根癌农杆菌介导的柑桔遗传转化技术

以新会橙、锦橙(Citrus Sinensis Osb．)胚状体以及北碚447锦橙、纽荷尔脐橙(C．SinensisOsb．)田问成年树腋芽为转化起始材料，经含外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)的根癌农杆菌感染后，比较了胚状体在不同培养基中丛芽的诱导频率和卡那霉素(Km)质量浓度对胚状体丛芽生长以及最终转化频率的影响，也对成年树腋芽在不同BA、IAA质量浓度处理、不同创伤部位和是否用石蜡带(Parafilm)包裹创伤口的诱芽和转化率进行了研究。PCR检测和Southern blot分析证明外源抗菌肽基因(Shiva A和Cecropin B)已导入上述4个柑桔品种；离体抑菌试验证明转基因植株叶片提取液对溃疡病菌有一定的抑制作用。建立了一个简便、快捷、通用的柑桔遗传转化体系。     

根癌农杆菌介导的马铃薯高效遗传转化体系的研究

通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立了马铃薯栽培品种“费乌瑞它(Favorita)”茎段和试管薯的遗传转化体系,其转化频率分别可达25.6%和36.8%。实验结果表明,玉米素有助于茎段和试管薯转化再生芽的分化,乙酰丁香酮可以提高茎段的转化率,但对试管薯的转化作用效果不明显。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果显示,在分化培养基上再生的转化植株假阳性率较高,在遗传转化工作中要加大转基因植株的数量,才有可能获得所期望的转基因植株群体。     

根癌农杆菌介导的水稻转化体系

简要回顾了水稻转基因发展的历程;通过农杆菌介导法转化水稻的流程,分析了几种根癌农杆菌介导的目的基因转化水稻的影响因素:农杆菌菌系及Vir基因的活化、水稻基因型和培养基种类、农杆菌侵染外植体的时间、共培养的方式、共培养时间、选择标记与报告基因的选择、选择压;最后提出了水稻遗传转化中存在的问题及解决的方法。     

农杆菌介导的花生遗传转化研究

对影响花生遗传转化效率的PPT筛选压、根癌农杆菌的侵染浓度、侵染及共培养时间等因素进行研究，采用农杆菌转化花生叶片，成功地将抗虫基因豇豆蛋白酶抑制基因(CpTI)和耐除草剂基因(Bar)导入花生。实验结果表明，外植体在MS 3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln培养基上预培养3d，于OD600为0．3的农杆菌菌液中浸泡5～7min后培养2d，再转移至含有3mg／LBA 0．8mg／LNAA 2mg／LAgNO3 6mg／L Gln 500mg／LCb 300mg／LCef 0．25mg／LPPT的MS培养基诱导筛选培养，3个月后得到24个再生株系。经PCR初步检测，有7个株系显示了310bp的CpTI基因核酸片段，Southern杂交证实了5个株系有外源基因的整合。     

以农杆菌为介导花生遗传转化研究

应用花生丛生芽再生体系，以农杆菌为介导将含有几丁质酶和β－1，3－葡聚糖酶抗病基因的植物双价表达载体pCGII转入花生品种泉花10号和金花1012，获得转基因植株，并已通过PCR和Southern blot鉴定，研究表明，侵染时间以5－15min的效果较好，侵染时间过长不利于提高转化率；0－1d预培养对基因转化有利，预培养2d可使转化率下降。     

农杆菌介导的花生遗传转化现状与分析

介绍农杆菌介导的花生遗传转化的原理和方法并对影响转化率的因素进行了探讨.     

根癌农杆菌农杆菌介导抗菌肽基因转化大豆的研究

为利用抗菌肽基因培育转基因大豆抗病材料,采用根癌农杆菌介导法将抗菌肽基因和绿色荧光蛋白基融合因转入大豆胚尖外植体。结果表明,60mg/L的卡那霉素可以对转化植株进行有效的筛选;在共培养时添加200µmol/L乙酰丁香酮有利于抗菌肽基因的转化;在生根培养基中不添加卡那霉素更有利于转化苗的成活。目的基因特异的PCR检测和绿色荧光蛋白表达分析,发现抗菌肽基因已转入大豆,并得到表达。     

根癌农杆菌介导茶树转化研究

通过检测GUS瞬间表达 ,对影响根癌农杆菌侵染茶树叶片效果的若干因素进行研究。Kan对茶树叶片愈伤组织形成的抑制浓度在 3 0mg/L左右 ,因而对以Kan为筛选标记的载体来说 ,5 0mg/LKan是较为适宜的选择浓度。茶树较为适宜的农杆菌转化系统是用OD6 0 0 为 0 5 - 0 8的LBA4 4 0 4侵染 10分钟左右 ,暗中2 8℃共培养 2 - 3天。硝酸银对农杆菌生长有抑制作用 ,不宜在共培养阶段添加     

根癌农杆菌介导的高粱遗传转化体系的建立

用高粱幼穗诱导的愈伤组织与农杆菌共培养,成功地实现了农杆菌介导的高粱遗传转化,并筛选得到了转基因再生植株.经过PCR和Southern杂交,均已证实了外援基因已导入和整合到植物体中.得到的部分转基因植株,经过抗虫鉴定表明,具有很强的抗虫性.高粱遗传转化过程中最佳预培养时间是3～5 d,最适宜的菌液浓度为OD600值＝0.5～0.7,共培养培养基的最佳pH值是5.2～5.6,最佳温度为22～25 ℃,最佳共培养时间是3 d.100 μmol/L乙酰丁香酮对提高高粱愈伤组织遗传转化有非常显著的效果.     

花生微卫星DNA分离方法的研究

比较了2种从AFLP扩增片段中分离花生微卫星DNA(SSR)的方法，结果表明，从预扩增的AFLP片段中富集SSR的方法简便，获得较多的含简单重复序列的片段；而从选择性扩增的AFLP片段中分离SSR后直接从电泳胶上切取差异片段进行测序的方法效率低，不适用于分离花生的微卫星DNA。     

花生体细胞胚胎诱导和植株再生研究

以花生成熟种胚为外植体,在ＭＳ附加不同激素（２０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ或５ｍｇ／Ｌ Ｐｉｃｌｏｒａｍ）的培养基上黑暗培养,胚性愈伤组织发生率和产胚量无明显差异,在ＭＳ＋５ｍｇ／Ｌ Ｐｉｃｌｏｒａｍ培养基上,胚性愈伤组织发生率和产胚量和品种类型有关,珍珠豆型花生品种胚性愈伤组织发生率和产胚量高于普通型花生品种。体胚在ＭＳ＋１０ｍｇ／Ｌ ＢＡ培养基上苗再生达３６．３％－７７．８％,再生小苗在ＭＳ＋０．３ｍ     

花生（Arachis hypogaea L.）游离小孢子培养获得愈伤组织研究

本文通过镜检花粉各发育时期及其与花蕾、花药形态的相关性,探讨了花生基因型、液体培养基及附加激素浓度对愈伤组织诱导率的影响。结果表明,当花蕾纵径长为2.48~2.96mm,小孢子基本处于四分体时期;长度在3.26~4.16mm时,以单核期为主;5.38~9.9mm,为双核期。在小孢子单核靠边期取材诱导率最高,达9.38%。本实验所用的六个花生品种中,四粒红的单蕾产胚数最高,达到0.1个胚/蕾 (MS培养基) 和0.05个胚/蕾(NLN培养基);在附加4mg/L2,4-D,3mg/L6-BA和0.3mg/LNAA改良的MS液体培养基上且当小孢子密度为2.5×105个/mL时,花生品种四粒红的愈伤组织诱导率最高,为12.5%。     

花生(Arachis hypogaea L.)CaM cDNA基因的克隆

提取花生幼嫩叶片总RNA,以逆转录cDNA第一链为模板,合成5'端和3'端引物,PCR扩增并克隆得到花生钙调蛋白基因的2个异型基因.序列分析表明,PCaM-1和PCaM-2均由447个核苷酸组成,共编码148个氨基酸.2个cDNA的核苷酸序列同源性为84%,编码区的氨基酸序列同源性为96%,仅有5处替换:F-L、T-A、M-T、M-T和L-F.     

Combining ability for main quality traits in peanut (Arachis hypogaea L.)

High-oleic peanuts has been recognized by processing sectors, seed sellers and consumers for their longer shelf life, longer seed life and mutiple healthe benefits. High oleate is becoming a requisite ​for varietal releases in many peanut breeding programs at present. To select desirable parents for high-oleic peanut breeding, the study was conducted to evaluate the combining ability of 5 high-oleic donors from our research team, based on quality of individual single seeds. General combining ability was significant for oleic, linoleic, stearic and palmitic acid, oil and protein, while specific combining ability was significant for the traits except oil. Among them, oil content was found to be conditioned solely by additive gene actions, and for other quality traits, additive gene effects were more important than non-additive gene effects. High-oleic CTW and normal-oleic Xiaojingsheng were selected as the best general combiners for peanut oleic acid improvement. Narrow-sense heritability was high for quality traits other than protein, suggesting that there was high potential for genetic improvement in these traits.     

负压和超声波处理对农杆菌介导的花生遗传转化效率的影响

为了提高根癌农杆菌介导的花生遗传转化效率,研究了不同强度的负压和超声波处理时间对外植体芽诱导率的影响以及对花生遗传转化的作用.结果表明,较低强度(抽拉30次)的负压处理和短时间(2min)的超声波处理对花生遗传转化有促进作用,虽然超声波处理延长了芽再生时间,但是有助于提高花生外植体芽点诱导率.     

花生矮化病毒病抗性SSR标记

利用抗、感矮化病毒病的花生品种ICGV86699和远杂9102为亲本配制杂交组合,构建重组近交系群体（RIL）,采用SSR技术和BSA分析方法,结合F6世代各个家系接种病毒后ELISA的鉴定结果,得到1个与花生矮化病毒病抗性连锁的分子标记XY38。此标记与抗性基因间的遗传距离为7.5cM,具有作为抗性育种辅助选择技术的潜力。     

一种侵染花生的新病毒鉴定初报

从广东省广州市郊花生上分离获得1个新的病毒分离物，病毒粒体为球状，直径约100nm。该病毒分离物在人工接种鉴定的4科13种植物中，能侵染3科11种植物；与花生芽枯病毒(PBNV)抗血清有弱阳性反应；病毒SRNA 3’端813个核苷酸序列与PBNV和西瓜银叶斑驳病毒(WSMoV)同源性为80％左右，与TospovirW属中其它病毒同源性为39％～65％。初步明确该病毒分离物为Tospovirus属的一种新病毒，暂定名为花生坏死斑点病毒(peanut necrotic spot virus，PNSV)。