华木莲叶中内生真菌的群落结构

为了解我国特有珍稀植物华木莲叶片的内生真菌菌群结构特征,以华木莲叶片为材料,采用组织分离法分离华木莲的内生真菌。结果表明,PDA改良培养基(PDA培养基内加20 g/L华木莲叶汁液、30 mg/L链霉素)的分离效果最好。从华木莲的叶中共分离得到87株内生真菌,经显微形态鉴定,鉴定菌株74株,为4目5科10属,分别为青霉属、木霉属、曲霉属、小孢霉属、交链孢属、枝孢属、长蠕孢属、镰孢霉属、拟茎点霉属、丝核菌属,结果显示叶中内生真菌菌群多样性较丰富,优势属为无性丝孢类菌群中青霉属、木霉属、交链孢属和无性腔孢类拟茎点霉属;分离率分别为17.2%、12.6%、10.4%和11.5%,对开发和利用植物内生真菌及丰富真菌的物种具有重要意义。     

产喹诺里西啶碱苦豆子内生真菌的筛选与鉴定

从健康苦豆子植株中分离到214株内生真菌,通过薄层色谱法检测筛选到4株内生真菌产喹诺里西啶碱.用3种培养基分离菌株,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定.结果表明:4株内生真菌分别属于亚大茎点霉属(Macrophoming)、卵形孢霉属(Oospora)、镰孢霉属(Fusarium)和头孢霉属(Cephalosporium).     

濒危桃儿七根中产鬼臼毒素内生真菌的筛选及分子鉴定

濒危藏药桃儿七根及根茎中含有鬼臼毒素,筛选和鉴定桃儿七根部内生真菌,以期获得产鬼臼毒素类成分的内生菌种,为缓解该药用资源匮乏现状,保护桃儿七植物资源和发现新的天然活性菌株提供参考。采用组织块法对桃儿七根部的内生真菌进行分离,并利用TLC和HPLC检测其代谢产物中的鬼臼毒素类成分,检测波长254 nm,流动相乙腈-水(40∶60)。同时通过形态学和分子生物学相结合的方法对产鬼臼毒素类成分的内生真菌进行鉴定。结果共分离得到8株内生真菌,其中菌株G-1,G-2,G-3,G-4,G-5的发酵液中含有鬼臼毒素类成分,分别鉴定为Pleosporales sp.MF565(100%)、Pseudallescheria sp.T55(100%)、Hypocreales sp.MF489(100%)、Hypocreales sp.LF213(100%)、Cyphellophorareptans strain CBS 458.92(100%)。     

诺丽内生真菌的分离鉴定及其次生代谢产物的抗氧化活性

对采自海南省海口市、万宁市、儋州市、琼海市、三亚市和临高县的诺丽果和叶,消毒后,25℃下分离培养得到32株内生真菌,采用26s r DNA D1/D2区域和ITS r DNA测序鉴定菌种。结果表明:32株内生真菌属于担子菌门(Basidiomycota)、子囊菌门(Ascomycota)2个类群。其中,13株酵母菌分别属于金担子菌属(Aureobasidium)、蔷薇色酵母属(Rhodotorula)、隐球菌属(Cryptococcus)3个属5个种;19株霉菌分别属于刺盘孢属(Colletotrichum)、间座壳属(Diaporthe)、炭团菌属(Hypoxylon)、枝孢属(Cladosporium)、镰刀菌属(Fusarium)、叶点霉属(Phyllosticta)和赤霉属(Gibberella)7个属10种。同时,采用乙酸乙酯溶剂对15种诺丽内生真菌发酵液进行提取,获得次生代谢产物。用ABTS+·自由基清除法进行了抗氧化活性评价,用福林-肖卡法和Al Cl3显色法测定各提取次生代谢产物中总多酚含量(TPC)、总黄酮含量(TFC)。结果显示,乙酸乙酯提取的15种诺丽内生真菌都具有抗氧化活性,且m48,j22抗氧化活性显著,诺丽内生真菌具有较丰富的多样性和具有产生抗氧化活性物质的潜力,在医药健康领域具有重要应用价值。     

银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定

采用组织分离法从银杏(Ginkgo biloba)健康组织中分离得到25株内生真菌,根据菌株在PDA培养基上的培养特征,5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属,3株为毛霉属、3株为青霉属,2株为根霉属,1株为简梗孢霉属,3株分离菌株不产孢子。测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用,共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株,对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定。     

木麻黄内生真菌次生代谢产物及生物活性

【目的】分离和鉴定木麻黄Casuarina equisetifolia枝条和果实中的内生真菌,筛选具有抗菌和抗氧化活性的内生真菌。【方法】采用组织块分离法分离木麻黄枝条和果实中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;采用薄层层析-生物自显影法测定木麻黄内生真菌次生代谢产物对细菌的抑制活性,采用多孔板-DPPH显色法测定抗氧化活性。【结果】从木麻黄枝条和果实中共分离鉴定得到12株内生真菌,枝条和果实内生真菌存在明显的差异,相同的菌株只有2株,分别为Cef-1(Pseudofusicoccum sp.)和Cef-7(Pestalotiopsis sp.);12株内生真菌分属于9个不同的属中,分别为Pseudofusicoccum、葡萄座腔菌属Botryosphaeria、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis、木霉属Trichoderma、曲霉属Aspergillus、裂菌属Rhytidhysteron、拟茎点霉属Phomopsis、镰刀菌属Fusarium和炭疽菌属Colletotrichum。其中,葡萄座腔菌属种类最多,为木麻黄内生真菌的优势种群,其次是拟盘多毛孢属真菌。抗细菌活性的结果表明,Cef-2(Botryosphaeria sp.)表现出最强的抑制活性,对所有供试细菌的抑菌斑直径均大于10 mm,强于阳性对照硫酸链霉素,Cef-1和Cef-9(Fusarium sp.)对青枯病菌Ralstonia solanacearum也表现出较好的抑制活性。内生真菌Cef-2表现出最好的抗氧化活性,IC50为0.80mg/mL。【结论】木麻黄枝条和果实中均存在内生真菌且均以葡萄座腔菌属为优势种群,2个部位真菌的种类存在明显差异。内生真菌Cef-2表现出最强的抗细菌和抗氧化活性,可作为候选菌株进一步分离和鉴定其活性成分。     

金钱松内生真菌抗植物病原真菌活性的研究

首次对金钱松内生真菌进行了分离,并以稻瘟霉(Pyriculariaoryza)P-2b活性筛选体系为筛选模型,以水稻纹枯病菌(Corticium sasakii)AS3.2872、亚麻刺盘孢(Colletotrichum lini)AS3.4486、禾谷镰孢(Fusarium graminearum)AS3.4598和棉灰星盘多毛孢菌(Pestalotia gossypii Hori)等4种常见植物病原真菌为指示菌,研究了金钱松内生真菌抗植物病原真菌活性菌株的抗菌能力。结果表明,金钱松内存在着大量具有抗稻瘟霉P-2b活性的内生真菌,JJ18,JJ28,JJ314和JJ323等4株活性菌株对指示菌表现出强烈的广谱抗菌能力,其中JJ314,JJ323可诱导稻瘟霉P-2b菌丝呈现明显的念珠状变形现象,表明这2株活性菌株代谢产物中可能含有低毒性抗真菌成分。金钱松内生真菌是潜在的杀菌生物农药资源。     

1株杜仲内生真菌的抗氧化活性分析和菌种鉴定

[目的]研究杜仲内生真菌的抗氧化活性和菌种鉴定。[方法]采用组织分离法,筛选杜仲叶片的内生菌种。菌株No.173的总抗氧化活性最高,作为供试菌种。制备它的发酵液提取物,测定了提取物抗氧化能力。对菌株No.173进行了形态和分子鉴定。[结果]处理4 d后,处理组的POV值极显著性低于对照。第6天起,处理组的效果明显好于阳性对照组（0.04%Vc和VE）。菌株No.173在PDA平板上的菌落初期为白色,渐变至暗青色,背面褐色,菌落边缘不整齐。序列比对结果显示,菌株No.173 rDNA ITS扩增片段的碱基序列与球毛壳菌序列相似性为100%。[结论]杜仲叶片中内生真菌菌株No.173为球毛壳菌,具有明显和稳定的抗氧化活性作用。     

蜂巢珊瑚共生真菌的分离、鉴定及其抗氧化活性

为从蜂巢珊瑚中寻找具有高抗氧化活性的共生真菌,采用组织研磨法分离蜂巢珊瑚共生真菌,通过对DPPH、ABTS自由基清除及对高价铁离子的还原能力的测定筛选高抗氧化活性的菌株,通过形态学特征观察,18S rDNA序列分析对高抗氧化活性菌株进行鉴定。从蜂巢珊瑚中共分离9株共生真菌;抗氧化活性测定结果表明,9株真菌发酵液均具有较好的抗氧化活性,其中S-1-5菌株的抗氧化活性最好,其对DPPH和ABTS自由基清除率分别为70.60%和67.18%,对高价铁离子还原能力强。依据S-1-5菌株的形态学特征和18S rDNA序列分析结果,将菌株S-1-5鉴定为球孢枝孢(Cladosporium sphaerospermum)。该菌株具有进一步开发应用的潜在价值。     

红树林植物海莲内生真菌活性菌株筛选及次级代谢产物研究

采用化学与生物学活性结合的二级组合筛选模型对红树林植物海莲内生真菌进行筛选,得到优势菌株Pestalotiopsis sp.,从中分离得到4个甾体化合物,通过~1H NMR、~(13)C NMR及MS等现代波谱技术对其进行结构解析,并结合相关文献数据,鉴定化合物分别为:3β-(E)-feruloyllupeol、stigmastan-3-one、β-sitosterol和sitost-5-en-3β-ol acetate,其中化合物分别3β-(E)-feruloyllupeol为首次从红树林内生真菌中分离得到。对4个化合物进行清除DPPH、ABTS自由基以及抗菌活性测试,结果显示,所有化合物均无抗菌、抗氧化活性。     

灯盏花内生真菌分离及其产黄酮内生真菌的初步研究

【目的】本研究对昆明市寻甸县人工栽培的大田灯盏花的根、茎、叶、花的内生真菌进行分离鉴定,旨在筛选产黄酮的内生真菌菌株。【方法】采用纯培养方法分离植物内生真菌,利用形态鉴定及显色反应筛选产黄酮内生真菌。【结果】共获得内生真菌40株,经显微形态观察40株内生真菌初步分类鉴定为14个属。通过黄酮类物质特异颜色反应,筛选到7株内生真菌产黄酮类物质,这7株内生真菌经初步鉴定为交链孢属(Alternaria sp.)、镰孢霉属(Fusarium sp.)、痕格孢属(Sirosporium sp.),根中内生菌产黄酮最高质量浓度为2.625 mg/L。【结论】灯盏花不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异性,从根部分离到的内生真菌产黄酮类质量浓度最高。     

冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株筛选

[目的]筛选冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株,为开发利用冬凌草内生真菌资源提供依据。[方法]以药用植物冬凌草为试验材料,分离筛选能产抗肿瘤活性物质的内生真菌。通过组织分离法,从贵州省施秉县产冬凌草中分离到152株植物内生真菌,利用抗肿瘤体外细胞增殖抑制筛选模型(SRB法)对其进行活性检测。[结果]结果表明,20株内生真菌(占总分离菌株的13.1%)对人慢性髓性白血病K562细胞具有显著的增殖抑制活性。[结论]冬凌草内生真菌是寻找抗肿瘤活性代谢产物的良好资源。     

四种药用植物内生真菌的分离及抗单胺氧化酶的活性研究

从栓翅卫矛(Euonymus phellomanus)、甘西鼠尾草(Salvia przewalskii)、刺五加(Acanthopanax senticosus)和黄海棠(Hypericum ascyron)4种药用植物的根及茎中分离并鉴定内生真菌,对其发酵产物乙酸乙酯提取物进行体外抗单胺氧化酶活性筛选,并采用柱层析法、波谱法分离鉴定活性菌株中的成分。结果显示,从这些植物中共分离得到20株内生真菌。其中,菌株SJ-2、WJ-3、HJ-1抗单胺氧化酶活性抑制率分别为83.8%、84.2%、71.9%。根据菌落形态特征及分子生物学鉴定,菌株SJ-2被鉴定为镰孢属(Fusarium)真菌,内生真菌WJ-3被鉴定为青霉菌属(Penicillium)真菌,HJ-1被鉴定为链格孢属(Alternaria)真菌。从菌株SJ-2中分离得到3个化合物,分别鉴定为Enniatin B、Monomethylsulochrin、Fumitremorgin C。     

青檀内生真菌球毛壳的抗氧化活性

为了获得和利用具有较高抗氧化活性的植物内生真菌资源,在菌种筛选的基础上,采用碘量法、铁氰化钾还原力测定法、光照核黄素体系法、分光光度法、亚甲蓝光度法和Folin-Ciocalteu法研究了分离自1株青檀内生真菌发酵液提取物的抗氧化作用.结果表明,该菌发酵液提取物的总抗氧化活性及稳定性优于芸香苷,10 d的过氧化值达到8.13 mEq/kg;0.1 mg/mL浓度下的还原力吸光度最大,为0.152,0.5 mg/mL浓度下的超氧阴离子自由基清除率为50.6％;0.1 mg/mL浓度下的DPPH自由基清除率为86.0％;2.5 mg/mL浓度下的羟基自由基清除率为47.9％.该菌的多酚含量为116.11 mg/g,且是其主要的抗氧化活性成分,该菌被鉴定为真菌球毛壳,说明这种真菌具有开发抗氧化活性物质的潜力.     

金银花中产绿原酸内生真菌的分离与鉴定

以不同产区金银花的不同部位为材料,采用组织块法对金银花内生真菌进行分离鉴定,并结合TLC法和HPLC法对菌株发酵液进行定性分析.结果表明,共分离得到内生真菌80株,分属于5目、5科、10属,筛选出3株产绿原酸的菌株,均属于链格孢属.金银花中存在着丰富的内生真菌,不同产区及不同部位间内生真菌的种类和数量均存在差异,河南新密产绿原酸活性菌株较多.     

喜树内生真菌的分离与鉴定

以我国特有药用植物——喜树(Camptothecaa cuminata Decne.)为试验材料,对喜树的根、茎、叶、种子进行内生真菌的分离,共分离得到菌株151株。对其中70株内生真菌进行了鉴定,鉴定为15个属,11个科,10个目,5个纲,分属3个亚门。鉴定结果在一定程度上反映了喜树内生真菌的生物多样性,并为筛选产喜树碱及其类似物的菌株奠定了一定的基础。     

贵州小白及内生真菌多样性与产抗病活性物质菌株的筛选

为探明贵州小白及内生真菌多样性规律,挖掘农业病原菌微生物防治新资源,采用组织块分离法结合形态学和ITS r DNA分子系统发育分析法,对从贵州小白及(Bletilla formosana)叶、根和茎中分离的内生真菌进行鉴定;并以烟草黑胫、水稻纹枯和小麦赤霉3种常见农业病原菌作为靶标菌,通过平板对峙法筛选抗病活性菌株。结果表明:1共分离获得内生真菌137株,归为12目18科22属。其中,优势菌群为链格孢属(Alternaria)、刺盘孢属(Colletotrichum)和镰刀菌属(Fusarium),三者分别占总属数的17.07%、12.19%和9.76%;小白及内生真菌的辛普森指数(D)为0.923,香农指数(H)为2.8342,表现出较为丰富的多样性。2筛选出10株具有较强拮抗作用的内生真菌。其中,木霉属GZFJ021和隔孢球壳属GZLG033菌株对3种病原菌菌丝的抑制效果为79.47%~98.82%。     

贝母内生真菌研究进展

对贝母中的活性成分、贝母内生真菌的多样性以及产物、贝母内生真菌发酵条件等方面的研究进展进行了综述,贝母中主要的活性成分为生物碱,其内生真菌种类具有多样性,其中可筛选出可以产生活性生物碱的菌株,这些菌株的筛选、鉴定、发酵条件探索及代谢产物的分离提纯是研究热点。     

3种拮抗烟草疫霉及产IAA内生细菌的分离鉴定

为挖掘河南省洛阳地区烟株体内的内生细菌功能菌株,以期开发优良生防菌剂。采用稀释涂布平板法分离纯化烟株各生育时期内生细菌菌株,采用平板对峙法、生长速率法测定内生菌株对烟草疫霉的抑制作用,紫外分光光度计法测定菌株产生IAA的水平。对筛选出的功能内生菌株进行形态学、生理生化鉴定及16S rDNA、gyrB序列分析鉴定,并测定对种子萌发的促生作用。结果表明,筛选出的12株内生菌株的鉴定结果为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)7株,沙福芽孢杆菌(B.safensis)4株,奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)1株。芽孢杆菌属占菌株总数的91.67%,其中菌株LYYY63-1、LYRY39-1、LYSX141具有较强的抑制活性,对烟草疫霉的抑菌率分别为88.10%、84.55%和73.33%;沙福芽孢杆菌菌株LYYY61-2、LYYY117对烟草疫霉的抑菌率达62.10%、64.72%;奇异变形杆菌菌株LYRY45产IAA水平达11.06 mg/L,具有较高的产IAA水平。12株细菌对烟草7种病原真菌具有不同程度的抑制作用,抑菌谱广,对烟草种子根长和总长均有显著的促生...     

软枣猕猴桃内生真菌发酵制备蒽醌类化合物及其抗氧化活性研究

为了从软枣猕猴桃内生真菌中获得具有抗氧化活性的蒽醌类化合物,本研究以自主筛选的软枣猕猴桃内生真菌Z2为发酵菌株,大黄酸作为标准品,通过乙酸镁甲醇显色法来定量检测目标产物含量。选取发酵时间、萃取溶剂以及液料比3个影响因素,进行3因素3水平正交试验。确立了发酵提取蒽醌的最佳工艺条件:发酵时间为5d,萃取溶剂为正丁醇,料液比为1∶50,在此条件下蒽醌提取率为22.04mg·L~(-1);通过测定清除DPPH、超氧阴离子、烷基等自由基能力以及还原Fe~(3+)能力来研究蒽醌类物质的抗氧化活性。结果表明:蒽醌类物质浓度在100μg·mL~(-1)时,对DPPH的清除能力为72.27%,对超氧阴离子的清除能力为13.33%,对烷基自由基的清除能力高达76.75%。因此,通过软枣猕猴桃内生真菌发酵可为生产具有多功能抗氧化活性的蒽醌提供简化、经济的生产工艺,该研究不仅为蒽醌类化合物的提取开拓了资源空间,也为植物内生真菌的工业化应用进行了有益探索。