不同绵羊品种FGF5基因的多态性分析

根据人和小鼠成纤维细胞生长因子5（FGFS）基因的同源序列设计引物对绵羊基因组进行PCR扩增，将扩增片段进行克隆和测序，并与人和小鼠的成纤维细胞生长因子5基因序列进行同源性比较，确定扩增的片段为绵羊的FGF5基因片段。采用PCR-SSCP技术分析了FGF5基因外显子在小尾寒羊、湖羊、藏羊、中国美利奴等4个绵羊品种的多态性。结果表明：FGF5基因在P1和P2引物扩增片段中存在PCR-SSCP多态性。经克隆测序分析，位于外显子1的引物1扩增产物存在G→T突变，该突变位点使编码的氨基酸发生A→S的改变；引物2扩增产物发生了碱基序列C→T的突变，这一突变位点没有引起编码氨基酸的改变，属于同义突变。对不同绵羊品种的基因型和基因频率统计结果表明，引物1扩增产物小尾寒羊、湖羊、藏羊以等位基因A为主，而中国美利奴羊则以等位基因B为主，且各群体均处于Hardy-Weinberg平衡；引物2扩增产物小尾寒羊、湖羊、中国美利奴羊均以等位基因E为主，而藏羊的基因型频率与其它品种有显著差异，中国美利奴羊在引物2位点的基因频率处于Hardy-Weinberg不平衡状态。     

延边黄牛FGF14基因多态性及其对生长性状的影响

本研究旨在探索延边黄牛成纤维细胞生长因子14（fibroblast growth factor 14,FGF14）第3外显子多态性及其对生长性状的影响。应用DNA直接测序法对延边黄牛FGF14基因第3外显子进行测序分析,利用高分辨率熔解曲线HRM分型技术对FGF14基因进行分型检测,探究FGF14基因不同基因型与16和24月龄延边黄牛生长性状的关联性,并进行遗传统计学分析。结果显示,在FGF14基因的631 947 bp处检测到1处A>G突变,有2个等位基因：A和G,存在3种基因型：AA、AG和GG。χ²检验结果表明,FGF14基因的基因型频率和等位基因频率在16和24月龄延边黄牛群体中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05）。多态信息含量（PIC）分析表明,FGF14基因在这2个群体中均处于中度多态（0.25 < PIC < 0.5）。与生长性状关联分析结果显示,FGF14基因不同基因型对16月龄延边黄牛背高和尻长均具有显著影响（P<0.05）,对24月龄延边黄牛体高、体重、十字部高均具有显著影响（P<0.05）。综上所述,推测FGF14基因对延边黄牛生长发育有一定影响,为后续延边黄牛肉质性状的现代分子育种选育工作提供参考。     

绵羊FGF5基因SNP的生物信息学分析

研究利用PCR-SSCP方法检测了FGF5基因在小尾寒羊、湖羊、藏羊、中国美利奴羊等绵羊品种单核苷酸多态性。结果表明:FGF5基因在P1引物扩增片段中存在PCR-SSCP多态性并引起编码氨基酸的改变。经克隆测序分析,位于P1引物扩增片段内存在G→T突变,该突变位点使编码的氨基酸发生A→S的改变对引起编码氨基酸的P1位点进一步进行了生物信息学分析,发现由于编码序列的改变引起蛋白质二级结构的变化,并引起限制性酶切位点的变化,但没有引起功能位点和三级结构的变化。     

绵羊Myf5基因多态性与胴体性状的相关性分析

为研究特克赛尔×哈萨克横交F2代绵羊Myf5基因多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)及其与胴体性状之间的关系,试验采用PCR测序技术和飞行时间质谱检测分型方法对434只特克赛尔×哈萨克横交F2代绵羊的Myf5基因SNPs进行分型,并将分型结果与其胴体性状(胴体重、胴体长、踝骨宽、臀宽、胸宽、肩宽和胸深)进行关联分析。结果表明:在Myf5基因上共发现了5个SNPs位点,即A116460176G、rs604841316、rs416158998、rs588855095和rs412277497。其中rs416158998属于内含子突变,在特克赛尔×哈萨克横交F2代绵羊中表现为中度多态[0.25<多态信息含量(PIC)<0.5],不处于Hard-Weinberg平衡状态(P≤0.05),与胸宽、肩宽和臀宽呈显著或者极显著相关(P<0.05或P<0.01)。rs588855095属于内含子突变,在绵羊中表现为低度多态(PIC≤0.25),处于Hard-Weinberg平衡状态(P>0.05),与臀宽呈显著相关(P<...     

绵羊胚胎FGF5基因单碱基突变体系的建立

研究旨在利用单碱基编辑技术定点修饰绵羊（Ovis aries）成纤维细胞生长因子5（fibroblast growth factor 5,FGF5）基因第1外显子以引入终止密码子,获得定点编辑类型的绵羊胚胎,为培育具有长毛性状的绵羊提供试验材料。首先设计合成4个单导向RNA （single guide RNA,sgRNA）寡核苷酸链（sgRNA-T1~sgRNA-T4）,构建4组不同的重组表达载体;将构建好的pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin和pCMV-AncBE4max-P2A-GFP质粒以共转染的方法分别转入4组绵羊成纤维细胞,随后用Cruiser^TM酶对转染的细胞进行活性检测并在胚胎水平进行测序验证。结果显示,sgRNA-T1和sgRNA-T4组细胞的PCR产物可被Cruiser^TM酶酶切,且测序结果表明都具有靶向效果,编辑效率分别为68.75%和47.37%。利用显微注射技术将不同浓度的AncBE4max mRNA与有效sgRNA混合注射到绵羊孤雌激活胚胎中,并检测胚胎卵裂率、囊胚率和编辑效率,结果显示,胚胎水平的最佳注射浓度组合为AncBE4max （ng/μL）∶sgRNA （ng/μL）=100∶50,从该浓度组中随机挑选的单枚胚胎测序结果显示,引入终止密码子的编辑效率为80%。而sgRNA-T1在不同浓度组合的注射胚胎中均未检测到编辑。本研究针对FGF5基因的第1外显子,通过在成纤维细胞转染表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊FGF5基因的2个sgRNA （T1、T4）;通过显微注射绵羊孤雌激活胚胎,成功在胚胎上实现FGF5基因第1外显子打靶位点C→T的转变,为后期FGF5基因定点编辑羊的生产奠定基础。     

藏系绵羊KAP3.2基因多态性及其对部分经济性状的影响

采用PCR-SSCP和DNA测序技术,对高原型、欧拉型和乔科型3个类型共254只藏绵羊KAP3.2基因的部分序列进行多态性分析,并利用最小二乘线性模型研究了其多态性与体质量、毛长和产毛量性状的关联性。结果,3个群体藏绵羊在KAP3.2基因座上均检测到AA、AB和BB 3种基因型,高原型以A等位基因为主,欧拉型和乔科型以B等位基因为主。3个群体基因型频率均处于Hardy-Weinberg非平衡状态,高原型和欧拉型达中度多态,乔科型为低度多态。测序表明KAP3.2基因271 bp处存在1个C→T的突变,属同义突变。体质量性状上,3类藏绵羊各基因型间均差异不显著;毛长性状上,3类藏绵羊AA基因型均显著高于BB型(P<0.05或P<0.01),而与AB型间无显著差异;产毛量性状上,3类藏绵羊AA基因型均显著高于BB和AB型(P<0.05)。结果表明,KAP3.2基因可作为影响藏系绵羊毛长和产毛量性状的分子标记。     

微卫星标记与绵羊部分毛用性状关系的分析

在绵羊1、6号染色体上选取BM6506、BM1824等5个微卫星基因座对待测绵羊群体部分毛用性状的表型数据资料按基因型分组进行方差分析和多重比较。结果表明,OarJMP8可对羊毛自然长度性状进行标记;BM6438和BM6506可对羊毛细度进行标记;在绵羊6号染色体上的OarJMP8附近存在控制羊毛自然长度的QTLs;在绵羊第1号染色体的BM6438和BM6506区域存在控制羊毛细度的QTLs。     

FGF5基因在中卫山羊中的SNP多态性分析

为了检测中卫山羊核心育种群中成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的单核苷酸多态性(SNP),试验采用PCR-RFLP方法,对该基因外显子1上384 bp位置处的SNP位点多态性进行检测。结果表明:在测定的179只试验羊中仅出现2种基因型,即AA基因型、AB基因型,基因型频率分别为0.932,0.068。A、B的基因频率分别为0.966,0.034,A等位基因在中卫山羊群体中为优势等位基因。多态信息含量(PIC)为0.063 53,为低度多态位点。卡方检验结果表明,基因处于HardyWeinberg平衡状态。分析发现,此SNP为同义突变,利用在线软件预测,该突变位点不影响mRNA的二级结构,中卫山羊群体中FGF5基因外显子上存在一个低度多态SNP位点。     

延黄牛FGF19基因多态性与肉质性状的关联分析

研究旨在探究延黄牛成纤维细胞生长因子19(Fibroblast Growth Factor 19,FGF19)基因多态性与肉质性状的相关性。实验收集106头延黄牛背最长肌组织,采用PCR混池及Sanger技术探索延黄牛FGF19基因存在的SNP位点与肉质性状进行关联分析。结果显示,延黄牛FGF19基因第2内含子存在3个SNPs位点：Chr29:46943179A>G、Chr29:46943605T>A和Chr29:46943660G>A均存在3种基因型;χ2检验结果显示：第1、3处突变位点均显著偏离Hardy-Weinberg平衡（P<0.05）,而第2处则处于平衡状态（P>0.05）;多态信息含量均表现为中度多态（0.25G位点AA基因型个体部分氨酸含量显著大于GG基因型;Chr29:46943605T>A位点的AA基因型个体蒸煮损失和眼肌面积极显著大于TT基因型,TT基因型个体压榨水分极显著小于TA基因型;AA基因型个体部分氨基酸含量显著大于TT基因型;Chr29...     

绵羊微卫星标记与部分毛用性状的关系研究

根据GenBank在绵羊1、6号染色体上选取了14个微卫星基因座，对被测绵羊群体所有的表型数据资料按基因型分组进行方差分析和多重比较，得出结论：ILSTS004、OarAE101、OarJMP8和BM1434个微卫星标记可以对羊毛自然长度性状进行标记；BM1824，BM6438和BM6506可以对羊毛细度进行标记。在绵羊6号染色体上的OarAE101、BM143和OarJMP83个位点之间或附近存在控制羊毛自然长度的QTLs；在绵羊第1号染色体的BM1824，BM6438和BM6506区域可能存在控制羊毛细度的QTLs。     

影响绵羊经济性状基因研究进展

多数家畜的经济性状是数量性状,如羊毛品质、肉质、生长速度、抗病力等.每个性状都是由多个基因调控的,而且这些基因对性状的影响大小是不均衡的,有的是主效基因,有的是辅助基因.微卫星DNA在染色体上是高度随机分布的,如果证实微卫位点专一性地与某主效基因之间是连锁的,那么微卫星标记的位置就可以辅助定位该主效基因.羊具有54条染色体,其中有26对常色体和两条性染色体[1].在1995年,绵羊的G-带核型(G-band karyotype )由北美第九国家动物细胞遗传(9th North American Colloquium on Domestic Animal Cytogenetics)所证实并由其进行了基因定位[1].     

绵羊FGF21基因核苷酸变异及其与生产性状的关联分析

为研究探讨FGF21基因核苷酸变异及其对绵羊生产性状的影响,本实验采集5个不同品种绵羊的血样并提取基因组DNA,测定相关生产数据,应用PCR-SSCP方法检测不同品种FGF21基因Exon-2区和Intron-2区核苷酸变异,利用一般线性模型(GLMs)分析Intron-2区核苷酸变异对罗姆尼羔羊生长性状和胴体性状的影...     

獭兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的多态性研究

随机选择5月龄左右獭兔50只。采用直接测序方法检测獭兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因第4个外显子的基因多态性;并对獭兔毛皮性状的相关数据进行方差分析和多重比较;将獭兔CDS编码区序列同其他物种进行比对。结果发现,所选獭兔群中,未发现碱基突变位点,在所有的个体中,仅发现一种单倍体型;獭兔的主要毛皮性状差异不显著(P0.05);獭兔CDS序列同其他物种相比差异不大。     

草原红牛IGFBP-5基因外显子多态性及对胴体性状的影响

为揭示草原红牛IGFBP-5基因外显子多态性与胴体性状的相关性,采用PCR-SSCP及PCR-RFLP两种方法分别对58头草原红牛群体该基因外显子多态性进行了检测,并对检测到的突变位点用SPSS软件分析其与胴体性状的相关性.结果表明:IGFBP-5基因第3外显子在191 bp处存在G(A)突变,该基因多态性与宰前活重、胴体重呈显著相关,BB型显著高于AA型(P0.05);对其他性状的影响差异不显著.通过研究IGFBP-5基因外显子的多态性,为草原红牛的选种选育提供实验依据.     

绵羊TSHR基因多态性及其与繁殖性状关联分析

为探讨TSHR基因多态性与绵羊季节性繁殖和产羔数的关系,本实验采用Sequenom Mass-ARRAY?SNP分型技术检测常年发情的小尾寒羊(407只)、湖羊(101只)、策勒黑羊(48只)和季节性发情的苏尼特羊(21只)、滩羊(22只)、草原型藏羊(161只)TSHR基因的单核苷酸多态性(SNP)位点,并进行群体遗传学分析及其与小尾寒羊产羔数的关联分析。结果表明:TSHR基因g.89430525G>A、g.89363881T>C和g.89431097C>G的基因型频率和等位基因频率在常年发情绵羊品种和季节性发情绵羊品种间差异极显著(P<0.01);这3个SNP位点在大多数绵羊品种中表现为中度多态,且在各个绵羊品种中处于哈代温伯格平衡状态(P>0.05);TSHR基因g.89431097C>G位点的多态性与小尾寒羊第1～3胎的产羔数显著相关(P<0.05),其中CC型母羊的产羔数显著低于CG和GG型母羊(P<0.05)。本研究表明,TSHR基因与绵羊季节性繁殖性状具有较强的相关性,同时参与绵羊季节性繁殖和多羔性状的调控。     

绵羊FGF 7基因组织表达及其多态性与产羔数之间的关系

旨在探究绵羊FGF7基因组织表达水平及其多态性与产羔数之间的关系。本研究利用半定量反转录-聚合酶链式反应(sqRT-PCR)和实时荧光定量PCR(qPCR)技术对绵羊FGF7基因在多羔小尾寒羊和单羔苏尼特羊以及小尾寒羊FecB不同基因型(BB、B+、++)各组织中的表达水平进行研究,同时采用Sequenom MassARRAY~?SNP技术,对多羔绵羊品种(小尾寒羊380只)和单羔绵羊品种(滩羊、苏尼特羊、萨福克羊、杜泊羊和草原型藏羊共380只)FGF7基因g.57842893CT位点多态性进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果表明,FGF7基因在单、多羔绵羊的心和肺中高表达,在其它各组织呈中等或低丰度表达;FGF7基因在多羔小尾寒羊绝大部分组织中的表达量均高于单羔苏尼特羊,但差异均不显著(P0.05),FGF7在小尾寒羊FecB不同基因型中的表达并无明显差异。g.57842893CT位点共存在CC、CT和TT 3种基因型,且基因型频率和等位基因频率在单、多羔品种间差异均达到显著水平(P≤0.05);g.57842893CT位点在苏尼特羊、萨福克羊和杜泊羊中表现为中度多态(0.25PIC0.50),在其它品种中表现为低度多态(PIC0.25);g.57842893CT位点仅在苏尼特羊、萨福克羊以及杜泊羊3个品种中均处于哈代温伯格平衡状态(P0.05);g.57842893CT位点与小尾寒羊第1、2以及第3胎产羔数均无显著关联(P0.05),但CC型各胎产羔数均高于TT型。综上表明,FGF7基因的表达水平与绵羊产羔数可能存在一定程度的正相关,虽然可能不是影响绵羊产羔数的关键基因,但g.57842893CT位点对绵羊产羔数性状的选育具有一定的指导意义。     

绵羊MSTN基因多态性及其与肉质性状的关联分析

【目的】探讨绵羊肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)基因多态性及其对绵羊肉质性状的影响,以期为绵羊肉用性能的选育提供有效的遗传分子标记。【方法】利用液相捕获测序技术获取MSTN基因在杜泊羊(D)、滩羊(T)和小尾寒羊(XH)共91只绵羊中的变异位点,并筛选出品种间差异显著的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点。针对筛选出的位点,利用飞行质谱检测技术对滩羊、小尾寒羊、杜泊羊和杜滩寒三元杂交羊(DTH)共30只绵羊进行基因分型,并与肉质性状进行关联分析。【结果】试验筛选出的MSTN基因rs129059715位点在4个绵羊群体中共检测到3种基因型,分别为15个CC基因型、9个CA基因型及6个AA基因型,C为优势等位基因(除杜滩寒三元杂交羊外)。在杜泊羊、滩羊和杜滩寒三元杂交羊群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),在小尾寒羊群体中处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05);在杜泊羊和小尾寒羊群体中均处于低度多态(PIC<0.25);在滩羊和杜滩寒三元杂交羊群体中均处...     

绵羊Lpin3基因多态性及其与尾型和屠宰性状的关联研究

为探究Lpin3基因变异对绵羊肉用性状的影响,选择广灵大尾羊和小尾寒羊两品种脂尾型绵羊为研究对象,采用DNA直接测序法检测Lpin3基因5'非编码区部分序列的单核苷酸多态性(SNPs),并分析SNPs与尾型和屠宰性状的关联。结果检测到Lpin3基因5'非编码区起始密码子上游约1 200 bp的DNA序列13个SNPs,其中-334~-332ins TAA显著降低了小尾寒羊的尾宽(P0.05),提高了小尾寒羊的屠宰性状(P0.05),在小尾寒羊中的突变频率显著高于广灵大尾羊(P0.05),对广灵大尾羊各性状无显著影响(P0.05)。尽管不显著,小尾寒羊中-443 TC与-334~-332 ins TAA具有相似的遗传效应。该研究可为绵羊Lpin3基因功能及肉质性状分子标记辅助选择提供依据。