、2.05%。检测结果表明2013年~2014年间我国猪群中H1N1亚型SIV感染比较普遍,H3N2、H9N2流感病毒抗体阳性率较低,未检测到H5N1、H7N9流感病毒抗体。     

2016～2017年山东省三种亚型猪流感血清学调查

猪流感是一种人畜共患传染病,猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)在全世界各国的猪群中普遍存在。为了解山东省猪群中SIV的感染情况,2016年6月至2017年12月在山东省各地共采集7000份血清,采用HI抗体检测方法,分别用类禽型猪H1N1(EA H1N1)、2009甲型H1N1(2009/H1N1)和H3N2亚型抗原为标准抗原进行检测。结果显示,SIV抗体总阳性率为63.79%,其中EA H1N1抗体阳性率为56.31%,2009/H1N1抗体阳性率为24.61%,H3N2亚型抗体阳性率为1.61%。本研究结果表明2016～2017年山东省SIV感染比较普遍,类禽型猪H1N1抗体阳性率最高,2009甲型H1N1,H3N2抗体阳性率较低。     

先灵葆雅公司的SIV猪用疫苗在美国上市

先灵葆雅动物保健公司在美国上市了抗猪流感病毒的保护性三价苗MaxiVacExcell3。MaxiVacExcell3是包含1株传统的H1N1亚型、1株H1N1新突变株和H3N2亚型的灭活毒株,能对抗美国猪群中传播的主要的猪流感病毒,对猪群提供预防性的保护作用。先灵葆雅公司的SIV猪用疫苗在美国上市