巴西橡胶树树皮结构特征与胶乳产量的相关性

采用细胞学研究技术,以7个高产的橡胶树品种、19份低产的1981’IRRDB种质和5个高比区的橡胶树无性系为材料,分析巴西橡胶树树皮结构特征与胶乳产量的相关性。结果表明,在高产品种和低产种质间、高比区无性系间以及同一无性系的植株间,有功能次生韧皮部中的乳管列数目与有功能次生韧皮部厚度的比值都与胶乳产量显著正相关。最内层石细胞团以内的次生韧皮部中乳管列数目与次生韧皮部厚度的比值在高产品种和低产种质间以及在高比区不同无性系间与胶乳产量显著正相关,但在同一无性系的植株间与胶乳产量没有相关性。     

巴西橡胶树果皮及种皮的发育

描述巴西橡胶树果皮和种皮在各个不同发育时期的解剖结构。（１）授粉后约１２０ｄ,果皮和种皮发育成熟,（２）果皮由于子房壁形成,授粉３０ｄ后,果皮可区分为外果皮,中果皮和内果皮三层结构,外果皮由表皮和表皮下７－８层绿色扁平细胞构成,中果皮由等径薄壁细胞构成,其上分布维管束及密集成群的初生乳管,内果皮由三层走向不同的长形细胞组成,授粉后６０～７０ｄ,内果皮细胞开始木质化果实成熟时,外中果皮革质而干燥,内     

巴西橡胶树木质部和树皮比较蛋白质组学研究

采用改进酚抽法提取巴西橡胶树木质部和树皮蛋白。结果显示,在双向电泳图谱上可分辨500多个蛋白点。木质部和树皮的蛋白表达谱存在明显差异。选取48个差异蛋白点或者高丰度蛋白进行MALDI-TOF MS质谱鉴定,成功鉴定出26个蛋白,其中,与氢氰酸合成相关的两个酶是树皮特有的,而半胱氨酸转甲基酶是木质部的高丰度蛋白。     

巴西橡胶树割胶树皮伤口的组织学和组织化学的变化

用光学显微镜技术和组织化学方法研究了巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell．Arg．）割胶树皮伤口的变化，并测定了乳管中重要的防卫蛋白质几丁质酶在树皮伤口的积累和消失。结果表明，割胶诱导割口树皮组织产生伤害反应使割口得到保护。割口树皮依次出现3种防卫机制：（1）乳管预先形成的物理和化学防卫物质（橡胶粒子和包括几丁质酶在内的防卫蛋白质）在树皮伤口表面和乳管伤口末端的积累；（2）伤口周围的组织形成的化学防卫物质单宁、木质素和木栓质等；（3）在较长时间停止割胶（如冬季停割）时形成防卫结构创伤周皮。前两种防卫机制的作用是暂时的，只有最后创伤周形成时，树皮伤口才能得到充分有效的保护。     

巴西橡胶树大孢子发生和胚囊发育过程的研究

用石蜡连续切片,观察巴西橡胶树胚珠和大孢子发生、胚囊发育过程,结果如下:1.倒生胚珠,胚珠原基在雌蕊心皮来完全愈合成完整子房前产生。珠被发生于造孢细胞末期或大孢子母细胞早期。至二核胚囊期,两层珠被顶部合拢包围珠心。2.具厚珠心,其顶部形成珠心喙;在珠孔上方有珠孔塞,它起源于胚珠附近的胎座组织。2.胚囊发育属于蓼型。发育过程一些明显的变化是:(1)细胞逐渐液泡化;(2)从单核胚囊开始,细胞核连续三次分裂、分化、定位和产生新壁形成七细胞胚囊;(3)出现极性,极性的表现在大孢子母细胞期就开始。4.一些品系的两性花中,雌、雄生殖细胞问各发育阶段有明显的对应关系。     

一种测定巴西橡胶树树皮中过氧化氢含量的方法

研究植物体内 H2O2 的含量变化有助于确认植物提高非生物胁迫耐性的生物技术策略。Ti(Ⅳ)-PAR-H2O2 比色 法灵敏度高、特异性强、稳定性好,广泛用于植物 H2O2 测定,但不同研究所用的反应条件不一致。在本研究中,系统 优化了 Ti(Ⅳ)-PAR-H2O2 比色法的反应条件,并比较了丙酮提取法和 TCA 提取法对橡胶树萌条韧皮部 H2O2 的提取效果。 结果表明,丙酮提取法稳定性差,TCA 提取法稳定性好。本研究报道了一种简单、快速的测定橡胶树树皮 H2O2 的方法, 为进一步研究橡胶树中 H2O2 的生理功能打下良好基础。     

一种测定巴西橡胶树树皮中过氧化氢含量的方法

研究植物体内 H2O2 的含量变化有助于确认植物提高非生物胁迫耐性的生物技术策略。Ti(Ⅳ)-PAR-H2O2 比色法灵敏度高、特异性强、稳定性好,广泛用于植物 H2O2 测定,但不同研究所用的反应条件不一致。在本研究中,系统优化了 Ti(Ⅳ)-PAR-H2O2 比色法的反应条件,并比较了丙酮提取法和 TCA 提取法对橡胶树萌条韧皮部 H2O2 的提取效果。结果表明,丙酮提取法稳定性差,TCA 提取法稳定性好。本研究报道了一种简单、快速的测定橡胶树树皮 H2O2 的方法,为进一步研究橡胶树中 H2O2 的生理功能打下良好基础。     

巴西橡胶树乳管分化的研究

巴西橡胶树的乳管组织，是决定橡胶产量的是最重要的结构成份。人们一直从两个方面来研究乳管分化，即乳管分化的细胞学和植株内外固子对乳管分化的影响。我们认为，在这些研究中，最值得注意的结果，是采胶对乳管分化的影响。有证据表明，排胶促进乳管分化和原有全部成熟乳管的死亡或去除导致形成密集乳管。据此，我们假定在已有的成熟乳管中存在有抑制将来乳管分化的物质。我们相信，这一假定是深入研究这分化的一个可能的途径。     

巴西橡胶树种子发育过程中淀粉积累动态

对橡胶种子发育过程中各构成部分淀 的积累和消失进行显微观察，结果如下：（1）在大孢子母细胞早期胚珠组织尚未出现淀粉时，子房壁外层细胞就出现淀粉粒，曾一度随着组织的生长淀粉的积累迅速增加；到大孢子母细胞晚期，内球 球心组织开始淀粉积累时，子房壁淀粉含量迅速下降。（2）外球被淀粉积累开始比珠心与内珠被虫，但淀粉含量增长平缓，一直处于较低矮的水平，至4－细胞原胚期淀粉已全部消失，与受精作用和胚的发育关系很小。（3）内珠被淀粉的积累呈现3个高峰期，分别出现在胚囊成熟期，合子休眠期和原胚发育期，为受精作用、合子分裂和胚器官分化提供必需的养料，它们之间密切。（4）胚成熟期，尤其受精作用前夕，珠心淀粉积累达到高峰，细胞中充满，受精作用后球心淀粉含量迅速下降，至授粉后30d全部消失。合子分裂经球形胚到心形胚阶段近2个月期间珠心一直没有淀粉积累，至胚胎发育后期器官分化阶段，球心才重新迅速积累淀粉并最终发育形成外胚乳。     

橡胶树无性系产胶能力株间一致性分析

橡胶树无性系株间产量存在明显差异是导致产量育种选择周期长的主要原因之一。橡胶树的产量主要取决于产胶能力和排胶能力2个因素。树干树皮中的次生乳管数量及乳管细胞内的天然橡胶生物合成效率与产胶能力直接相关。从次生乳管分化和橡胶合成关键因子基因表达2个层面对无性系株间产胶能力的一致性进行分析。结果表明:树皮最内石细胞群以内次生乳管列数与次生韧皮部厚度的比值具有品系特征;在同一品系中,该比值的株间差异小,表现出良好的一致性。8 a割龄大树该比值的株间一致性较3 a幼树差,而在3 a幼树中,树高40 cm处该比值的株间一致性比树高100 cm处更好。因此,以3 a幼树树高40 cm处的该比值作为产量育种早期筛选标记较合适。胶乳中MYC1、HRT2基因的表达量在割胶后上调,并且具有品系特征,但这2个基因的表达量在株间的一致性较差,故在产量育种早期筛选中只能起到辅助作用。     

胶园土壤化学肥力演变及与橡胶树营养关系的研究

对海南橡胶园土壤化学肥力的演变及土壤养分含量与立地橡胶树叶片养分含量的相互关系进行研究。结果表明:我国胶园土壤植胶50多年后土壤肥力发生了较大的变化,其中有机质、全N、速效K含量有较大程度的下降,速效P含量则有降有增,总体土壤肥力下降。在植胶早期,植胶区土壤养分含量与叶片养分含量之间有极显著正相关性,而且土壤养分含量愈缺乏的地区,相关性愈明显。但随着时间的推移,土壤养分含量与立地胶树叶片养分含量的相关程度越来越小,目前近乎无显著相关性。由于橡胶树施肥以局部的穴施为主,加上有许多胶园修建梯田和环山行,较难采集有代表性的土壤,因此土壤分析结果只能作参考。     

FracRoot模型在橡胶树根系研究上的应用初探

以30年生的3个品种的橡胶树为参试材料建立根系模型。测量根系拓扑、分枝规律、连结长度、连结直径和根系分枝角度,将这些数据应用于FracRoot模型,对橡胶树根系分段数量、总长度和生物量进行预测。结果表明,根段的逐渐变细对参数α值有很大影响,FracRoot模型轻微的低估了RRIM600和PR107中根系的分段数量和总长度,高估了GT1分段数量和总长度;过高的估计了所有物种的单一根系总的生物量;过低预测根系的水平分布,而过高的估计了垂直分布。     

海南橡胶树丛枝菌根真菌调查

从海南11个市/县的21个橡胶种植园采集的24份橡胶根际土样中,初步鉴定出分属于5个属的31种丛枝菌根真菌,其中,球囊霉属Glomus有16种,已确定6种;无梗囊霉属Acaulospora 10种,已确定5种;内养囊霉属Entrophospora 2种,已确定种1种;原囊霉属Archaeospora 1种,为确定种;盾巨孢囊霉属Scutellospora 2种,已确定1种。对13种已确定种进行了形态描述。结果表明球囊霉属Glomus是海南橡胶树根际丛枝菌根真菌分离频率最高属,蜜色无梗囊霉(Acaulospora mellea)是分离频率最高种。     

橡胶树小茎绿色芽条增殖技术研究

温室内使用籽苗芽接苗为定植材料,采用托盘根控方式培育小茎绿色芽条,单位面积芽片产量可达1 136.4万片/hm2,所生产芽条茎小且均匀,合适进行籽苗芽接,且由于芽条生产受外界影响小,可周年供应小茎芽条,能有效延长籽苗芽接生产期。     

橡胶树三倍体种质创制及生物学鉴定

以人工诱导的橡胶树三倍体种质为材料,通过形态学、细胞学和分子生物学等方法对其进行鉴定.结果表明:橡胶树通过有性阶段诱导产生的2n配子与正常配子(1n)杂交可获得纯合三倍体,其无性繁殖后代倍性表现稳定,体细胞染色体数为2n=3x=54,三倍体细胞百分率达91.5％;RAPD及过氧化物同工酶分析表明,该橡胶树三倍体与热研7-33-97、RRIM600的亲缘关系较近,在分子水平存在较大的相似性,可判断热研7-33-97、RRIM600为该橡胶树三倍体杂交亲本来源.     

橡胶树褐根病菌的分子检测

利用褐根病菌的一对特异性引物G1F/G1R,对不同来源橡胶树褐根病菌菌株的r DNA-ITS区进行PCR扩增,对发病组织进行分子检测,并构建橡胶树褐根病菌系统发育树。结果表明:10株不同来源橡胶树褐根病菌菌株DNA均能扩增出一条653 bp的特异性片段,而橡胶树红根病菌、紫根病菌、臭根病菌、白根病菌和清水对照均无扩增条带。发病组织检测结果表明,该引物能特异性检测到橡胶树褐根病菌的存在。引物对基因组DNA检测灵敏度为100 ag/μL。基于r DNA-ITS系统发育分析结果表明,供试菌株与Gen Bank中的菌株KF233592、KM079591聚在同一分支上,其亲缘关系最近,均属于Phellinus noxius。     

利用电激共转化法转化橡胶树悬浮细胞的初步研究

利用电激转化法对橡胶树悬浮细胞系进行转化,初步确定卡那霉素的筛选浓度、共转化的实验条件。通过电激共转化法将NPTII、GUS、EGFP和Hb CBF1基因成功导入到橡胶树悬浮细胞并整合到基因组中。通过卡那霉素抗性筛选、GFP荧光观察和PCR验证等方法,确定外源DNA片段转化成功。共筛选得到95个抗性愈伤组织,其中9个愈伤组织经过PCR验证确定整合有外源DNA片段,1个愈伤组织共转化有NPTII和GUS基因。此结果表明电激共转化法可成功应用于橡胶树悬浮细胞转化操作。     

不同品种橡胶幼树叶片微量元素含量差异研究

以7个橡胶树品种1年生幼树为研究对象,研究橡胶幼树叶片微量元素(铁、锰、铜、锌、硼)含量变化规律,并分析橡胶树产量水平与微量元素含量的相关性。结果表明:不同品种橡胶幼树叶片中,锰含量表现出随月份而逐渐增加的趋势,但铁、铜、锌、硼含量变化规律表现不一致。叶片铁、锰、铜、锌、硼含量较高的品种分别为‘粤390-1’‘热研7-33-97’‘热研8-79’‘热垦525’和‘粤390-1’,不同品种橡胶树叶片微量元素含量顺序均为:锰铁硼锌铜。橡胶树产量水平与叶片锌含量达极显著正相关(r=0.87),与叶片硼含量达显著负相关(r=-0.80)。     

橡胶树HbEBP1蛋白亚细胞定位初步研究

利用融合PCR法构建HbEBP1基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体,成功转化拟南芥,借助激光共聚焦显微镜检测HbEBP1-EGFP融合蛋白在转基因植株根细胞中的表达及分布.结果显示:在转基因植株根中观察到强烈荧光信号,并分布于细胞质与细胞核中.结果证实了HbEBP1蛋白同时定位于细胞质与细胞核中.