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家蚕基因组DNA甲基化分析 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA甲基化在生物的基因表达调控与发育调节过程中具有重要作用。应用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)技术对7个家蚕保存品种的胞嘧啶甲基化模式和程度进行评估。在所能检测的CCGG序列中,至少有8.6%~10.9%的胞嘧啶发生了甲基化;12对引物共获得1 156条扩增带,其中376条在品种间呈多态性,多态性比例为32.5%。结果显示:家蚕基因组可检测到DNA甲基化,各品种间的甲基化模式存在差异,CCGG序列中胞嘧啶外部甲基化(10.9%)高于内部甲基化(8.6%)。 相似文献
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家蚕单粒卵DNA的快速制备方法研究 总被引:5,自引:2,他引:3
研究了含量甚微的家蚕单粒卵DNA的抽提方法。将蚕卵催青至转青,以增加蚕卵的DNA含量。在Eppendorf管内用牙签刺破 蚕卵,再用酚、氯仿速提法抽提,能够在1h左右制备出符合RAPD需要的DNA模板,每粒卵能够提取到100ng左右的DNA,制备量接近常规方 法。 相似文献
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家蚕微粒子孢子DNA的制备方法 总被引:10,自引:7,他引:3
家蚕微粒子孢子DNA的制备方法曹广力,张志芳,贡成良,吴祥甫(苏州蚕桑专科学校)家蚕微粒子(Nosemabombycis,Nb)孢子由于被一层几丁质为主要成分的外壳所包被,对一般的化学物品和不良环境具有根强的抵抗性,不易去除。为获得芽体细胞,传统的方... 相似文献
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家蚕(Bombyx mori)线粒体DNA的经济快速提取方法 总被引:5,自引:0,他引:5
对碱裂解法进行了改良,采用不同pH值的均浆缓冲液从家蚕5龄幼虫后部丝腺.蛹和卵中提取mtDNA,调查其得率和纯度,建立了家蚕线粒体DNA经济快速提取方法。 相似文献
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为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒(LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254),比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果.结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894(OD260/OD280)、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优.因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)病原鉴定的首选试剂盒. 相似文献
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山羊痘病毒基因组DNA的提取及酶切分析 总被引:1,自引:0,他引:1
对山羊痘病毒贵州分离株(LD株和QL株)和参考株(Y株和B株),采用Vero细胞增殖和差速离心浓缩后,以SDS-蛋白酶K法提取病毒基因组DNA,以3种核酸内切酶EcoRⅠ、HindⅢ和PstⅠ进行酶切图谱分析。接种山羊痘病毒48h~60h后,Vero细胞呈现典型的细胞病变;病毒基因组提取样本的纯度在1.8~1.9之间,经琼脂糖凝胶电泳均出现一条纯净的DNA条带;经3种内切酶酶切后,贵州分离株的酶切图谱与参考疫苗毒株Y株基本一致,比参考弱毒株B株少3条~4条酶切片段。这为山羊痘病毒毒力基因的进一步研究奠定了基础。 相似文献
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本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示:酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。 相似文献
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采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA。结果表明:EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB 法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的 DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求。 相似文献
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苜蓿基因组DNA提取和RAPD反应条件优选 总被引:17,自引:7,他引:17
采用CTAB法、N2-SDS法、SDS法和改进的CTAB法,提取苜蓿基因组DNA,比较其分离效果.结果表明,改进的CTAB法为最佳提取法.对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,14ng/μL模板DNA,2.5μL10x反应缓冲液,10碱基引物浓度0.1μmol/L,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度0.3mmol/L,Mg2+浓度2.5mmol/L.PCR反应循环为:94℃4min,36℃30s,2℃1min;94℃30s,36℃30s,2℃1min,45个循环;2℃延伸10min. 相似文献
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多花胡枝子基因组DNA提取与RAPD反应体系优化 总被引:4,自引:2,他引:4
以多花胡枝子干种子、萌发种子及开花期叶片三种材料提取基因组DNA,其中开花期叶片用CTAB法提取、干种子和萌发种子用SDS法提取的DNA均用于RAPD研究。结果表明,叶片基因组DNA的RAPD扩增最佳反应体系是:DNA模板用量为75ng,Mg2+浓度2.1mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,随机引物浓度为0.2pm/μL,10×buffer2.5uL,TaqDNA聚合酶1.5个单位,反应总体积25uL;扩增反应程序:94℃预变性3min;94℃变性30s,36℃退火30s,72℃延伸1min,循环45次,72℃延伸10min。 相似文献