樟子松无性系(GS1)胚性愈伤组织的初步诱导

本研究以樟子松无性系(GS1)为研究对象,探讨合子胚不同发育时期愈伤组织的诱导情况,探索不同培养基类型及不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响,初步建立体胚发生技术体系,为樟子松(GS1)体胚发生技术建立和获得植株再生提供一定基础。本研究对樟子松无性系(GS1)合子胚不同发育时期进行观察并进行不同时期、不同激素体胚诱导。樟子松无性系(GS1)合子胚形态变化可划分为9个阶段,将这9个阶段的合子胚分别接种到不同培养基上进行诱导。结果显示,DCR培养基比MS和LM培养基更适合GS1愈伤组织的诱导和生长。第7阶段的合子胚在DCR+2,4-D 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培养基上愈伤组织诱导率最高,在DCR+2,4-D 3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L培养基上胚性愈伤组织诱导率最高。诱导过程会产生两种类型的愈伤组织,分别为白色透明状的愈伤组织和淡黄褐色愈伤组织。经显微观察有两种结构愈伤组织,一种是近球形的薄壁细胞结构,为非胚性愈伤组织;另一类是由胚性细胞和胚柄细胞组成的胚性细胞团。樟子松无性系(GS1)合子胚第7阶段的合...     

低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生

选用低酚陆地棉无菌苗下胚轴为材料进行全固体组织培养,直接诱导获得了胚性愈伤组织,并进一步分化为再生植株.结果表明,激素是影响棉花直接体细胞胚胎发生的重要因素.MSB培养基中添加2,4-D有利于愈伤组织的形成,却不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基中添加IBA和BA也不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基附加适当浓度的IBA和KT能直接诱导出胚性愈伤组织.最适激素组合(1.0 mg/L IBA,0.5 mg/L KT)能使诱导棉花下胚轴产生大量胚性愈伤组织,并且在3个月内就可肉眼观察到不同发育时期的胚.MSB培养基中附加1.0 g/L谷氨酰胺和0.5 g/L天门冬酰胺有利于胚萌发成苗.本研究建立了简便高效的棉花直接体细胞胚胎发生和植株再生培养体系,从胚性愈伤组织诱导到植株再生约需5～6个月时间.     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

新疆棉花体细胞胚胎发生及植株再生

以新疆陆地棉主栽品种新陆早19号和新陆早23号下胚轴为外植体,通过对再生体系的研究,首次获得了胚性愈伤组织和再生植株.愈伤组织诱导以0.10 mg/L KT和0.10 mg/L2,4-D为最佳,KNO<,3>加倍有利于胚性愈伤组织形成,铺垫滤纸有利于胚状体的成熟和发达根系的产生.用此法,实验材料在6～8个月内即可获得大量再生苗.     

欧洲七叶树体细胞胚胎发生研究

以欧洲七叶树幼嫩叶片为外植体,在离体条件下成功诱导出体细胞胚胎(体胚).研究结果表明,诱导愈伤组织的适宜培养基是MS 2,4-D 2mg/L KT 0.2mg/L,MS BA 8mg/L NAA 1mg/L有利于胚性愈伤的诱导和增殖,添加ZT 2mg/L或BA 5mg/L和NAA 0.2mg/L 的MS培养基有利于体胚发育和成熟.     

高频体细胞胚胎发生的优异棉花种质材料筛选

棉花的体细胞胚胎发生严重依赖于其基因型,这大大限制了细胞融合与基因工程在棉花遗传改良上的应用.为了拓展棉花体胚发生的基因型来源,本实验选择不同基因型的优异棉花品种(系)为材料,利用MSB基本培养基筛选高频体细胞胚胎发生棉花材料.结果表明,在添加2,4-D (0.1 mg/L)和KT (0.1 mg/L)的MSB培养基上所有材料都能诱导出愈伤组织,但继代3～4次后仅有大铃棉和邯8959两个材料能分化出胚性愈伤组织.在添加IBA (0.5 mg/L)和KT (0.15 mg/L)的MSB培养基上能,大铃棉和邯8959的胚性愈伤能够高频萌发形成胚状体,每克胚性愈伤组织能形成10～25个胚状体,并再生出完整植株.本研究筛选出的优异棉花种质材料大铃棉和邯8959为棉花基因工程开拓了新的种质资源.     

2种甜玉米自交系幼胚再生体系的建立

本试验研究不同基因型、幼胚大小、培养基类型及培养基添加物对2种甜玉米(2-105和2-118)自交系幼胚愈伤及胚性愈伤组织诱导率的影响。结果表明,基因型、培养基类型、幼胚大小及不同浓度脯氨酸和2,4-D处理对愈伤及胚性愈伤诱导率影响差异均显著。2种基因型最适宜的基本培养基为N6培养基,且2-118的愈伤及胚性愈伤诱导率显著高于2-105。幼胚在1.5~2.0 mm时,2-105和2-118的愈伤及胚性愈伤诱导率均最高,分别在77%和51%以上。2-105和2-118在脯氨酸浓度分别为650 mg/L、750 mg/L时幼胚的愈伤及胚性愈伤诱导率最高,且显著高于其它2个水平。2种基因型在2.5 mg/L的2,4-D诱导下愈伤及胚性愈伤诱导率均最高,且均显著高于其它2个水平。本研究获得了2种甜玉米自交系的再生体系,为甜玉米遗传转化和分子育种提供基础。     

欧洲七叶树体细胞胚胎发生研究

以欧洲七叶树幼嫩叶片为外植体，在离体条件下成功诱导出体细胞胚胎(体胚)。研究结果表明，诱导愈伤组织的适宜培养基是MS 2，4-D 2mg／L KT0．2mg／L，MS BA 8mg／L NAA 1mg／L有利于胚性愈伤的诱导和增殖，添加ZT2mg／L或BA 5mg／L和NAA0．2mg／L的MS培养基有利于体胚发育和成熟。     

甜樱桃体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以甜樱桃红灯为材料,幼果用0.1%HgCl2进行消毒,在无菌条件下取出未成熟胚子叶进行诱导,在胚成苗后进行继代和生根培养。培养结果表明,以MS为基本培养基,在2,4-D为2.0 mg/L时培养基上胚性愈伤组织诱导率较高,为53.7%;愈伤组织经过数次继代后转移至MS附加6-BA 1.0 mg/L和NAA 0.1 mg/L培养基上可诱导体细胞胚的形成,诱导率可达81.0%.体细胞胚在合适的培养基上可继续生长和增殖。     

甘薯体细胞胚状体及其在脱毒、扩繁中的应用

通过甘薯徐薯18茎尖体细胞培养诱导胚性愈伤组织和胚状体,建立了体细胞无性系.胚性愈伤和胚状体诱导培养基为MS附加0.5～2.0mg/L 2,4-D、0.5mg/L NAA、0.1mg/L BA及100mg/L HL.研究结果表明:采用茎尖体细胞胚胎发生途径能够同时实现试管苗的深度脱毒及大幅度提高扩繁量,脱病毒率达95%,扩繁量达382.9倍.田间种植该脱病毒种苗能     

甘薯胚性细胞悬浮培养系的建立

地甘薯胚性细胞悬浮增减系的进行了研究。将１２个基因的长约０．５ｍｍ的茎尖培养在含有０．２ｍｇ／Ｌ或２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，形成了胚性愈伤组织。胚性愈伤组织的形成率因基因型和２，４－Ｄ深度不同而很大差异，为０－７５．７％。一方面，将胚性愈伤组织继续增减在含有２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，它们形成了处于各发育时期的体细胞胚。将具有体细胞胚的胚性愈伤组织转移到ＭＳ基本培养基上，体细胞胚发育成     

The role of nickel on somatic embryogenesis in Setaria italica L. in vitro

Nickel (0.13, 0.25, 0.5, 1.0 and 1.5 mg/l) increased the efficiency of somatic embryogenesis in leaf base and mesocotyl derived calli of Setaria italica. A lower concentration of nickel in the culture media promoted long-term maintenance of embryogenic calli that regenerated into plantlets. The plants obtained from embryogenic calli grown on Ni-containing medium showed tolerance to nickel. The growth of embryogenic callus was the maximum at 1.5 mg/l as compared to a lower or a higher concentration of Ni. Use of nickel may help in the induction of high frequency somatic embryogenesis in Setaria italica. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

Continuous Plant Regeneration from Established Embryogenic Cell Suspension Cultures of Italian Ryegrass and Tall Fescue

The suitability of different protocols was compared for entire plant regeneration by somatic embryogenesis, of the forage plants Lolium multiflorum Lam. (Italian ryegrass) and Festuca arundinacea Schreb. (tall fescue). In the first protocol, miniature embryos were used as starting material, while mature seeds were retained in the other two. Whichever the considered protocol, undifferentiated calli were produced on Murashige and Skoog MS medium supplemented with 2,4-D. The calli were subcultured in the dark on solid MS agar medium, containing 5 mg/1 2,4-D (protocol 2) or on solid MS medium followed by transfer to a rotated liquid MS medium with 2 mg/1 2,4-D (protocol 1). In these conditions, induction of somatic embryogenesis occurred, and whole plants were regenerated during a limited lapse of time, upon transfer in the light, to MS medium supplemented with BAP but devoid of 2,4-D. The simultaneous elimination of 2,4-D and transfer to light appeared essential for full regeneration of the plants. Using this characteristic, an additional step was added to a new protocol (protocol 3) in which microcalli, cultured on liquid MS medium containing 5 mg/1 2,4-D, were transferred to the same medium with 2 mg/1 2,4-D, in the dark. In these conditions, the suspensions kept their embryogenic potential for months. In all cases, plantlets were successfully transferred into the soil. An evaluation of the somaclonal variation potential of the plants issued from each protocol is now underway.     

油菜素内酯在棉花组织培养中的应用研究Ⅰ．油菜素内酯对陆地棉体细胞胚胎发生和根器官发生的影响

本文研究了ＢＲ及其与ＩＡＡ、２，４－Ｄ、ＫＴ和６－ＢＡ等配合使用对陆地棉愈伤组织诱导、继代、分化、体细胞胚胎和根器官发生的影响。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ能使陆地棉Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种分化产生胚性愈伤组织，并有效地保持该种愈伤组织的生活力和胚胎发生能力。ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ促进Ｃｏｋｅｒ２０１、３１２两品种体细胞胚胎发生，ＢＲ０．０１ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ０．０５ｍｇ／Ｌ能诱导所有供试品种产生疏松黄绿色愈伤组织，２，４－Ｄ用量逐步降低或除去后，一些品种便分化产生胚性愈伤组织或体细胞胚状体。另在ＢＲ与ＩＡＡ的某些组合中还观察到根器官的发生。     

新陆早42号体细胞胚发生和植株再生

 以新陆早33号为对照研究新疆主栽品种新陆早42号的体细胞胚胎发生。研究表明,所用4种激素组合均能有效诱导愈伤组织,但二者仅在经过IBA 1.0 mg·L^-1+KT 0.5 mg·L^-1和2,4-D 0.1 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1两种激素组合诱导初生愈伤后,才能胚胎发生。新陆早42号在IBA 1.0 mg·L^-1+KT 0.5 mg·L^-1培养基上46 d就开始胚胎发生;新陆早33号则不能直接胚胎发生,需继代到MSBP培养基上培养48 d才有胚胎发生。经2,4-D 0.1 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1组合培养的愈伤均需要继代到MSBP培养基上培养才能胚胎发生,新陆早42号和新陆早33号胚胎发生的最早时间分别是71 d和81 d。胚性愈伤在铺有滤纸的MSBF培养基上分化成胚并发育成再生植株。新陆早42号在140 d有根系发育良好的能嫁接植株（株高 7～8 cm）,而新陆早33需180 d。即成功建立了新陆早42号的再生体系,且其胚胎发生能力和再生能力均优于对照。     

绿色棉新彩棉7号体细胞胚胎发生及其植株再生

以绿色棉新彩棉7号的子叶、下胚轴为外植体,MSB(MS培养基附加B5维生素)基本培养基附加不同激素组合,诱导愈伤组织及调控分化,通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株.结果表明:0.1 mg· L-1 KT(Kinetin,激动素)+ 0.1 mg·L-12,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic,2,4-二氯苯氧乙酸)为诱导愈伤组织的最适植物激素组合,不同外植体处理出愈率均达到100％,但下胚轴纵切面背向培养基放置培养更有利于诱导愈伤组织形成;分化调控阶段的最佳植物激素组合为0.15 mg·L-1 KT+ 0.3 mg·L-1 IBA(Indole-3-butyric acid,吲哚丁酸),胚性愈伤分化率可达23.33％; MSB中去除NH4NO3同时KNO3加倍,附加0.5 g·L-1Asn(Asparagine,天冬酰胺)和lg· L-1 Gln(Glutamine,谷氨酰胺),胚性愈伤可进一步分化获得体细胞胚,将成熟的子叶胚接种于1/2MS获得完整的再生植株. 本研究通过体细胞胚发生途径获得了新彩棉7号的再生植株,为天然彩色棉基因工程研究奠定了一定基础.     

刺五加体细胞胚再生体系的研究

以刺五加种子为外植体,采用固体培养筛选出最优培养基,并成功地诱导出体细胞胚获得再生植株,以此来建立一套成熟稳定的刺五加体细胞胚再生体系。试验结果表明, 最适宜的胚性愈伤组织诱导培养基为1/3MS+1.0 mg?L-12,4-D,其诱导率可达50%;胚性愈伤组织增殖的最适培养基为1/3MS+1.0 mg?L-12,4-D,其增殖倍数可达4.24倍;胚性愈伤组织在不添加任何植物生长调节物质的1/3MS培养基上培养,可促进体细胞胚的形成、萌发及植株转化率。添加10 g?L-1蔗糖时,体细胞胚的发芽率达到90%,植株转化率达到97.8%。     

掌叶半夏悬浮培养下的体细胞胚胎发生的研究

掌叶半夏种子在附加２，４－Ｄ２．０，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上形成浅黄色或白色颗粒状胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在附加２，４－Ｄ１．０，ＢＡ０．５，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养其中振荡培养，可产生大量的体细胞胚。２，４－Ｄ对体胚诱导效果显著并促进其早期发育，但抑制其进一步发育成熟。ＮＡＡ对体胚诱导效果不如２，４－Ｄ，但可使体胚正常发育。水解酷蛋白明显提高体胚诱导频率。显微观察表明：体胚起源