从白羽王鸽的血液中提取基因组DNA方法的比较研究

禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。     

斑马鱼基因组DNA提取方法在蜜蜂上的尝试

基因组DNA的提取是分子生物学研究中不可缺少的一项内容.随着蜜蜂分子生物学的发展,快速高效地提取适合于实验操作的蜜蜂基因组DNA成为各项研究的基础.介绍了一种简便快速提取蜜蜂基因组DNA的方法,可满足基本的分子生物学实验要求.     

快速提取病毒核酸用于PCR或RT-PCR

PCR或RT—PCR因其操作简便快速、灵敏度高已越来越广泛的应用到病毒核酸的检测中，但其检测效率在很大程度上受到核酸提取速度和质量的影响。经典的病毒核酸提取方法主要包括变性剂裂解、蛋白酶K处理、有机溶剂抽提、乙醇或异戊醇沉淀等操作。众多的步骤和多次的转移操作以及在每个步骤上消耗的时间往往会降低核酸提取的效率。本文介绍了一种改进的异硫氰酸胍法，经多次提取鸭瘟疱疹病毒（Duck plague herpesvirus，DPV）的基因组DNA和鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus，DHV）的基因组RNA，显示出该法具有简单快速、安全可靠、低成本和高效率的特点。     

牛基因组DNA两种提取方法的比较研究

研究哺乳动物基因组DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较，水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA的方法。通过电泳分析和PCR扩增检测了所提取基因组DNA的完整性、可行性。检测时采用3对引物对2种方法提取的DNA进行了PCR扩增，同时对冷冻保存的基因组DNA也进行了扩增检测。结果表明：水煮法提取基因组DNA是一种快速、简便、经济、高效的方法。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较

为选择适合鸡全血DNA提取的方法,满足鸡育种中基因检测对DNA的要求,试验研究了酚-氯仿、试剂盒和优化盐析法提取鸡全血DNA。优化盐析法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,优化盐析法所得DNA的纯度OD_(260)/OD_(280)达1.855±0.036,所提DNA质量较好,利用DNA样本为模板进行PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿、试剂盒的方法相比,优化盐析法节约了时间和成本,所需仪器简单,是一种较好的提取鸡全血DNA的方法,适合生产中大批量鸡血液基因组DNA提取。     

16SrDNA PCR法对实验用小鼠细菌感染的检测试验

通过合成细菌16SrDNA高度保守区引物，采用PCR法对16种标准菌株DNA和小鼠 的基因组DNA、人基因组DNA、乙肝病毒、巨细胞病毒进行扩增，PCR法结果表明：细菌具有371bp 扩增产物，与小鼠基因组DNA、人基因组DNA、巨细胞病毒和乙肝病毒无交叉阳性反应。PCR法最低能检测100fg大肠埃希菌DNA。检测实验动物细菌感染，具有快速、特异性和敏感性高的特点。本研究证实：16SrDNA PCR法能够快速，特异地检测实验动物常见细菌感染，具敏感性高。     

一种禽类血液基因组DNA高效提取通用方法的建立

为了建立一种适合禽类血液的廉价、高效、通用的基因组DNA提取方法,试验采用鸡、鸭、鹅、鸽、火鸡、麻雀6种禽类血液为材料,提取的禽类血液DNA经微量分光光度计分析、基因组DNA凝胶成像分析以及PCR扩增效果检测。结果表明:提取的6种禽类血液DNA质量较好(OD260/OD280值范围为1.80~1.84,OD260/OD230值范围为2.21~2.30),基因组DNA电泳主条带和PCR扩增产物条带清晰、整齐、无拖带。说明本方法能够完全适用于大批量禽类血液基因组DNA的提取,且DNA纯度较好,满足后续相关分子生物学试验要求。     

一种快速高效提取柑橘黄龙病植物样品DNA的方法

为快速获得高质量的柑橘黄龙病（HLB）植物样品DNA,本研究在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,建立了一种简便、快速提取HLB植物样品DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB提取法相比,该方法所需时间短,1~2 h即可完成整个提取过程,获得的HLB植物样品DNA质量高、产量多。同时比较了三种方法制备模板时黄龙病病原菌和其他柑橘病原菌的PCR检出率,CTAB简化法和传统CTAB法检出率一致,试剂盒稍低,表明本研究建立的CTAB简化法可用于柑橘DNA病害PCR检测DNA模板的制备。本研究研发的HLB植物样品DNA提取方法优势明显,适用于大量病样的快速检测。     

磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究

为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。     

小鼠基因组DNA提取方法比较研究

脱氧核糖核酸(DNA)作为大部分有机体和病毒的遗传物质,与生物的遗传与变异息息相关。很多研究都是基于核酸分析的基础开展的,对核酸的纯度要求很高。本研究采用4种常用方法提取小鼠基因组DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明,酚/氯仿抽提法获得的DNA纯度较好,无RNA污染,但有少许蛋白质未剔除;试剂盒法提取到的DNA纯度高、核酸浓度大且无污染,但片段较小,可进行常规的PCR等核酸水平研究。     

桑天牛卵啮小蜂基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

桑天牛卵啮小蜂是抑制桑天牛的有效天敌。为使天敌能大量人工繁殖,从分子生物学角度对单头桑天牛卵啮小蜂基因组DNA的提取方法及RAPD反应条件进行了探索。结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR扩增分析。在25μL反应体系中,RAPD分析的优化反应体系为：1．5mmol/L Mg~(2+)、2μL的dNTPs(2．5mmol/L)、320nmol/L随机引物、80ng模板DNA、0．8U TaqDNA聚合酶。     

提取东北虎毛发DNA两种方法的比较研究

研究东北虎毛发DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较。水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白质变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA。通过测定OD值并计算浓度和纯度，同时进行琼脂糖电泳检测、PCR扩增和PAGE电泳检测，分析2种方法提取东北虎毛发DNA的质量差异。结果表明：水煮法提取东北虎毛发中DNA是一种快捷、简便、经济、高效的方法。     

偃麦草种质资源遗传多样性的RAPD分析

通过对DNA提取方法及RAPD反应体系进行探讨,建立了适应偃麦草基因组DNA提取的方法及优化的RAPD反应体系。在此基础上,依据Jaccard相似系数,采用UPGMA方法进行聚类,判定32份偃麦草种质材料间的亲缘关系及遗传多样性。结果表明:(1)改良常规CTAB法,即对样品先进行洗涤并提高CTAB含量到3%可提高偃麦草DNA的提取质量。(2)对100条随机引物进行筛选,共筛选出18条多态性高、重复性好的随机引物,以此对32份材料进行PCR扩增,共扩增出264条带,多态性条带为93.7%。(3)以遗传相似系数为依据,对32份偃麦草材料进行聚类分析,在相似系数为0.373处可将供试偃麦草种质资源划分为5大类群。     

特异PCR方法用于鸡的3种艾美耳球虫混合感染鉴别的研究

用单卵囊分离法获得的鸡的3种艾美耳球虫（每种各2株）卵囊：柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）、巨型艾美耳球虫（E．maxima）、堆型艾美耳球虫（E．acervulina）。经纯化、提取基因组DNA后，用报道的种特异引物做PCR扩增分析，以确定是否为纯种。结果发现这3种球虫均存在混合感染的情况。该结果为进一步研究这3种球虫奠定了基础，并说明特异PCR方法能够有效地、快速地鉴别球虫虫种。     

绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究

本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)染色体DNA的分离纯化

为了获取可供家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)单染色体测序的基础材料,通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分离家蚕微孢子虫CQ1株系的染色体DNA,随后切取含有目的染色体DNA条带的琼脂糖胶块,分别利用电洗脱法、柱式胶回收试剂盒法及玻璃奶胶回收试剂盒法进行染色体DNA的分离纯化实验。结果显示3种方法均能回收到目的染色体DNA,但分离纯化的效率和样品质量存在差异:电洗脱法对胶块中的DNA损失较大,回收的染色体DNA含量低,而柱式胶回收试剂盒回收的染色体DNA断裂严重,因此这2种方法获得的样品质量均达不到染色体建库测序的要求;通过优化后的玻璃奶胶回收试剂盒法获得的染色体DNA相对完整且污染较少,质量检验分析133μL样品中的DNA质量浓度为8.495 ng/μL(DNA总量1.13μg),达到后续构建染色体测序文库的要求。玻璃奶胶回收试剂盒法不仅适用于家蚕微孢子虫染色体DNA的分离纯化,也可供基因组较小的物种制备单染色体建库测序材料参考。     

犬Ⅱ型腺病毒DNA的快速提取及限制性酶切分析

按常规方法培养大肾传代细胞(MDCK),待细胞长成单层后,以2%的量接种犬Ⅱ型腺病毒弱毒株(MV-CAV_2).当绝大多数细胞出现病变时(约35～40h),直接从感染细胞培养物中提取CAV_2 DNA.以该法提取CAV_2 DNA,不仅操作简便、耗费少,而且产量也比常规的先纯化病毒再提取DNA的方法高2～3倍.该法可普遍用于从感染细胞中提取与蛋白共价结合的所有病毒核酸.采用电泳洗脱法纯化上述CAV_2 DNA,以Eco RI、Bam HI、Pst I、Sac I、Nsi I和Sph I酶切,电泳分离,建立了该病毒DNA的6种限制性内切酶图谱.本实验结果为该病毒DNA的分子克隆奠定了基础.     

A polymerase chain reaction assay for the detection of Leptospira spp. in bovine semen.

A rapid and specific method for the detection of pathogenic Leptospira spp. in bovine semen using the polymerase chain reaction (PCR) is described. The primers used were derived from an EcoR1/BamH1 fragment that hybridized strongly to chromosomal DNA from the hardjobovis serovar. Three different extraction methods were evaluated in this study: phenol-chloroform extraction method, proteinase K (PK) in 1% SDS, followed by phenol-chloroform, and phenol-chloroform followed by 1% cetyltrimethylammonium bromide (CTAB). A PCR product of approximately 500 base pairs (bp) in length was obtained when DNA from pure Leptospira culture was used as a template for PCR, regardless of the DNA extraction method used. The product was consistent with that predicted from the gene sequence. However, in semen seeded in vitro, as well as in semen from infected bulls, a PCR product was obtained only when the leptospiral DNA was extracted from the specimen using the CTAB method. In contrast, other methods used for DNA extraction did not generate suitable templates for the PCR procedure. This is the first PCR protocol developed to detect Leptospira in bovine semen. The PCR protocol provided a direct and unequivocal demonstration that Leptospira can be detected in semen of infected animals. The CTAB method was also used successfully in detecting Leptospira in the urine of infected animals. The PCR procedure was shown to be more sensitive than either the fluorescent antibody test (FAT) or culture for detecting the organism in urine.     

适于滞育期蚕卵的基因组DNA提取方法

家蚕以卵滞育,蚕卵保存时间长,取样方便,但是DNA含量较低,抽提较为困难,利用不多。从处于滞育期(丙2胚子前)的蚕卵中快速高效地获取基因组DNA,对于提高家蚕研究效率具有实用价值。本试验对两种SDS法和一种CTAB法的抽提效果进行比较,结果表明SDS-II提取效果较好,单粒蚕卵提取基因组DNA即可用作PCR模板,5粒蚕卵获得DNA可以基本满足分子生物学研究需要。