内蒙古绒山羊皮肤蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

试验旨在建立内蒙古绒山羊皮肤蛋白质双向电泳图谱。采用液氮研磨法提取蛋白质,通过双向电泳技术对蛋白质进行分离,分别对不同的蛋白质沉淀方法、上样量和SDS-PAGE凝胶浓度进行比较。结果显示,使用2-D Clean-up试剂盒处理、上样量为20 μg、采用10%的SDS-PAGE凝胶浓度时可获得重复性好和分辨率高的双向电泳图谱,便于后续的内蒙古绒山羊皮肤差异蛋白质组学分析。     

野牛草种子蛋白质双向电泳体系的优化

通过对野牛草种子蛋白双向电泳蛋白样品制备方法、等电聚焦程序以及固化胶条pH范围优化筛选,构建了适合其植物种子蛋白组研究的电泳体系。实验结果表明,使用Trizol法制备样品,可得到高纯度种子蛋白,结合使用pH4～7IPG胶条,以及优化的聚焦程序Ⅲ,能获得高分辨率、重复性好的蛋白质2-DE图谱。图像分析表明,银染后可以检测到600个以上蛋白点,其等电点主要分布于pH4～7区域,分子量主要分布于10～120kDa之间。     

黄花苜蓿双向电泳体系的建立

通过对传统的双向电泳技术进行改进和优化,建立适合分析黄花苜蓿蛋白组学研究的双向电泳体系.结果表明,使用改进方法后所获得的双向电泳图谱稳定性和重复性较好,分辨率较高,经银染后可分辨出400多个蛋白点,其等电点主要分布于pI 5～7,分子量主要分布于10～150kDa;经考马斯亮蓝染色后可分辨出800多个蛋白点,其等电点主要分布于pI 5～7,分子量主要分布于10～150kDa.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质组双向电泳方法的建立及优化

为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)蛋白质组双向电泳方法,本研究通过对HP-PRRSV蛋白样品提取、裂解、一向等电聚程序、上样量、染色试剂、显色时间等条件优化,建立了有效的HP-PRRSV蛋白质组学双向电泳方法。优化结果表明采用冻融-超声-裂解提取样品,结合2-D clean-up试剂盒纯化蛋白,按上样量为200μg,采用硝酸银染色,显色6 min,选择适宜的一向等电聚焦参数,能获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。HP-PRRSV蛋白质组双向电泳方法的建立,为开展该病毒蛋白质组和免疫蛋白质组研究奠定了基础。     

家蚕不同品种后部丝腺蛋白质双向电泳图谱比较

采用蛋白质双向电泳和图像分析技术,研究发现不同品种的家蚕5龄第4天后部丝腺细胞的蛋白质组成存在明显差异,并且蚕茧高产品种与蚕茧中、低产量品种之间所涉及的差异蛋白质斑点各不相同,暗示丝素基因的转录、翻译可能涉及了一个非常复杂的多点控制的调控系统,即不同品种的产茧量可能涉及不同的调控位点或调控因子。     

水牛卵泡液差异蛋白质双向电泳方法的建立及质谱分析

旨在研究沼泽型水牛成熟前后卵泡内差异表达蛋白质的变化规律。采用双向凝胶电泳技术分离成熟卵泡液和未成熟卵泡液总蛋白质,建立和优化了卵泡液的双向电泳体系,并使用质谱鉴定差异表达蛋白点。结果显示,丙酮沉淀法处理得到的总蛋白质样品后,在24cm(pH 4～7)胶条且上样量350μg时得到分辨率较好的双向电泳图谱。软件分析得到11个差异蛋白点,以成熟卵泡液作为对照,5个蛋白点表达上调,3个蛋白点表达下调,1个蛋白点缺失,2个蛋白点在未成熟卵泡液中特异性表达。质谱成功鉴定出4个蛋白质:过氧化物酶-2、醛糖还原酶、牛纤维蛋白原的晶体结构、转甲状腺素蛋白。该研究建立了良好的卵泡液双向电泳体系,分析并鉴定一批水牛卵泡液差异蛋白质,对于研究水牛卵母细胞的发育微环境和成熟机制提供了新的研究线索。     

支气管败血波氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

为建立支气管败血波氏杆菌(Bb)外膜蛋白(OMPs)双向电泳(2-DE)图谱,本研究利用碳酸钠法提取OMPs,并分别对裂解液、pH值、上样量、聚焦条件、染色方法等进行优化。2-DE结果表明,用裂解液5 MUrea、2 M Thiourea、2%CHAPS、2%SB3～10溶解蛋白,pH4～7的13 cm线性胶条考染上样量为750μg、银染上样量为75μg,聚焦条件为500 V,2 h,1 000 V,1 h,8 000 V,2∶30 h,8 000 V,4 h时,能获得聚焦良好、分离清晰的Bb OMPs图谱。本研究首次建立了Bb OMPs的2-DE图谱,为其蛋白质组学研究奠定了基础。     

鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

鸭疫里默氏杆菌(Rjemerella anatipestifer,RA)感染是目前危害养鸭业的一种严重的细菌性传染病.国内外虽然对RA有一些研究,但是在毒力因子、致病机理、保护性抗原等方面的研究尚未充分展开.     

奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质组双向电泳方法的建立

蛋白质样品的双向电泳分离效果受各种试验条件的影响较大,针对不同来源的蛋白样品进行试验条件的优化可获得具有较高分辨率的双向电泳图谱。试验拟建立优化的奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质双向电泳分离体系,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对关键因素进行优化,采集电泳图谱并分析双向电泳图谱中蛋白斑点的数量、图像分辨率及背景条纹的变化。通过对试验条件的筛选和优化,成功建立了具有较高分辨率的奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质组双向电泳分离体系。     

副猪嗜血杆菌菌体蛋白的提取及蛋白质双向电泳方法建立

为了建立副猪嗜血杆菌菌体蛋白的双向电泳方法,获得背景清晰、蛋白分辨率高的双向电泳图,对细菌裂解方法、蛋白上样量、IPG胶条选择等关键步骤进行优化。结果显示,采用超声(9.9 s/停顿9.9 s,200 W)冰浴破碎细菌,5 min后,裂解液溶解沉淀,4℃过夜裂解提取菌体蛋白,以0.6 mg菌体蛋白上在p H值3~10非线性IPG胶条上进行电泳,最后考马斯亮蓝G250染色,获得的蛋白质点清晰,效果最好,随机挑取14个蛋白点进行质谱鉴定,证实均为副猪嗜血杆菌菌体蛋白。     

家蚕催青期胚胎蛋白质图谱的建立

胚胎发育一直是生命科学研究的主题之一。通过家蚕各个时期胚胎蛋白质的研究 ,可以从蛋白质水平探讨胚胎蛋白质的构成和基因顺序表达的规律。应用蛋白质组的研究方法 ,以连续发育的家蚕胚胎为材料 ,采用蛋白质双向电泳技术 ,对催青期各个时期的胚胎蛋白质进行了分离 ,建立了家蚕催青期各个胚胎蛋白质参考图谱。从催青期各个时期的胚胎蛋白质图谱中发现 :从临界期胚胎到气管显现期的胚胎 ,结构基因表达变化不大 ;从点青期开始 ,一些酸性蛋白有关的结构基因被激活表达。     

牦牛卵泡液差异蛋白质组双向电泳图谱的构建与质谱分析

从蛋白质水平了解牦牛季节性繁殖规律,利用双向电泳与质谱鉴定技术分析牦牛卵泡液与血浆蛋白质组分变化。以青海高原牦牛卵泡液与血浆为研究对象,采用双向电泳技术构建牦牛卵泡液与血浆蛋白质双向电泳图谱,银染后利用Image Master 2D Platinum软件分析并采用MALDI-TOF-MS进行质谱鉴定。用试剂盒ProteoExtract Albumin/IgG Removal Kit去除高丰度蛋白质后,利用2-DE技术获得了分辨率较高的卵泡液与血浆蛋白质电泳图谱,卵泡液与血浆蛋白质图谱对比分析共发现了24个差异表达蛋白质点,其中2个蛋白质点表达上调,22个蛋白质点表达下调。经质谱分析,最终成功鉴定出8个蛋白质点、5个未知蛋白质点。本研究成功构建了蛋白质图谱及分离鉴定的差异蛋白质,为从蛋白质水平揭示牦牛卵泡发育规律及了解卵母细胞发育的微环境提供了试验依据。     

双向电泳检测奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质方法的建立

为研究不同激素或营养素对乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的影响,本实验建立细胞核磷酸化蛋白质提取方法及双向电泳实验技术。结果表明,细胞核磷酸化蛋白纯化结合双向电泳技术是乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组学研究的有效方法,可为进一步研究乳腺上皮细胞机理提供技术基础。     

桑树树液蛋白质的双向电泳分析

应用 Ｉ Ｅ Ｆ 和 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 双向电泳技术，分析了桑树（ Ｍｏｒｕｓ） 树液蛋白质的电泳图谱。结果表明，供试栽培品种的蛋白质谱比较相似，相似系数在０７２ ～１００ 之间；品种间存在１４ 个共有组分，占检测组分总数的５１９ ％ ；桑树栽培种与野生种的差异比较显著。     

红三叶AFLP体系的建立及优化

采用正交设计和单因素试验相结合的方法,以红三叶(Trifolium pratense)高感白粉病品种岷山红三叶与抗白粉病新品系(甘农PR1)杂交产生F1代作为试验材料,对红三叶AFLP反应中7个因素(DNA浓度,酶切时间,两酶(EcoRI,MseI)浓度,预扩增产物稀释倍数,2×PCR Master Mix用量,引物组合)进行优化试验。建立了适合红三叶稳定且多态性高的最佳AFLP反应体系:90ng/μL DNA模板、5h酶切、8UEcoRI、6UMseI、30倍稀释预扩增产物、10μL 2×PCR Master Mix。优化的AFLP反应体系在红三叶的验证中表现出良好的稳定性和重复性,为进一步进行红三叶种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和遗传多样性的分析奠定了技术基础。     

家蚕蛋白质双向电泳的样品制备方法

进行蛋白质组研究的关键是要尽可能完整地获得一个基因组在一个生物体或一个组织器官的特定时期表达的蛋白质的种类和数量 ,双向电泳技术是分离组织和器官蛋白质的核心技术 ,而蛋白质样品的制备是双向电泳的基础。以家蚕胚胎、中肠、皮肤、丝腺等组织器官为材料 ,采用磷酸缓冲液或Tris HCl缓冲液抽提蛋白质样品 ,用 6种不同的蛋白质溶解缓冲液溶解蛋白质 ,经蛋白质双向电泳和蛋白质图像软件分析 ,结果表明用磷酸缓冲液抽提、蛋白质溶解缓冲液E溶解是制备家蚕蛋白质双向电泳样品的较好方法。蛋白质磷酸抽提缓冲液 (PBS)的组成为 :32 5mmol/LK2 HPO4,2 6mmol/LKH2 PO4,4 0 0mmol/LNaCl,pH 7 6。蛋白质样品溶解缓冲液E的组成为 :8mol/L尿素 ,2mol/L硫尿 ,4 %CHAPS ,2 0mmol/LTrisbase,30mmol/LDTE ,2 %Pharmalyte(pH 3～ 10 )。     

桑突变体Cty-Ym叶片蛋白质的双向电泳及质谱分析

为探讨桑树叶色突变体CtyYm变异的分子机理,采用蛋白质组学分析技术,从突变体和对照桑中提取并分离叶片蛋白质,获得了IEF/SDSPAGE双向电泳图谱,在CBB染色条件下,检测到比较清晰的蛋白质点184个;经PDQuest软件分析,发现两者蛋白质点的相对含量有36处存在显著差异(±2倍),尤其是突变体中蛋白质点SSP2801的相对含量仅为对照桑的258%,经胶内酶切、LCESIQTOFMS分析、肽质量和碎片离子检索分析,鉴定该蛋白组分为RuBisCO大亚基,推测突变体CtyYm叶色黄化可能与RuBisCO大亚基含量减少有关。     

过瘤胃蛋氨酸对滩羊羔羊生产性能及羊毛品质的影响

采用饲养试验,研究过瘤胃蛋氨酸对滩羊羔羊生产性能及羊毛品质的影响。结果表明,试验组日粮添加4g/d过瘤胃蛋氨酸可显著提高滩羊羔羊平均日增重和干物采食量(P0.05),且料重比比对照组降低1.44,每只羊的经济收益比对照组增加23.94元。试验组羊毛自然长度、伸直长度和净毛率显著提高(P0.05),羊毛密度和羊毛细度与对照组无显著差异(P0.05)。研究结果说明,日粮添加4g/d过瘤胃蛋氨酸对滩羊羔羊的生产性能和羊毛品质具有促进作用。     

宁夏滩羊体重模型的建立及相关分析

本研究测定了宁夏滩羊的3个体尺性状,并通过SAS软件分析了它们与体重间的相关关系、对体重的直接和间接影响以及对体重的决策程度,并建立了体重与体尺的最优回归模型.结果表明,胸围和体长是影响滩羊体重主要的体尺指标.根据各项分析建立最优回归模型为:Y=0.29214X1+0.64096 X2-34.98122,X1表示体长,X2表示胸围.该研究为品种选育和种质资源鉴定提供理论依据.     

土鳖虫ISSR-PCR反应体系的建立及优化

<正>药用土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖(Eupolyphaga sinensis Walker)或冀地鳖(Steleophaga plancyi(Boleny))的雌虫干燥体[1],临床上广泛应用于高脂血症、血栓性疾病和心脑血管缺血等疾病的治疗。目前,缺乏对不同种质的土鳖虫进行系统评价的方法,因此在分子水平上开展对土鳖虫的种质资源研究对于土鳖虫种质资源的合理开发和利用具有重大意义。