鸡滑液囊支原体的分离和鉴定研究

从河南某肉种鸡场疑似鸡滑液囊支原体感染的病鸡跗关节样品进行病原的分离与鉴定.分离菌经瑞氏染色,在油镜下呈球形或椭圆形.在固体培养基上表现为细小、光滑、致密的小菌落,菌落形态为“煎蛋状”.L型细菌鉴定发现菌体仍保持原有形态.菌体能够吸附红细胞,分解葡萄糖,但不能分解精氨酸和尿素,还可致SPF鸡胚死亡,说明该分离菌为支原体.进一步的血清学试验结果表明,该分离菌为鸡滑液囊支原体,而不是鸡毒支原体.根据已发表的鸡滑液囊支原体血凝素基因序列vlhA设计合成一对引物,经PCR扩增,该菌体能够扩增出鸡滑液囊支原体(773 bp)的特异性片段.人工感染试验结果显示,SPF鸡能够复制出自然病例.     

鸡滑液囊支原体贵州株的分离鉴定及VlhA基因序列分析

【目的】 获得鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)贵州流行株,以进一步开展其病原学及免疫学相关研究。【方法】 从贵州省织金县某肉鸡场共采集107份疑似MS感染病鸡的咽拭子、肿胀关节和脚垫、肿胀组织渗出物进行PCR检测,对PCR筛选的阳性组织样本进行MS分离培养,并进行瑞氏染色、生化试验及VlhA基因序列分析。【结果】 PCR检测筛选到20份阳性样本,从关节和爪垫阳性样本中分离到1株疑似MS,分离株在平板上生长出煎蛋状菌落;瑞氏染色可见蓝色细小的球形菌;生化试验中,分离株分解葡萄糖和麦芽糖,但不分解精氨酸、尿素等,与MS标准株生化结果一致;分离培养物经PCR扩增得到821 bp的目的片段;分离株VlhA基因核苷酸相似性分析表明该分离株为MS,与GenBank登录的国内其他地区流行株相似性有地域差异。与安徽、重庆、福建、广东、广西、湖北、湖南、江苏和云南等地区流行株相似性在90.3%~99.7%之间;该分离株与湖南MS流行株相似性最高,达到99.7%;但与国外参考流行株的相似性低;VlhA基因遗传进化树分析显示,该分离株与国内参考株亲缘关系较近,与国外参考株亲缘关系较远。【结论】 本研究成功从引起关节和足垫肿胀的鸡中分离鉴定了1株MS贵州流行株,该分离株存在一定变异,为贵州省MS的分子生物特征及本病的诊断和防控研究提供了基础依据。     

鸡滑液囊支原体的分离鉴定及病理组织学观察

为了解宁夏及其周边不同地区蛋鸡场中的鸡滑液囊支原体的种类及其致病力,采用改良Frey氏鸡滑液囊支原体培养基,从疑似感染鸡滑液囊支原体的不同蛋鸡群中分离出病原株,设计鸡滑液囊支原体vlhA基因特异性引物,对分离到的病原进行基因序列扩增并测序,使用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析,采用从临床症状最明显的鸡体分离的菌株进行动物感染试验,制作石蜡切片,HE染色,病理组织学观察。结果表明,所分离到的病原菌均为鸡滑液囊支原体,部分菌株之间极其相似;鸡滑液囊支原体不仅可以使鸡只关节肿胀、生长缓慢,也可引起鸡只的肝脏轻微肿大,肝细胞部分坏死、间质增生;脾脏结缔组织增生,出血。     

鸡滑液囊支原体的分离与鉴定

某鸡场鸡群表现关节、爪垫肿胀、行走困难等症状,经血清平板凝集试验检测,鸡毒支原体呈阴性,鸡滑液囊支原体呈阳性。在此基础上,对关节囊内容物进行了病原体的分离和鉴定。分离菌落呈典型支原体菌落,能通过４５０ｎｍ滤膜,发酵葡萄糖,还原四氮唑,不利用精氨酸和尿素,菌落能吸附鸡红细胞,在固体培养基上的生长被鸡滑液囊支原体阳性血清所抑制。分离物在抑菌剂培养基上连续传代１０次,未见返祖Ｌ型细菌。用分离物对鸡做人工感染试验,出现与自然病例相同的症状,故认为分离物为鸡滑液囊支原体。     

1株鸡滑液囊支原体的分离鉴定与全基因组分析

鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae,MS）能引起家禽呼吸道疾病、传染性滑膜炎、蛋壳顶端异常及生长迟缓等,给全球养禽业带来巨大的经济损失。然而不同国家和地区MS的耐药性和致病性存在差异,因此本研究旨在挖掘福建MS菌株的特征。作者采集福建省疑似患MS的病鸡关节腔内容物,对菌株进行分离鉴定,并利用三代联合二代测序技术对其进行全基因组测序。结果显示,该分离株病原特性稳定,已保藏至中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC No.：M 2021210,并将其命名为MS-FJ01。MS-FJ01基因组全长为795 381 bp,GC含量为28.39%;预测编码基因数为704个,占整个基因组的90.48%;并在COG、GO和KEGG数据库分别注释到476、382、425个基因。通过各数据库的分析,注释了40个耐药相关基因,4个碳水化合物相关酶基因,136个病原与宿主互作相关基因,47个毒力因子相关基因,106个膜转运蛋白相关基因,25个限制修饰相关基因。通过与MS HN01和MS 5-9基因组进一步比较发现,MS-FJ01与这两个中国菌株均存在良好的共线性关系,且与MS 5-9的亲缘关系更近。本研究阐明了福建MS菌株的基因组结构、通过相关数据库的分析,预测和注释了其基因的功能,为深入研究MS提供参考依据。     

鸡滑液囊支原体不同地区分离株对常用抗菌药物的敏感性试验

为调查不同地区鸡滑液囊支原体的耐药情况,从河南、江苏、安徽、河北和广东五省204份疑似鸡滑液囊支原体感染鸡的病料中分离到20株鸡滑液囊支原体,每省随机取1株进行了12种常用抗菌药物的敏感性测定。结果表明,5株鸡滑液囊支原体均对泰乐菌素较为敏感,而对恩诺沙星、氧氟沙星、盐酸环丙沙星具有不同程度的耐受性。本实验可为临床合理用药提供参考。     

鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立

为建立能同时检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum, MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的双重PCR诊断方法,该研究根据GenBank中登录的MG gapA基因序列和MS heat shock ATP-dependent protease基因序列,设计2对特异性引物,通过对PCR扩增条件的优化,建立了能够同时检测MG和MS的双重PCR诊断方法。特异性检测结果显示,该方法能够扩增出729 bp的MG和309 bp的MS特异性片段,对禽巴氏杆菌、大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、副鸡禽杆菌核酸扩增均为阴性;敏感性检测结果显示,对MG和MS DNA的最低检出量均为5×10^-2 ng/μL;临床样品的检测结果显示,所建立的双重PCR方法可同时有效地检测出MG、MS混合感染和单独感染。该研究建立的鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体双重PCR方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,为快速、高效检测MG和MS提供了技术支持。     

鸡滑液囊支原体的流行调查及不同地区分离株药物敏感性分析

为了解近年来鸡滑液囊支原体感染的流行情况,自2015年1月-2017年12月,对广东、广西、江苏、浙江、福建等地10个不同地区养殖场的感染情况进行调查分析。结果显示,该病在调查的10个不同地区均有发生,感染鸡群多见于l～4月龄,平均感染日龄为60日龄;8个不同品种鸡的平均感染率为8.89%,平均死亡率为2.16%。感染率和死亡率均存在品种差异,其中817肉杂鸡及清远麻鸡的感染死亡率最高。从157份疑似鸡滑液囊支原体感染鸡的病料中分离到96株田间流行株,各地区随机取1株进行10种常用抗菌药物的敏感性测定。结果表明,10株临床分离株均对泰妙菌素、泰万菌素、泰乐菌素及多西环素较为敏感,对金霉素、庆大霉素等的敏感性显著下降且出现不同程度的耐受性,对盐酸环丙沙星、沙拉沙星敏感性较差,此结果可为临床合理用药提供参考。     

鸡滑液囊支原体病的防治

鸡滑液囊支原体病由滑液囊支原体感染所引起,呈世界流行,病鸡以关节肿大,跛行,机体消瘦和营养不良为主要表现特征,产蛋鸡群出现蛋品质下降;本病应以预防为主,不断提高鸡场的管理水平,通过净化鸡舍和药物防控的方法将疾病发生率降至最低。     

川西地区鸡滑液囊支原体分离株的部分生物学特性及其VlhA基因遗传进化分析

为了解鸡滑液囊支原体(MS)在川西地区的感染情况,本研究采集15个肉鸡场疑似MS感染的病鸡咽拭子、跗关节和胸部滑液囊样本共75份,对经PCR检测为阳性的样本进行MS分离,并对分离株的主要生物学特性进行研究,以及对分离株的VlhA基因进行遗传进化分析。结果显示,75份样本MS PCR阳性检出率为41.33%(31/75),11个鸡场感染该病,场阳性率为73.33%(11/15);但仅从其中3个鸡场分离到9株MS,分离株菌落与菌体形态与已知MS培养特性相符,各分离株培养浓度为10~4CCU/mL^10~6CCU/mL,分离株以5×10~5CCU接种7日龄SPF鸡胚,鸡胚于接种后7 d^9 d死亡,且分离回收到接种菌株;9株MS分离株VlhA基因的同源性为86.1%~99.9%,与参考株同源性为86.2%~95.4%,其中分离自同一鸡场的7株MS VlhA基因同源性为96.4%~99.9%;分离株VlhA基因遗传进化分析显示,其中分离自两个不同鸡场的两株MS与国内流行株的亲缘关系最近,而分离自另一鸡场的7株MS与中东地区分离的3株MS亲缘关系较近,表明MS在川西地区肉鸡场呈高感染率,MS VlhA基因变异较大。本研究为川西地区MS的进一步研究提供了基础材料和科学依据。     

鸡滑液囊支原体病的危害与防控

本文介绍了鸡滑液囊支原体病的传播途径、临床症状、混合感染危害,本病的控制应以净化为根除目标,把败血型霉形体作为重中之重来防控;定期做检测工作,反复论证;加强饲养管理、做好检测,切断病菌传播途径、杀灭传染源,控制滑液囊支原体病的发生。     

鸡滑液囊支原体病诊治

鸡滑液囊支原体病又被称为传染性滑膜炎,患病期主要表现为关节和脚掌显著肿大,不能正常站立行走、跛行,感染该种疾病后患病鸡生长发育迟缓,严重的会导致大量死亡。由于病变位置主要集中在关节的滑液囊和腱鞘,常会引起关节渗出性滑膜炎、腱鞘炎,造成的危害十分严重。该文结合一起实际病例,分析鸡滑液囊支原体病的发病经过、流行特点、临床症状、病理学变化、诊断方法和防治手段,以进一步提高该种疾病的治疗效果。     

鸡毒支原体与滑液囊支原体双重PCR检测方法的建立与应用

为建立鸡毒支原体(MG)与滑液囊支原体(MS)双重PCR检测方法,一次反应即可诊断鸡毒支原体与滑液囊支原体感染情况.根据GenBank公开的MG和MS基因序列,设计了2对质粒构建引物和2对检测引物,优化检测反应体系与条件,进行灵敏性试验、特异性试验和临床检测应用.结果显示,该方法对MG和MS阳性质粒的最低检测限为10拷...     

鸡滑液囊支原体病诊治体会

该文介绍了一起鸡滑液囊支原体病的发病情况、临床症状、病理变化、诊断以及防治措施。     

北京市鸡毒支原体和滑液囊支原体血清学调查

为了解北京市鸡毒支原体(Mycoplasma galliscepticum,MG)和滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染情况,2019年从北京市10个区127个养鸡场(户),采集3 910份鸡血清样品,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行MG和MS感染抗体检测。结果显示:北京市10个区均有不同程度的MG和MS感染,场群阳性率分别介于78.95%～100%、68.42%～100%,样品阳性率分别介于59.35%～93.13%、50.0%～94.53%,平均场群阳性率分别为89.0%和86.6%,平均样品阳性率分别为79.0%和75.6%;第三季度的场群阳性率和第二季度的样品阳性率最高,第四季度场群阳性率和样品阳性率最低(P0.01);110～180日龄的MG样品阳性率、251～320日龄的MS样品阳性率最高,462日龄以上均最低(P0.01);规模化商品鸡场的MG和MS场群阳性率和样品阳性率均最高(P0.01);蛋鸡的MG和MS样品阳性率均高于肉鸡(P0.01)。结果表明,北京市MG和MS感染较为严重,第二、三季度高发,110～320日龄鸡群、规模化商品鸡场和蛋鸡群感染尤其严重。结果提示,应采取包括加强生物安全管理、种鸡净化、疫苗预防和药物治疗在内的综合管理措施,有效控制该地区MG、MS的流行。     

用探针杂交法检测鸡毒支原体和滑液囊支原体

根据鸡毒支原体(MG)和滑液囊支原体(MS)的16SrRNA基因序列，设计并合成了探针MG和MS共同目的基因，跨幅为580bP的一对引物。用这对引物对2个标准的MG和1个标准的Ms菌株DNA模板进行聚合酶锭反应(PcR)，结果得到了预期大小约580bP的PcR产物。回收纯化琼脂糖电泳凝肢中的MG扩增产物克隆至T载体中，DIG随机引物法合成核酸探针，斑点杂交试验对MG和MS均呈阳性，检测灵敏度分别为2ng和3ng，其它对照菌(毒)株为阴性。     

鸡毒支原体的分离与鉴定

从广东、四川及北京地区患有慢性呼吸道疾病的不同鸡场采集194份样本,接种FM-4培养基进行分离培养。对符合鸡毒支原体培养特性培养物采用PCR加以鉴定,结果培养鉴定出69株鸡毒支原体,其分离率为35.57%(69株/194株)。     

7株鸡滑液囊支原体四川分离株全基因组分析

旨在了解滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)遗传多样性,本研究对7株MS四川分离株进行全基因组测序及生物信息学分析.采用Illumina HiSeq平台和PE文库结合方式全基因组测序,运用各数据库注释,用MEGAX软件将7株MS与NCBI收录的8株MS全基因比较.结果 显示,分离自同一鸡场的4株...     

鸡滑液囊支原体病研究进展

鸡滑液囊支原体可引起鸡滑液囊炎,该病是鸡的一种急性或慢性传染病,以侵害关节滑液囊膜及腱鞘为主,引起关节渗出性滑膜炎、腱鞘炎及跗关节和脚掌肿胀。本文就鸡滑液囊支原体病的病原学特点、流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法和预防治疗措施进行综述。