棉花黄萎病落叶型菌系检测新技术

在３０ｇ／ＬＫＣｌＯ３浓度下，可诱导较多不能还原利用硝酸盐作为氮原生长的营养缺陷型突变体。对棉黄萎病分离菌株的亲和性测定，能正确划分出落叶型和非落叶型菌系。中国的落叶型菌系ＶＤ８与美国落叶型菌第Ｔ９同可作标准菌系用，经测定，ＪＣ１（常熟溪９大队），ＪＣ４（常熟徐市１５大队），ＪＣ５（常熟徐市１３大附），ＳＹ１１（南通三余镇北队），ＳＹ１２（南通新垦２队）５个分离菌株突变体均能与ＶＤ８和Ｔ９菌株突变     

落叶型棉花黄萎病菌的致病力分化

为明确我国长江流域和黄河流域主要植棉省落叶型菌系的致病力差异,选用4个抗性不同的陆地棉品种银瑞361、豫棉21、冀棉228和冀棉11作为鉴别品种,在温室可控条件下,采用苗期移苗蘸根接种法,对不同植棉省32个落叶型黄萎病菌的致病性进行了测定,并根据供试菌系在鉴别品种上病情指数进行聚类分析。苗期接种14 d后,抗、感品种间的病情指数差异较大,是落叶型菌系病情指数调查的合适时间。32个落叶型菌系致病力差异显著,可分为3个类型。第Ⅰ类型只有1个菌系,致病力弱;第Ⅱ类型菌系占供试菌系的62.5%,平均病情指数为36.8,致病力中等;第Ⅲ类型菌系占供试菌系34.4%,平均病情指数52.7,致病力较强,4个鉴别品种均表现感病。研究表明来源于不同植棉省菌系的平均致病力有一定差异,且来源于同一植棉省的落叶型菌系可归属于不同的致病类型。     

应用聚合酶链式反应鉴定新疆棉花落叶型黄萎病菌

用一对棉花落叶型黄萎病菌的特异性引物D1和D2进行PCR扩增,对于落叶型黄萎病菌,该对引物可特异性地扩增产生一段550bp的产物,而非落叶型黄萎病菌则不能被扩增.供试的35个新疆黄萎菌系中,有3个菌系扩增出550bp大小的落叶型黄萎病菌特异性片段,表明目前新疆已存在落叶型黄萎病菌,用此技术可快速、准确地检疫和鉴定落叶型黄萎病菌.     

不同植棉省区落叶型黄萎病菌的培养特性及致病力比较

近年来落叶型症状的棉花黄萎病对棉花生产的危害越来越大,为明确落叶型棉花黄萎病菌的分化特点,采用特异性分子标记方法,对我国10个主要植棉省区30个落叶型棉花黄萎病菌的培养特性和致病力进行了比较。落叶型黄萎病菌系在我国主要植棉省区已普遍存在,该菌系以菌核型为主,其微菌核呈放射状或环状。63.3%菌系的菌丝发达致密,其余菌系的菌丝较为疏松。落叶型黄萎病菌系之间的产孢量和致病力差异较大,产孢量变幅为3.7×107～18.8×107个孢子/mL;71.9%为强致病力菌系,25.0%为中等致病力。研究表明,不同植棉省区间落叶型黄萎病菌系的产孢量和致病力具有一定差异。     

进口棉短绒中棉花枯黄萎病菌检测研究

棉花枯、黄萎病是棉花生产中最重要的病害,主要依靠土壤和种子调运进行远距离传播。近年来,由阿拉山口口岸进口棉短绒量不断增加,2008年口岸进口棉短绒货量为3.8153947万t,大部分棉短绒都含有大量的棉籽,可能携带棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum Schl.f.sp.vasinfectum(Atk.)Snyder&Hansen)和棉花黄萎病菌(Verticillium dahliaeK leb)。为保护新疆及我国棉花产业安全,防止棉花枯、黄萎病菌随进口棉短绒中棉籽传入,对进口棉短绒中棉籽是否携带棉花枯黄萎病菌进行了检验。结果,只在进口棉短绒中棉籽上检测到棉花枯萎病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schl.f.sp.vasinfectum(Atk.)Snyder & Hansen),未检出棉花黄萎病菌。     

棉花黄萎病菌提取物对棉花的抗病效果

近年来棉花黄萎病发生严重 ,重病田病株率高达 95 %以上。目前生产上缺少抗病品种 ,防治方法不健全 ,田间防治效果不理想 ,生产上急需新的防治措施。随着环境和生态问题的日益突出 ,诱导抗病性研究日益被人们重视。本研究从诱导抗病性原理出发 ,旨在探索能够有效激发、诱导棉花抗黄萎病的因子 ,并取得一些结果 ,现报道如下。1　材料与方法1 .1　供试材料　棉种为中棉 1 6 ;棉花黄萎病菌 (Verticillium dahliae Kleb)由本室分离鉴定。1 .2　激发子的制备　将棉花黄萎病菌在马铃薯葡萄糖液体培养基中 ,5℃下恒温振荡培养两周后 ,滤纸过滤 ,滤…     

北疆棉花黄萎病发病率调查及土壤中黄萎病菌微菌核数量与种群类型分析

为了解北疆棉花黄萎病的发生情况及发病与土壤中黄萎病菌微菌核数量的关系和病原菌种群类型, 2021年对北疆石河子?奎屯?博乐等8市(县)棉田棉花黄萎病发病率?土壤中黄萎病菌的微菌核数量?菌株种群类型进行了抽样调查?结果表明, 北疆未发生棉花黄萎病的棉田占49.2%, 0%<发病率<5.0%的棉田占32.7%, 发病率≥5.0%的棉田占18%?与2013年?2015年相比, 2021年无病田率分别增加17.7和12.7百分点, 发病率≥5%的棉田分别减少15.7和21.6百分点?从棉田黄萎病发病率与土壤中微菌核数量的关系来看, 整体上北疆棉田棉花黄萎病发病率与微菌核数量相关性不显著(r=0.119 1); 分区域看, 石河子-沙湾片区?奎屯-乌苏片区?精河-博乐片区棉田黄萎病发病率与微菌核数量的相关系数分别为0.033 2?0.007 6?0.062 3, 均无显著相关性; 而呼图壁-玛纳斯片区棉田黄萎病发病率与微菌核数量的相关系数为0.635 7, 呈中度正相关?土壤中的黄萎病菌菌株以菌核型为主, 占57.9%, 菌丝型占23.2%, 中间型占18.9%?用特异性引物进行PCR检测表明, 土壤中黄萎病菌落叶型菌株占97.6%, 占绝对优势?本研究将为北疆棉区棉花黄萎病的综合防控提供理论依据?     

棉花黄萎病菌毒素的纯化与特性研究

 用凝集素伴刀豆球蛋白(ConA)做配基的Sepharose 4B亲和层析纯化了毒素物质。分析证明病菌产生的毒素物质是一种酸性糖蛋白,其中蛋白质和糖的含量分别为85.26%和14.74%,每毫升纯化毒素中含蛋白质1.04mg、糖0.18mg。蛋白质中含17种氨基酸,酸性氨基酸占总量的18.4%,碱性氨基酸占8.3%。#br#纯化毒素糖蛋白具有明显的特性:对棉苗具有强烈地致萎作用,用病菌人工接种表现出同样的症状;在高离子浓度下毒素被降解,低离子浓度下,出现白色沉淀,致萎力减弱;经木瓜蛋白酶、a-淀粉酶、6NHCl水解后,对棉苗的致萎力分别降低7%、57%和93%。     

分离土壤棉花黄萎病菌选择性培养基的筛选

 采用土壤检测稀释法、水筛法和不同土样接种量,对5种土壤浸提液改良培养基进行了比较研究。结果表明,土壤水筛法对土壤棉花黄萎病菌的检测效果优于稀释法,其菌落检测数增加4~10倍。培养基每皿0.25 g土样接种量的检测效果高于0.5 g和1g。5种测试培养基中,培养基D对分离土壤棉花黄萎病菌的选择性表现最好,其土壤接种体检测回收率达63.5%~83.3%.培养基D的组份为:土壤浸提液25 ml,KH₂PO₄ 1.5 g,K₂HPO₄ 4 g,尿酸钠0.2 g,半乳糖醛酸钠(果胶)1g,山梨糖1g,Dox盐2 ml,Tergitol NP-101ml,PCNB0.1g,琼脂17g,蒸馏水1000 ml,pH6.4~6.7。每1000ml融化培养基倒皿前加抗菌素液50 ml (含氯霉素0.05 g,链霉素0.05 g,青霉素-G盐0.05 g)。     

棉花黄萎病菌毒素对棉花作用机制的初步探讨

 用棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae Kled.) T-9、SS4、VD-8、VD-5等4个菌株的毒素(VD-toxins)处理棉苗,发现各菌株的毒素都能使棉苗体内脱落酸(ABA)的含量增加,其中以T-9菌株毒素的影响最明显。各菌株毒素均可增加棉苗叶片的气孔抗性和提高叶片细胞的离子渗透率3-4倍。毒素对棉苗叶片的游离原生质体具有30-50%的损伤率。     

茄子黄萎病抗病材料的组织病理学研究

 对茄子黄萎病抗病品种刚果茄和感病对照品种七叶茄的组织病理学研究发现,刚果茄的根部能够抑制病菌的初侵染。接种后4天和15天,其根部和茎部导管的堵塞率均低于对照。在生长期中,刚果茄根和茎木质部导管补偿能力较七叶茄快。用荧光显微镜观察表明,刚果茄体内自发荧光物质的产生较七叶茄早,其荧光强度也大于后者。     

大丽轮枝菌核糖体基因ITS区段的特异扩增

 根据棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)核糖体基因ITS区段的碱基编码序列,设计合成了1对为26 bp的PCR特异扩增引物(引物1:5'CATCAGTCTCTCTGTTTATACCAACG,和引物2:3'CGATGCGAGCTGTAACTACTACGCAA),进行了大丽轮枝病菌PCR特异扩增试验。试验结果表明:本试验设计合成的这对引物,能对大丽轮枝菌全基因组DNA和人工接种棉花黄萎病病株组织特异地扩增到大丽轮枝菌核糖体基因ITS区段的324 bp分子片段,该对引物可用于棉花黄萎病的分子鉴定和分子监测。本试验结果对棉花黄萎病的早期诊断和病原菌的检测和监测有潜在的应用价值。     

北方棉区棉花黄萎病菌落叶型菌系鉴定

 采用RAPD扩增与温室致病性测定2种方法,以黄萎病菌Verticillium dahliae的5个落叶型、7个非落叶型菌系和V.albo-atrum的2个菌系为对照,对采自北方棉区6省(自治区)的34个棉花黄萎病菌菌系进行致病型鉴定。94.1%的菌系在2种鉴定结果中表现一致,与对照菌系相比较,确定其中26个菌系为落叶型菌系,6个菌系为非落叶型菌系。从而证实了黄萎病菌落叶型菌系在北方棉区河北、河南、山东3省的存在,并发现所确定的26个北方落叶型菌系中的22个与来自美国的对照落叶型菌系T₉、V₄₄的关系比与来自江苏的对照落叶型菌系V_B、V₉₉₁的关系更近。本实验还初步筛选到2条用于鉴别V.dahliae落叶型与非落叶型菌系的RAPD特异条带OPB-19₉₆₆和OPM-20₁₆₉₁,将它们用于对34个北方菌系的RAPD扩增鉴定,则与温室致病性测定结果的一致性分别为88.2%和94.1%,证明这2条特异条带在鉴定棉花黄萎病菌落叶型菌系上具有一定的实用价值,并为进一步制作特异探针以形成一套简便、准确、规范化的鉴定技术奠定了基础。     

山东棉花黄萎菌致病力分化的研究

选用山东省有代表性的棉黄萎菌１６个菌株（系）各配制成一定浓度的孢子悬浮液，于棉苗２～３叶期蘸根接种，观察发病的反应型。结果表明：各菌株致病力强弱差异明显，可分为致病力强的Ⅰ型（即与落叶型相似）、致病力中等的Ⅱ型和致病力弱的Ⅲ型，并发现山东省有落叶型菌系存在。     

棉花黄萎菌(Verticillium dahliae)菌系及鉴定技术

 山东省是我国产棉大省之一,棉花黄萎病是山东棉花生产上的重要病害,长期以来得不到有效的防治。近几年来,由于品种缺乏抗性,病菌致病性变异和适宜的发病条件,致使棉花黄萎病不断发展蔓延,1993年达到发病高峰。     

Sources of verticillium wilt resistance in wild olive germplasm from the Mediterranean region

Fifty-seven wild olive accessions collected from the Mediterranean basin were screened under greenhouse conditions for their resistance to verticillium wilt. Plants were root-dip inoculated. One defoliating and one non-defoliating isolate of Verticillium dahliae , both obtained from diseased plants in southern Italy, were used. Plants of the highly susceptible cv. Cima di Mola, frequently used as a rootstock in Apulia, were also included in this test. Disease reactions were evaluated on the basis of external symptoms, vascular browning and by calculating areas under disease progress curves ( audpc ). On the basis of audpc values and external symptom severity, accessions were grouped into four phenotypic groups: highly resistant, moderately resistant, susceptible and highly susceptible. Three accessions showed high resistance to both V. dahliae pathotypes. Forty resistant plants were selected from accessions that had shown the highest levels of resistance. Clones were obtained from each of these plants by in vitro micropropagation for further testing. Ten clones showed the resistance characteristics of their original mother plants, while others suffered greater levels of disease severity than their mother plants. Several new olive rootstocks were identified that were highly resistant to verticillium wilt and could be included in breeding programmes for resistance of olive to V. dahliae .     

Vegetative-compatibility groups in Verticillium dahliae from Israel

Nitrate-nonutilizing (nit) mutants were used to determine vegetative compatibility among 34 isolates of Verticillium dahliae from cotton, potato, olive, eggplant, chrysanthemum and tomato from 12 sites in Israel. Based on the formation of complementary heterokaryons, 33 isolates were assigned to two vegetative- compatibility groups (VCGs): one VCG contained 15 isolates from cotton, eggplant, chrysanthemum and olive; and the other VCG contained 18 isolates from potato, olive and cotton. The status of an additional isolate from tomato, which was compatible with both VCGs, remained unclear. In a limited pathogenicity test with 10 isolates, two (from tomato and eggplant) were pathogenic on tomato, eggplant and cotton; most isolates from cotton were pathogenic on cotton and eggplant only; and one from cotton was non-pathogenic. Fewer isolates were pathogenic on tomato than on cotton or eggplant. The diversity of vegetative compatibility found in our V. dahliae collection is comparable to that found in studies of American populations.     

两种轮枝菌对15种豆科牧草的致病性

 室内人工接种测定了两种轮枝菌3个菌株对15种豆科牧草的致病性,一个菌株是来自加拿大感病苜蓿上的Verticillium albo-atrum(Vaa),两个V.dahliae菌株中,Vd来自加拿大感病的马铃薯,CVd来自中国的沙打旺。两次试验结果表明,3个菌株对15种豆科牧草表现了不同程度的致病力。沙打旺、鹰嘴黄芪、紫花苜蓿、百脉根、埃及三叶草对3个菌株均感病,每次试验病株率都在50%以上。箭叶三叶草表现中等抗病,而白花草木樨、毛荚野豌豆、长柔毛野豌豆、波斯三叶草、杂三叶草、红三叶草和白三叶草等7种对3个菌株都表现抗病。红豆草对Vaa和CVd两个菌株感病,但抗Vd。山黛豆感染CVd,但抗Vaa和Vd。