16味蒙药对3种仇清型牛源致病性大肠杆菌体外抑菌及联合抑菌效果的研究

为研究蒙药对3种血清型牛源致病性大肠杆菌（Escherichia coli,E. coli）的体外抑菌效果,采用牛津杯法测定16味蒙药对受试菌株的抑菌圈直径,利用微量稀释法结合平板法测定最小抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）,采用棋盘法测定敏感蒙药的协同指数（FICI）。结果表明,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、乌拉勒吉嘎纳对3种血清型大肠杆菌的抑菌圈直径为16.10-29.64 mm,MIC为7.81-31.25 mg/mL,MBC为15.63-125 mg/mL。联合抑菌试验结果表明,乌拉勒吉嘎纳与协日—洪连,舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如对E. coli O26的FICI为0.50,乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏对E. coli O83的FICI为0.50。结果提示,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、呼仍—图如、乌拉勒吉嘎纳、阿纳尔对3种血清型大肠杆菌的综合抑菌效果较好;舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如在抑制E. coli O26时表现为协同作用,组方时可优先考虑;乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏在抑制E. coli O83时表现为协同作用,组方中可优先考虑。     

15味蒙药对4种血清型牛源致病性大肠杆菌体外抑菌效果研究

为了筛选具有抑制牛源致病性大肠杆菌的蒙药,采用水煎煮方法提取浑钦等15味蒙药的水提液,应用牛津杯法测定15味蒙药的抑菌圈直径,通过微量稀释法和平板法测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:浑钦和高勒图宝日对4种血清型牛源致病性大肠杆菌抑菌效果较好,均达到极度敏感或高度敏感;这两种蒙药对4种血清型牛源致病性大肠杆菌的MIC为0.016～0.125 g/mL,MBC为0.063～0.5 g/mL。说明蒙药浑钦和高勒图宝日有希望用于治疗大肠杆菌病的药物研发。     

牛源致病性大肠杆菌的敏感药物筛选及腐殖酸钠的抑菌试验

为了解黑龙江地区部分规模化牛场犊牛腹泻性大肠杆菌毒力基因和耐药基因分布情况,筛选敏感药物以及分析腐殖酸钠对牛源致病性大肠杆菌的防治作用,本研究收集了40份病料,通过分离纯化、染色镜检、生化鉴定以及分子生物学的方法对分离菌进行鉴定;采用PCR技术进行毒力基因和耐药基因的检测;采用K-B法进行药敏检测;利用稀释平板计数法研究不同浓度腐殖酸钠对大肠杆菌的抑制效果;腐殖酸钠灌胃小鼠研究其对攻毒小鼠的保护作用。结果显示,共分离出牛源大肠杆菌30株;其中25株检出毒力基因,在检测的10种毒力基因中,有8种毒力基因被检出,检出率达83.3%,同时还存在多种毒力基因组合;在检测的7种耐药基因中bla_TEM基因检出率最高,为100%,bla_SHV基因最低,为13.3%,其他耐药基因检出率也较高;药敏试验结果显示,30株分离菌对美罗培南最为敏感,其次为阿米卡星;稀释平板计数结果显示,5%腐殖酸钠的抑菌效果优于其他浓度;攻毒试验结果显示,腐殖酸钠能明显提高攻毒小鼠的存活率。本研究对该地区抗菌药物的合理使用以及腐殖酸钠的临床应用提供了依据。     

16味蒙药对3种血清型牛源致病性大肠杆菌体外抑菌及联合抑菌效果的研究

为研究蒙药对3种血清型牛源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)的体外抑菌效果,采用牛津杯法测定16味蒙药对受试菌株的抑菌圈直径,利用微量稀释法结合平板法测定最小抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),采用棋盘法测定敏感蒙药的协同指数(FICI)。结果表明,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、乌拉勒吉嘎纳对3种血清型大肠杆菌的抑菌圈直径为16.10～29.64 mm,MIC为7.81～31.25 mg/mL,MBC为15.63～125 mg/mL。联合抑菌试验结果表明,乌拉勒吉嘎纳与协日—洪连,舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如对E. coli O26的FICI为0.50,乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏对E. coli O83的FICI为0.50。结果提示,乌里史古—达兰—哈力苏、协日—洪连、呼仍—图如、乌拉勒吉嘎纳、阿纳尔对3种血清型大肠杆菌的综合抑菌效果较好;舒布格日—希木勒德格与呼仍—图如在抑制E. coli O26时表现为协同作用,组方时可优先考虑;乌拉勒吉嘎纳与乌里史古—达兰—哈力苏在抑制E.coli O83时表现为协同作用,组方中可优先考虑。     

中草药提取物对致病性大肠杆菌体外抑菌试验

根据黄连、黄芩、白头翁、秦皮和穿心莲有效成分的性质,对各药有效成分分别进行提取,获得硫酸黄连素纯品、黄芩苷纯品、30∶1白头翁、30∶1秦皮、20∶1穿心莲提取物,将提取物按一定比例组成配方,采用琼脂平板稀释法,通过单味中草药提取物和组方对仔猪致病性大肠杆菌标准毒株K99和本试验室分离鉴定的O1、O2、O8、O138、O141、078、K89进行体外抑菌试验,结果表明,中药提取物及组方均有较好的抑菌效果,其中组方抑菌效果明显高于单味中草药提取物。     

复方中草药对鸡致病性大肠杆菌体外抑菌试验

中草药具有药物较低、无耐药性、毒副作用较小等多种优点,复方中草药被广泛应用于畜禽疾病防治中.实验通过复方中草药对鸡源致病性大肠杆菌体进行了外抑菌效果检测,自拟了5种复方中草药制剂,水煮法提取复方中草药药液,浓度为1 g/mL;利用平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定6种复方中草药体外抑菌效果.结果显示,复方2、复方4和复方5对鸡源致病性大肠杆菌体外抑菌效果较好.     

单味中草药对仔猪致病性大肠杆菌体外抑菌试验

为了筛选出对仔猪致病性大肠杆菌流行株体外抑菌活性强的单味中草药,本实验用水提法制备复方中草药药液,浓度为1g/mL;利用平板打孔法和试管二倍稀释法分别测定单味中草药抑菌圈直径大小和最小抑菌浓度(MIC).     

牛源致病性大肠杆菌的实验室诊断

黑龙江省大兴安岭市周边某牛场发生了肉牛突然死亡情况,为了确定是何种病因,对病死牛只进行病理剖检和无菌采集病料。对采集的病料进行细离培养,通过革兰氏染色、PCR检测及动物试验进行鉴定。为了给临床用药提供依据,对该病原菌进行药敏筛选。结果表明该致病菌对头孢唑林和环丙沙星敏感,对庆大霉素中敏,对多西环素低敏。经环丙沙星和头孢唑林治疗后,病情得到了控制。     

nisin与中药联合应用对禽致病性大肠杆菌体外抑菌效果研究

旨在评价乳酸链球菌素(nisin)与中药联合应用对禽致病性大肠杆菌的体外抑菌效果。采用二倍稀释法分别测定nisin、五味子、诃子、乌梅、枳壳、松针单独用药时对禽致病性大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),应用棋盘微量稀释法分别测定nisin与5味中药联合使用时对禽致病性大肠杆菌的MIC。结果表明,nisin单独使用时对禽源致病性大肠杆菌没有抑菌效果,五味子、诃子、乌梅的MIC均为62.5mg/m L,枳壳的MIC为125.0 mg/m L,松针的MIC为250.0 mg/m L;nisin与松针联合使用时无抑菌作用,与五味子联合使用时MIC分别为1.25 mg/m L和15.625 mg/m L,与诃子、枳壳、乌梅联合使用时MIC均为2.5 mg/m L(nisin)和31.25 mg/m L(中药)。综上提示,nisin与五味子、诃子、枳壳、乌梅联合应用时,可提高这4味中药的抑菌效果。     

6种血清型牛源致病性大肠杆菌的体外抑菌效果研究

试验选择蒙药和中药对从奶牛新鲜粪样中分离鉴定得到的6种血清型致病性大肠杆菌进行了体外抑菌试验,结合2倍稀释法和平板法测定了药物最小抑菌浓度和最低杀菌浓度.结果表明:5味蒙药中浑钦、希拉-洪连、毕力格图娜布其在较低药物浓度下就可抗菌,而达邻-哈日苏、查干-温都苏抗菌效果较差,较高药物浓度才可发挥抗菌作用;3味中药抗菌能力依次为瓜蒌、苍术、板蓝根.结果说明不同药物体外抗菌效果不同,可能是由于不同药物中所含的有效成分不同而致.     

两种中草药提取物对致病性大肠杆菌的体外抑菌试验

采用琼脂平板稀释法,通过黄连、黄芩提取物对仔猪致病性大肠杆菌标准毒株K99和本试验室分离鉴定的O1、O2、O8、O138、O141、O78、K89菌株进行体外抑菌试验表明,两种提取物对仔猪致病性大肠杆菌均有抑菌效果,其中硫酸黄莲素纯品和黄芩苷纯品按不同的浓度配伍对8种致病性大肠杆菌进行体外抑菌试验,结果配伍后其抑菌活性明显提高.     

中药肠氨对仔猪致病性大肠杆菌的体外抑菌试验

无菌采集病死仔猪的病料,经过细菌分离培养、形态学检查、生化鉴定和致病性试验,确定该菌株为致病性大肠杆菌。对所分离的大肠杆菌进行体外抑菌试验,药敏试验结果和最小抑菌质量浓度结果表明,中药肠氨(CA)对仔猪致病性大肠杆菌具有较强的抑制作用。     

16味蒙药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O8的体外抑菌效果研究

为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌（S.aureus）和大肠杆菌O8（E.coli O₈）具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimal bactericidal concentration,MBC）,棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22~22.44 mm,MIC为15.6~250 mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29~26.41 mm,MIC为15.6~500 mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。     

16味蒙药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O8的体外抑菌效果研究

为筛选对奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌O8(E.coli O8)具有良好抑菌作用的蒙药,本试验采用牛津杯法测定金银花、黄连、何首乌、地榆、五味子、秦皮、穿心莲、甘草、蒲公英、夏枯草、虎杖、柴胡、黄柏、苦参、石榴皮、板蓝根16味蒙药的抑菌圈直径,微量稀释法和平板法测定蒙药的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC),棋盘法测定敏感蒙药对E.coli O8和S.aureus的协同指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。结果显示,黄柏、金银花、黄连、五味子、蒲公英、秦皮6味蒙药对S.aureus的抑菌圈直径为10.22～22.44mm,MIC为15.6～250mg/mL;五味子、金银花、黄连、秦皮4味蒙药对E.coli O8的抑菌圈直径为11.29～26.41mm,MIC为15.6～500mg/mL;黄柏与黄连联合用药对S.aureus的FICI为0.36,为协同作用,黄连与地榆联合用药对E.coli O8的FICI为0.48,为协同作用。综上所述,金银花、黄连、五味子、秦皮、蒲公英、黄柏6味蒙药对S.aureus综合抑菌效果达极敏或高敏;金银花、黄连、五味子、秦皮4味蒙药对E.coli O8综合抑菌效果达极敏或高敏,黄柏、黄连、秦皮在抑制S.aureus的组方中可优先考虑,黄连与地榆在抑制E.coli O8的组方中可优先考虑。     

芍药汤对致病性大肠杆菌的抑菌效果研究

为观察芍药汤抗大肠杆菌的作用效果,试验分为体外牛津杯抑菌试验和小鼠体内抗大肠杆菌感染试验两部分。通过观察统计体外牛津杯抑菌试验中抑菌圈大小,小鼠的死亡数及死亡率,解剖小鼠观察其各个脏器的变化,血常规检测小鼠血液中白细胞、红细胞及血小板的变化。结果表明:芍药汤培养皿未出现抑菌圈。在预防及治疗试验中,芍药汤组小鼠死亡率及血液中各项白细胞指标均极显著低于阴性对照组(P<0.01);各项红细胞及血小板指标均极显著地高于阴性对照组(P<0.01)。通过解剖芍药汤组与阴性对照组小鼠,发现阴性对照组中小鼠小肠的肠系膜充血现象较为明显。说明芍药汤对感染大肠杆菌的小鼠具有较好的防治效果,但不是通过直接抑制大肠杆菌实现的。     

地锦草不同组方对大肠杆菌的体外抑菌试验

为研制以地锦草为主药,组方治疗临床大肠杆菌病,提供理论依据,自拟中药处方6个,经水煮处理制成浓度为1g/mL的受试溶液,采用试管倍比稀释法和平板打孔法,对猪源致病性大肠杆菌O20、O48和O161进行体外抑菌试验。试验结果:组方Ⅲ抑菌作用最强,对O48和O161的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)均为62.5mg/mL,对O20的最低抑菌浓度(MIC)为62.5mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为125mg/mL。     

白头翁散对大肠杆菌的体外抑菌效果观察

为了评价白头翁散对大肠杆菌的体外抑菌效果,采用试管二倍稀释法测定白头翁散组方中白头翁、秦皮、黄柏、黄连4味中药水提物及其组成的药对对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),并筛选出抗菌作用较强的药对精简组方。单药中黄连抑菌效果(MIC为50 mg/mL)和杀菌效果(MBC为50 mg/mL)最强,黄连与秦皮联合组成药对对大肠杆菌的抑菌效果(MIC为12.5 mg/mL)最强,将4味药物联合组成的方剂抑菌效果最佳(MIC为6.25 mg/mL、MBC为100 mg/mL)。由此表明,白头翁散组方中两种药物联合比单药的抑菌效果好,4种药物组成的方剂比2种药物组成的药对抑菌效果好。     

肉鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验

无菌采取辽南某鸡场送检的疑似大肠杆菌病的病、死肉鸡心血、肝、脾、肾,进行病原菌的分离、生化鉴定及药敏试验。生化鉴定结果显示该鸡场鸡只的病原为大肠杆菌,并且该菌有较强的溶血性,动物实验显示,该菌对仔鸡有较强的致病力。药物敏感性试验结果显示,该菌对复达欣、先锋Ⅵ、菌必治、庆大霉素敏感,而卡那霉素、链霉素、头孢呋肟、红霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、环丙沙星对它完全没有抑制效果。结果表明,在该鸡场出现了致病力较强的耐药性大肠杆菌,在以后的大肠杆菌病治疗过程中要根据药敏试验结果,选用敏感药物交替使用,按疗程用药。     

7味蒙药对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌体外抑菌试验研究

为筛选出对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S. aureus）和大肠杆菌（Escherichia coli,E. coli）具有良好抑菌作用的蒙药,试验采用打孔法测定S. aureus和E. coli对石榴皮、诃子、小白蒿、黄芩、黄芪、苦参、铁线莲7味蒙药敏感程度,微量稀释法测定蒙药的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）,棋盘法测定敏感蒙药对S. aureus和E. coli的协同指数（fractional inhibitory concentration index,FICI）。结果显示：石榴皮、诃子、黄芩3味蒙药对S. aureus的抑菌圈直径为23.30~32.60 mm,MIC为0.98~7.80 mg/mL;石榴皮、诃子、黄芩3味蒙药对E. coli的抑菌圈直径为5.20~12.50 mm,MIC为7.80~31.50 mg/mL;石榴皮与诃子联合用药对S. aureus的FICI为1.00,为相加作用;诃子与黄芩、石榴皮分别联合用药对E. coli的FICI都为0.75,为相加作用。综上所述,石榴皮、诃子、黄芩3味蒙药对S. aureus综合抑菌效果达极度敏感或高度敏感;石榴皮、诃子、黄芩3味蒙药对E. coli综合抑菌效果达极度敏感或高度敏感;在抑制S. aureus的配方中石榴皮、黄芩、诃子可被优先考虑;在抑制E. coli的配方中黄芩、诃子、石榴皮可被优先考虑。     

牛源大肠杆菌对秀丽隐杆线虫的致病性研究

为建立牛源大肠杆菌-秀丽隐杆线虫致病模型,本研究从广西南宁、桂林、柳州等地区收集的牛病料中分离出13株大肠杆菌,继而对这些大肠杆菌进行血清学鉴定及小鼠、秀丽隐杆线虫的致病性试验。采用玻片凝集法鉴定大肠杆菌的O血清型,并将13株大肠杆菌培养液以3.0×10~9 CFU/mL、0.2 mL/10 g体重给小鼠腹腔注射,同时分别喂食N2野生型秀丽隐杆线虫。结果显示,大肠杆菌的O血清型为O127、O126和O44,其中O126为优势血清型(4/13)。致病性结果显示,有11株大肠杆菌能使小鼠致死(致死率为40%～100%),2株大肠杆菌对小鼠没有致死性(致死率为0)。对小鼠有强致病性的大肠杆菌,对线虫的致死率也较高,死亡率在第3～6天最为显著,半数致死时间为3～4.5 d,最长存活时间为9 d;对小鼠不致死的两株大肠杆菌对线虫的致死率也较低,线虫死亡率下降趋势缓慢,半数致死时间为5～6 d,最长存活时间为10～11 d。肠道细菌计数结果显示,大肠杆菌在线虫体内的数量与时间呈线性关系,大肠杆菌不断破坏线虫的免疫系统,从而导致了线虫的死亡。本研究结果表明,大肠杆菌对线虫和小鼠的致病力试验结果一致,说明成功建立了牛源大肠杆菌-秀丽隐杆线虫致病模型,为牛病防治与临床用药提供了依据。