牛核移植胚胎中IGF2/H19基因簇父源印记控制区甲基化模式研究

为了揭示牛核移植胚胎异常甲基化模式,选择配子期、S期、2-cell、8-cell和桑葚胚5个发育阶段的早期核移植胚胎作为试验组,以相应阶段的体外受精胚胎(IVF)作为对照,对核移植胚胎中呈父源印记的IGF2/H19基因簇ICR区进行了BSP测序。结果表明:SCNT的父源基因在S期之前发生了主动去甲基化,伴随着DNA复制的开始,又发生了被动去甲基化。SCNT胚胎父源基因与IVF胚的甲基化重建能力相当;筛选了1个去甲基化抑制机制的易感位点,H19的转录起始点前468 bp开始的262 bp序列中的4号甲基化位点。     

牛Wif1基因印记及甲基化调控印记的分子机制研究

为了研究Wif1基因在牛中的印记状态和调控印记的分子机制,本研究首先应用基于单核苷酸多态(SNP)的测序方法,分析了Wif1基因在牛组织中的印记状态,结果发现,Wif1基因在牛中的印记表现出组织特异性,在肺中为单等位基因表达,而在心、肝、脾、肾、肌肉和脂肪6个组织中为双等位基因表达。进一步应用亚硫酸氢盐测序法分析Wif1基因启动子区29个CpG位点在牛肺(单等位基因表达)和肝(双等位基因表达)组织中等位基因特异的甲基化状态,结果发现,在肺和肝中,两条亲本链间的甲基化水平无显著差异(P0.05)。进一步分析每个CpG位点在肺和肝中亲本链间甲基化率差异,发现与双等位基因表达的肝相比,肺中存在8个亲本链间甲基化率差异显著的CpG位点,其中3个(第1、2和6)位于转录因子的结合位点上。由于单个CpG位点的甲基化变化会影响转录因子的结合,推测这3个CpG位点的甲基化可能参与调控Wif1基因的组织特异性印记。     

夏南牛犊牛口蹄疫母源抗体衰减变化试验研究

[目的]探讨夏南牛犊牛口蹄疫母源抗体衰减变化规律,为犊牛口蹄疫科学适时免疫提供参考依据。[方法]血样采集使用一次性真空采血管,抗体检测采用液相阻断ELISA检测方法,抗体效价判定依据畜牧兽医主管部门动物疫病监测方案。[结果]母牛产后、犊牛出生当天,O型抗体效价合格率达100％,A型抗体效价合格率达92％。O型口蹄疫第4周抗体合格率达86.96%,到第5周已降至66.67%;A型口蹄疫第3周抗体合格率达75%,第4周抗体合格率已降至39.13%。牛口蹄疫O型疫苗抗体衰减时间稍长于A型。[结论]犊牛获得母源抗体的保护：O型口蹄疫4周内有较强的保护作用,3周内有较强的保护作用。建议夏南牛犊牛口蹄疫首免时间在出生后40 d左右为宜。     

北京地区牛口蹄疫母源抗体水平及其疫苗免疫效果的调查研究

用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)方法对北京地区主要牛场进行口蹄疫(FMD)母源抗体、免前和免后抗体水平的调查，以探寻牛体内FMD抗体消长规律，制定合理的免疫程序，从而指导北京地区FMD的免疫。结果发现母源抗体水平在5日龄前小于1：32，5日龄开始上升，高水平抗体一直维持到75日龄，90日龄开始回落；加强免疫后抗体滴度大幅度升高，抗体效价离散度降低；用FMD疫苗免疫青年牛1次，21d和51d的抗体平均值都为1：256；成年母牛的分别为1：256和1：248；育成牛的分别为1：248和1：240。说明牛FMD首免的适宜日期为90日龄；适时的加强免疫有利于牛群抵抗FMD；FMD疫苗对育成牛、青年牛和成年母牛都有理想的免疫效果，对青年牛的免疫效果最好。     

DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR对多能基因及甲基化相关基因在徒手克隆胚胎中表达模式的影响

本试验通过实时荧光定量PCR方法对多能基因Oct4和Nanog及DNA甲基化相关基因Dnmt1和Tets在徒手克隆（handmade cloning,HMC）胚胎中的表达模式进行初步研究,并探讨5-Aza-CdR处理重构胚对这些基因表达模式的影响。结果显示,Oct4、Nanog和Tet3的表达在2细胞时期达到顶峰,Dnmt1和Tet2基因的表达随HMC胚胎发育而下降,而Tet1基因随HMC胚胎发育表达上升。使用5-Aza-CdR处理重构胚没有改变Oct4、Tet1和Tet3基因的表达模式,使Nanog基因在胚胎发育初期表达增加,Dnmt1和Tet2基因在胚胎发育初期表达降低。研究初步确立了Oct4、Nanog、Dnmt1和Tets基因在HMC胚胎的表达模式,5-Aza-CdR对重构胚的处理可对HMC胚胎的甲基化模式产生影响。     

牛体外受精胚胎早期发育过程中基因差异表达的研究

本研究旨在筛选牛体外受精胚胎早期发育差异表达基因,并进行差异表达分析。选取牛卵母细胞、体外受精8细胞期和囊胚期胚胎为试验材料,进行mRNA差异表达研究。初步克隆出4个牛卵母细胞和早期胚胎发育不同阶段差异表达的基因,同源性分析显示,它们分别与高移动样蛋白盒结构域4基因(HMGXB4)、热休克蛋白40亚家族C成员8基因(Dnajc8)、突触膜胞吐调节2基因(RI MS2)和核糖体蛋白L31基因(RPL31)高度同源。RT-PCR检测验证,HMGXB4、Dnajc8、RI MS2和RPL31在牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。     

牛胚胎细胞克隆研究中存在的问题及产业化前景展望

基于现阶段细胞核移植技术产业化可能性研究的进展,本文重点对牛胚胎细胞核移植技术的研究效率、影响因素、存在问题和产业化前景进行了前瞻性的综述。     

Taqman荧光PCR法检测肉制品中牛源性成分及定量研究

本研究通过以牛线粒体保守基因序列设计的特异性引物和探针,建立了肉制品中牛源性成分Taqman荧光PCR检测方法,并对方法的特异性、灵敏度和稳定性进行了评价;通过模拟浓度标准曲线,完成了对牛源性成分的相对定量检测。结果显示,本方法具有特异性强、灵敏度高(检出限为0.001%)的特点,适用于肉制品中牛源性成分及含量的快速检测。     

应用间接ELISA和AGID检测雏鸡血清与卵黄中禽流感母源抗体的研究

作者对来自3个养鸡场父母代种鸡进行过禽流感H5亚型灭活苗紧急免疫接种的3批次共251只1日龄雏鸡,应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）与琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）进行了血清与卵黄中禽流感母源抗体符合性的比较试验。试验结果表明：应用ELISA法检测1日龄雏鸡卵黄中禽流感母源抗体快速、简易、准确、敏感、检出率高,适用于口岸检疫、国内引种检疫及疫情监测等方面。     

幼兔血清中兔出血症母源抗体的动态变化及其病毒人工感染幼兔的研究

幼兔血清中兔出血症母源抗体的动态变化及其病毒人工感染幼兔的研究郭明章，董亚芳，玉启明，薛家宾（江苏省农科院畜牧兽医所南京，２１００１４）兔出血症是家兔的一种急性传染病，其发病突然，潜伏期短，传染性强，发病率和致死率极高，故危害很大。多年来疫苗免疫接种...     

UPLC-MS/MS检测七种动物源食品中四环素类药物残留量的研究

研究并优化了七种不同动物源食品中四环素、土霉素、金霉素、多西环素残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。选用Na2EDTA-Mc Ilvaine缓冲溶液作为提取液,超声提取七种动物源食品中四环素类残留,C18固相萃取小柱净化,脱溶剂后用甲醇水溶解,在超高效液相色谱-串联质谱上进行检测。结果显示,猪肉、鸡肉、鸡蛋、鱼肉、牛奶中四环素类药物残留的最低定量限(LOQ)为10μg/kg,猪肾、猪肝最低定量限(LOQ)为20μg/kg,在定量限到2倍最大残留限量(MRL)的添加范围内,回收率为75%±25%,RSD10%,可以满足农业部235号公告的要求。     

LC-MS/MS法同时测定动物源性食品中甲基睾丸酮和己烯雌酚的方法研究

在研究了甲基睾丸酮和己烯雌酚的国内外检测进展的基础上,成功建立用甲醇提取样品,LC—Alumina—A固相萃取柱净化萃取液,使用C18液相色谱柱,甲醇＋5mmol／L乙酸铵（pH=4．5）=75＋25（V／V）作为流动相,液相色谱一串联质谱进行多反应监测同时检测甲基睾丸酮和己烯雌酚雄雌两性激素类药物残留的高效液相色谱一串联质谱检测方法。在1．00～500μg/L浓度范围内,甲基睾丸酮和己烯雌酚的响应值与浓度呈线性关系,相关系数（r）均大于0．999。方法检出限可达0．5μg／kg。研究表明,该方法适用于鸡鸭猪肉、虾肉、鸡猪肝脏等动物源性食品。     

牛肌肉中阿维菌素类药物残留的免疫亲和色谱—高效液相色谱荧光检测方法的研究简

本研究旨在建立以免疫亲和色谱（IAC）柱为净化手段的高效液相色谱荧光检测方法（HPLC-FLD）,可同时检测牛肌肉组织中的阿维菌素、伊维菌素、多拉菌素和埃普里诺菌素残留。样品用甲醇提取,IAC柱净化,以乙酸酐—甲基咪唑的乙腈溶液作衍生化试剂,96 ℃条件下,完全衍生化100 min。在5、10、50和100 ng/g添加水平下,牛肌肉组织中4种药物添加回收率为77.3%～119.5％,变异系数为1.5%～18.9％,方法的检测限为0.8 ng/g。该方法可用于检测牛肌肉组织中的阿维菌素类药物残留。