鼠去透明带裸卵的体外受精及其胚胎发育

为了建立提高小鼠弱精子体外受精率的新方法，将小鼠宰杀在20℃下搁置14h，然后取出附睾尾精子进行冷冻保存。用解冻后活力明显下降的精子，与去透明带裸卵进行体外受精。结果显示，与带有颗粒细胞卵的体外受精率（0％） 透明带切开卵的体外受精率（4％－31％）相比，去透明带卵的体外受精率增至39％－68％（P＜0．01）；体外受精所 2细胞胚，经培养有74％－100％的胚胎发育至扩经囊胚；来自BDF1雄性小鼠精子的2细胞期体外受精胚，经体外培养至囊胚期后再移植，获得了正常新生小鼠，以上结果表明，去透明带裸卵与小鼠弱精子体外受精，可提高小鼠弱精子的利用率。     

猪未成熟卵的体外受精

日本农林水产省畜牧研究所和静冈大学的研究人员成功地对猪的未成熟卵进行了体外受精，并产下小猪。由于未成熟卵可进行冷冻保存，因此可望在培育新猪种方面发挥作用。 　　研究人员从大型约克夏猪的卵巢中取出未成熟的卵子，置于培养器内36h，使之成熟，使之受精后，在良好状态下发育的75个卵子移植到猪的输卵管内，后来成功地产下了3头小猪。发育初期阶段卵裂的卵子约为53％。 　　过去采用的猪人工授精技术，即使精子到达卵子，也难以良好地发育。而这次研究人员采用了由牛的血清和猪的卵泡制成的培养液，并添加了半胱氨酸(氨基酸的一种)，从而促进了发育。(李兵译自俄《畜牧业》     

猪未成熟卵的体外受精

日本农林水产省畜牧研究所和静冈大学的研究人员成功地对猪的未成熟卵进行了体外受精,并产下小猪。由于未成熟卵可进行冷冻保存,因此可望在培育新猪种方面发挥作用。 研究人员从大型约克夏猪卵巢中取出未成熟的卵子,置于培养器内36小时,使之成熟和受精后,把在良好状态下开始发育的75个卵子移植到猪的输卵管内,     

鸡带壳卵体外受精技术的研究

众多的研究者用显微注射技术 ,产生转基因在哺乳动物中已成熟 ,而在家禽业上却存在一定难度。因为禽卵的结构明显不同于哺乳动物的卵 ,产出蛋时已受精 2 4小时。针对这特殊的生理特性 ,本试验进行了鸡带壳卵体外受精技术的研究 ,设计采用未受精的蛋进行体外受精 ,获能、注入、培养、观察、摸索一条简易、便利的基因导入新途径。1　材料和方法1 .1　材料试验选择本所鸡场的依莎黄母鸡、乌骨公鸡。收集清晨 5～ 7点钟依莎黄鸡无精蛋为试验材料 ,同时采集生长发育正常、无疾病的乌骨公鸡精液 ,公鸡的体重均在 1 0 0 0～ 1 50 0千克左右。1 .2　…     

猪体外受精技术的研究进展

1.前言近年来,猪的胚胎移植技术已日臻完善。随着胚胎移植技术的推广应用,所需的胚胎数量也越来越多。体外受精技术为胚胎来源开辟了一个新的途径。利用屠宰母猪的卵巢,体外培养卵母细胞,使之成熟并受精,可得到大量的廉价胚胎。再结合以胚胎移植、切割、性别鉴定及基因导入等技术,对于猪的改良、育种及种群数量的扩大等具有重要的实用价值。     

采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响

为探讨采卵季节对水牛活体采卵及其体外受精效果的影响,本研究选自2006-2008年78批次的626头牛活体采卵收集3143枚卵母细胞数据和同一操作者的51批次共培养1366枚卵母细胞的体外受精生产胚胎数据,并根据水牛繁殖特点和发情规律,每年分为3个阶段,即春季(1～4月),夏季(5～7月)和秋冬季(8～12)3个季节进行统计分析。结果发现,水牛活体采卵和体外受精效果受季节影响较大。在秋冬季进行活采时,平均头次获卵母细胞总数和可用卵母细胞数分别为(5.88±2.84)枚和(3.56±1.51)枚,平均头次卵母细胞总数明显高于夏季的(3.72±1.58)枚(P<0.01),但与春季的(4.80±1.77)枚差异不显著(P>0.05),而头均可用卵母细胞数则高于春季的(2.77±1.19)枚(P<0.05)和夏季的(2.11±1.11)枚(P<0.01);季节之间卵母细胞可用率没有差异(P>0.05);虽然每个季节活体采卵体外受精卵分裂率没有差异(P>0,05),但在秋冬季采卵时,其囊胚率(27.09%)则明显高于春季(20.95%)和夏季(20.45%),P<0.05,而春季和夏季之间没有差异(P>0.05)。研究表明:一年四季都可以进行水牛活体采卵体外生产胚胎,但从采卵效果和胚胎生产效率上看,在秋冬季进行活体采卵效果最好。     

两种采卵方法对绵羊卵母细胞体外受精的影响

研究对获取绵羊卵母细胞不同采集方法进行了初步探讨。切剖法平均每个卵巢可采集得到可用卵母细胞数3．95枚(1953枚／494卵巢),显著高于抽吸法的1．96枚(219枚／112卵巢)。抽吸法和切剖法获得的卵母细胞其体外受精后囊胚率分别是20.21％和18．85％,差异不显著。     

小鼠去透明带裸卵的体外受精及其胚胎发育

为了建立提高小鼠弱精子体外受精率的新方法 ,将小鼠宰杀在 2 0℃下搁置 14 h,然后取出附睾尾精子进行冷冻保存。用解冻后活力明显下降的精子 ,与去透明带裸卵进行体外受精。结果显示 ,与带有颗粒细胞卵的体外受精率(0 % )和透明带切开卵的体外受精率 (4%～ 31% )相比 ,去透明带卵的体外受精率增至 39%～ 6 8% (P<0 .0 1) ;体外受精所获的 2细胞胚 ,经培养有 74 %～ 10 0 %的胚胎发育至扩张囊胚 ;来自 BDF1雄性小鼠精子的 2细胞期体外受精胚 ,经体外培养至囊胚期后再移植 ,获得了正常新生小鼠。以上结果表明 ,去透明带裸卵与小鼠弱精子体外受精 ,可提高小鼠弱精子的利用率     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精

将从屠宰母猪卵巢采得的卵母细胞-卵丘细胞复合体(Oocyte-cumulus Cell Complex.OCC)在含PMSG的M199培养40～44小时,卵丘细胞大部分扩散(86.4％)。48.1％(142/295)的卵母细胞排出第一极体(PBI)。将体外成熟的卵母细胞与体外获能精子授精后30～70小时,80.5％(103/128)的卵母细胞受精并可在体外发育到2～8细胞甚至桑椹胚。本文还对裸卵母细胞的体外成熟和体外受精进行了研究,对体外受精卵的早期发育作了观察。实验结果表明:PMSG对诱导卵丘细胞扩散及卵母细胞的全面成熟有重要作用,在OCC中的卵母细胞成熟率高于裸卵母细胞体外授精后8～10小时将受精卵放入改良KRB液培养可使卵裂比例明显提高。     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟及体外受精

从屠宰猪的狼巢卵包中抽取卵母细胞，在ＣＯ２培养箱中成功地进行了卵母细胞体对成熟和体外受精试验。在５％ＣＯ２和９５％空气的湿润条件下把带有卵丘细胞２的卵母细胞在ＴＣＭ－１９９＋ＰＭＳＧ＋ｅｓｔ．ｒａｄｉｏｌ－１７．     

卵巢生理状态、精子获能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响

猪的体外受精受温度、多精受精等因素影响一直效率较低.本文研究了卵巢生理状态、精子荻能时间及精卵共孵育时间对猪体外受精及胚胎发育的影响.实验结果表明:(1)从存在黄体的卵巢上获取的猪卵母细胞成熟率和卵裂率均显著高于从无黄体存在的卵巢上获取的卵母细胞(P＜0.01),但囊胚率无显著差异.(2)精子在受精液中获能20 min...     

猪卵母细胞体外受精条件的优化

猪卵母细胞体外受精(in vitro fertilization,IVF)技术为受精和胚胎早期发育机理等基础理论的研究及生产实践提供了重要的研究手段。虽然猪IVF的研究已经取得了一些进展,但其囊胚发育率仍然较低,亟需建立更为稳定、高效的体外受精方法。本试验通过比较精子浓度,精子获能处理,不同精卵共孵育培养体系以及在卵母细胞成熟过程中添加不同激素等影响猪卵母细胞体外受精胚胎发育能力的因素,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。结果显示:在精子浓度为1×10~5~1×10~7/mL,5×10~6/mL的精子浓度显著提高体外受精效率(P<0.05);以茶碱、咖啡及咖啡因联合使用肝素作为获能物质处理精子,发现2.5 mmol/L茶碱处理组体外受精效率显著提高(P<0.05);通过比较不同的受精体系,发现使用40个卵/500μL体系显著提高体外受精效率(P<0.05);在卵母细胞成熟液中添加不同激素组合,发现添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH激素组合,体外受精效率显著提高(P<0.05)。本试验结果表明,在M199中添加10IU/mL PMSG,10IU/mL HCG和2.5IU/mL FSH体外成熟培养卵母细胞,以5×10~6/mL精子浓度,2.5mmol/L茶碱作为获能物质处理精子,40个卵/500μL共孵育的IVF体系效果最佳,其卵裂率为(61.33±0.77)%,囊胚率为(28.33±1.08)%。本试验将为深入研究猪IVF提供理论参考。     

顶体反应进程对公猪精液体外受精最佳精卵比的影响

精液质量参数相似公猪获得相同体外受精(in vitro fertilization,IVF)效果时所需精卵比不同的原因。常规方法鉴定公猪精液质量参数,以不同精卵比进行体外受精并确定不同公猪精液体外受精时的最佳精卵比,分别检测了各公猪精子结合透明带能力、获能及顶体反应状况。3头试验用公猪(A、B和C)精液在精子密度、活率、活力和畸形精子率上无显著差异(P0.05),17℃保存3 d内精子的活率在三者间无差异(P0.05)。3头公猪精液在IVF中达到最佳受精效率时所需的精卵比分别为500∶1、1 000∶1和200∶1。精子结合透明带能力和获能进程检测显示三者无显著差异(P0.05),但顶体反应进程检测显示三者间具有显著差异(P0.05)。顶体反应进程差异是导致相似精液质量精液之间在IVF中最佳精卵比不同的主要原因。     

牛体外受精时老化卵对受精率与染色体异常发生的影响

通过延长体外培养时间得到牛老化卵，对其体外受精率与染色体的异常发生进行了研究，体外受精48h后的受精率，46h培养组与22h和34h培养组之间差异显著（P＜0．05），随着老化时间的延长，受精率及胚胎发育速度明显降低。染色体分析结果表明，46h组的受精卵的染色体异常发生率为61．6％，22h组44．6％，2组之间差异显著（P＜0．05），单倍体（n=31)的发生率也随着老化时间的延长而增加，这些单倍体的性染色体的构成表明，含有X－性染色体的胚的出现率显著高于含有Y－染色体的胚的出现率（P＜0．05）。单倍体的发生是由卵的老化而引起单一配子的孤雌发生，体外培养时间的延长对正常的2倍体的性别无明显影响。     

猪卵母细胞体外受精中膜电位变化与超微结构关系的研究

应用细胞内微电极技术，测定了猪卵母细胞体外成熟和体外受精过程中膜电位的变化，并结合电镜技术探讨了膜电位变化与卵母细胞超微结构的关系。结果发现，猪卵母细胞在体外发育培养前，膜电位为较小的负值；体外发育培养后，膜电位随着体外发育自发变化，首先发生去极化，然后发生极性倒转，由负值转为正值，体外受精后，膜电位复极化为负值，且随着受精发育负值增大，超微结构结果表明，猪卵母细胞的膜电位变化与超微结构密切相关。     

去掉卵丘细胞或切开卵透明带对小鼠体外受精的影响

探讨了去掉小鼠卵子的卵丘细胞和人工切开透明带对小鼠体外受精的影响，结果表明，与卵丘卵母细胞复合体相比，用透明质酸酶去掉卵子的卵丘细胞后的体外受精率显著降低（分别为56％和12％－23％）；当人工切部分透明带后，卵子的体外受精率增至56％－875（P＜0．01）；与细胞质均质的卵子相比，细胞质不均卵子即使切开透明带也仅有19％－22％的卵子受精。结果表明，用透明质酸酶去掉小鼠卵子的卵丘细胞后，选择细胞均质的卵子并人工切开透明带，可提高小鼠的体外受精率。     

猪卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

从猪卵巢2～5mm的卵泡中抽取卵母细胞,用含有FCS,BSA-V,PMSG,HCG的TCM-199液和KRB修正液于37-39℃,5%CO_2,5%O_2和90%N_2的湿润环境中成熟培养和体外受精。实验结果表明:培养40小时后,4组卵丘细胞的扩展率分别为82.96%、89.76%、89.54%、85.57%,组间差异不显著(P>0.05)。第一极体放出率分别为16.90%、6.45%、13.64%、18.46%,第2组明显低于其他各组,但不显著(P>0.05)。用体外获能的精子授精,卵裂率分别为25.93%,18.18%,31.03%,27.03%;授精后29、30小时出现2—细胞,44～45小时出现4—细胞,56小时出现8—细胞。     

影响猪卵母细胞体外受精效率因素的研究

通过比较参与受精的卵母细胞颗粒细胞存在与否、精子上浮时间、精卵共孵育时间、不同受精液等4个方面的因素,研究这些因素对猪卵母细胞体外受精后胚胎发育能力的影响,以求找到最佳的猪卵母细胞体外受精体系。将选择带有不同颗粒细胞的卵丘卵母细胞复合体分为3组：含全部颗粒细胞、2~3层颗粒细胞和裸卵;调整精子在受精液里的上浮时间为0、30、60、120min研究其受精能力;比较3、6、20h精卵共孵育时间对体外受精的影响;结果表明：在本试验体系下,在mTBM受精液中,将精子上浮处理60min,与含2~3层颗粒细胞的卵丘-卵母细胞复合体共孵育6h的IVF体系最为有效,其卵裂率为（77.6±2.3）%,囊胚率为（25.7±2.6）%。