不同方法提取银杏叶片总RNA及RT-PCR

以银杏叶片为材料,分别采用CTAB法、SDS法和TRIzol法提取银杏叶片总RNA.结果表明:CTAB法、SDS法所提取的RNA经电泳检测,28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3务带清晰,RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致,说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRIzol法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带.CTAB法和SDS法适于富含多糖和多酚等物质的植物总RNA提取.     

适合RT-PCR的苹果芽RNA快速提取方法研究

[目的]从苹果单芽中高效、快速提取RNA,为后续分子生物学研究奠定基础。[方法]分别以苹果品种新红星、嘎拉和富士的单芽为材料,用改良SDS法提取RNA,并经过甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和RT—PCR检测RNA质量。[结果]研究出一种高效、快速的苹果单芽RNA提取方法,该方法能在2．5h内得到完整的RNA,经RT—PCR检验,能获得理想的目的片段。[结论]该方法稳定可靠,适合苹果单芽RNA提取。     

芍药芽总RNA提取方法的研究

以处于休眠和解除休眠时期的芍药芽为试验材料,采用改良CTAB法、Trizol法和EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取其总RNA,通过核酸蛋白仪、琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR检测所提总RNA样品的品质。结果表明,Trizol法没有提取到芍药芽总RNA;EASYspin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取的总RNA浓度太低,无法满足下一步试验的要求;改良CTAB法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28S rRNA亮度约是18S rRNA的2倍,且无降解现象。以改良的CTAB法提取的总RNA为模板进行内参Actin扩增,得到的条带清晰,与目的片段大小一致,进一步证明此方法提取的总RNA能够满足后续试验的要求。     

改良CTAB法提取核桃总RNA试验

从植物组织中提取高质量的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础。不同植物的组织由于组成成分的差别,其RNA的提取有不同的难点。本试验针对核桃嫩叶内含物复杂的典型特点,在对比各种提取方法的特点及总结他人研究的基础上改良了CTAB法。此方法提取的核桃嫩叶总RNA的电泳结果可见清晰完整的条带,表明改良CTAB法能有效去除多糖和多酚以及色素等次生代谢物的污染,提取RNA纯度较高、完整性好,易于进行RT-PCR和cDNA文库的构建。此方法简单易行而且所用试剂成本较低。     

核桃叶片总RNA提取方法的比较研究

通过对比Trizol、EASYspin和Qiagen 3种试剂盒提取方法,探讨适合核桃叶片总RNA提取的有效方法。结果表明EASYspin试剂盒提取的RNA纯度较高、完整性好,试验用时较短,且试剂盒成本较低。     

鸡脂肪组织总RNA提取方法的优化和RT-PCR检测

提取完整的RNA是基因表达分析中的基础,但由于脂肪组织含有大量的油脂,所以从脂肪组织中提取高质量的RNA有一定的困难。在本研究中,报道了经过优化TRIzol试剂操作程序成功地从肉鸡脂肪中分离出了完整、高质量、纯度好的总RNA。用该方法提取的RNA显示清晰的28S、18S和5S三条带,OD260/OD280均值为1.893,浓度均值为263μg/mL。保温试验与RT-PCR扩增鸡LPL和GAPDH基因的分析结果也证明了所提取的总RNA质量较高。     

核桃胚营养代谢盛期总RNA提取方法研究

核桃是21世纪的超级食品.对核桃胚总RNA的提取是开展核桃胚发育和代谢分子生物学研究的基础环节.本试验针对核桃营养代谢盛期胚的特点,通过对改进的CTAB法、常规的CTAB法、TRIZOL法和通用植物总RNA提取试剂盒(Bioteke)四种不同总RNA提取方法的比较与分析,表明采用改良CTAB法提取的总RNA完整性较其他方法好,28 S、18 S、5 S条带清晰无明显降解,OD260/OD280值为1.875,无蛋白质污染,易于进行RT-PCR和cDNA的合成,是核桃胚营养代谢盛期的总RNA提取的有效方法.     

辣椒黄瓜花叶病毒RNA提取及RT-PCR体系建立

以感染黄瓜花叶病毒病的辣椒叶片为材料,采用改进的Trizol试剂法提取病毒RNA.利用黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因序列设计特异引物进行检测,摸索适宜的RT-PCR体系.结果表明.改进的Trizol试剂法能获得较高质量和产量的病毒RNA,并能稳定地进行规模化检测.     

银杏总RNA的提取

进行了CTAB和异硫氰酸胍两种不同的提取方法提取银杏RNA的研究。结果表明,两种方法均可以从银杏叶片中提取RNA,其中CTAB法可以较好地去除酚类物质和多糖对RNA的影响,提取的RNA纯度较高,而异硫氰酸胍提取RNA产率低,同时存在不同程度的降解。     

青海核桃适宜芽接时间研究

经过不同时间芽接试验发现,6月20日-7月10日,无论是当年生长量还是成活率都明显高于其它时间,可以作为适宜我省核桃芽接的适宜时间。     

北方核桃芽接技术改良研究

[目的]改变核桃嫁接成本居高不下的现状,拟通过技术手段降低苗木繁育成本。[方法]采用方块芽接方法,分析砧木处理和剪砧时期对嫁接核桃生长状况和成本的影响。[结果]平茬的成活率高于不平茬的成活率,但可嫁接比例较不平茬的低了9个百分点,且平茬处理的成本略高于不平茬处理的成本;不同剪砧时期造成的成本差异十分明显,嫁接后15 d剪砧成本是嫁接后1 d剪砧成本的5倍。[结论]砧木不平茬可令苗木管理简单方便,虽成活率有所降低,但总体成本低;嫁接后嫁接口上部砧木去除时期越早越好,嫁接后5 d内剪除,不仅可提高苗木质量,还会大幅降低苗木管理成本。     

北方核桃芽接技术改良的研究

[目的]改变核桃嫁接成本居高不下的现状,拟通过技术手段降低苗木繁育成本。[方法]采用方块芽接方法以,分析砧木处理和剪砧时期对嫁接核桃生长状况和成本的影响。[结果]平茬的成活率高于不平茬的成活率,但可嫁接比例较不平茬的低了9个百分点,且平茬处理成本略高于不平茬处理的成本;不同剪砧时期造成的成本差异十分明显,嫁接后15 d剪砧成本是嫁接后1d剪砧成本的5倍。[结论]砧木不平茬可令苗木管理简单方便,虽成活率有所降低,但总体成本低;嫁接后嫁接口上部砧木去除时期越早越好,嫁接后5 d内剪除同,不仅可以提高苗木质量,还会大幅降低苗木管理成本。     

核桃大树芽接对树冠恢复、主干感病及产量的影响

在非目的品种核桃大树上利用方块形芽接方法,探求与核桃树地径相适应的预留橛数和嫁接芽数,以期为核桃生产中的大树芽接技术提供操作依据。在相同肥力地块选择相同地径水平的核桃树作 为砧木,设置单因素4 处理试验。第1 年短截骨干枝,第2 年在新生嫩枝上采用方块形芽接技术嫁接目的品种芽块。接后从第2 年开始,连续3 年调查核桃树冠直径恢复情况、主干感染腐烂病的情况及单位面积产量。最终总结出合理的留橛数和嫁接芽数。调查结果表明,在一定范围内预留橛数越多,嫁接芽数越多,树冠恢复就越快,主干感病越轻,产量恢复也越快。对于地径在20~25 cm内的核桃大树应预留16 个树橛,嫁接40 个芽为宜。试验探求了一套成活率高,树冠及产量恢复较快,且树干不易感病的核桃大树芽接技术,为核桃生产中的大树芽接提供参考依据。     

核桃仁种皮中多酚的提取工艺研究

核桃仁种皮中含有抗氧化性的多酚类物质,为探讨乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对核桃仁种皮中多酚提取效果的影响,试验运用正交设计对核桃仁种皮中多酚的提取条件进行了优化。确定最佳工艺条件为:60%的乙醇,料液比为1∶8,提取时间30 min,提取温度55℃,核桃仁种皮的多酚粗提得率为5.71 mg.g-1。     

核桃油的超临界CO_2萃取研究

[目的]探讨采用超临界CO2萃取技术萃取核桃油的最佳工艺条件。[方法]以新疆产的核桃为原料,去皮后经过液氮冻干处理或烘干处理,然后采用超临界CO2萃取技术萃取核桃油,研究不同萃取时间对核桃油产率的影响,确定最佳工艺条件,并采用气相色谱仪对核桃油的脂肪酸组成进行测定与分析。[结果]经试验确定的适宜工艺条件为:原料去皮液氮冻干,萃取温度40℃,萃取压力31MPa,萃取时间4.5 h,分离温度50℃。在此条件下获得的核桃油产率为59.26%。经过液氮处理的原料得到的油颜色比未经液氮处理的浅,且核桃油产率也较高。由气相色谱分析得知,核桃油产品中亚油酸含量为59.83%,油酸含量为21.65%,亚麻酸含量为10.95%。[结论]采用超临界CO2萃取技术所得的核桃油体澄清透亮,呈浅黄色。