帕金森病模型大鼠脑内CDNF表达变化

为了探讨帕金森病(PD)发病过程中大脑多巴胺能神经营养因子(CDNF)表达的变化,以大鼠为模型,研究了帕金森病CDNF及相关基因的表达变化,从而为基因治疗帕金森病提供理论依据。实验采用单侧黑质内单点注射6-羟多巴胺的方法制备帕金森病大鼠模型;运用免疫组织化学、Western blot及Q-PCR方法检测CDNF和多巴胺合成限速酶—酪氨酸羟化酶(TH)在模型大鼠黑质中表达的变化。研究结果发现,PD模型大鼠脑黑质区CDNF和TH阳性细胞数明显减少;进一步研究表明,与正常大鼠相比,模型大鼠CDNF m RNA表达水平虽未见显著改变(P0.05),但CDNF及TH蛋白表达极显著降低(P0.01)。提示帕金森病的发病可能与黑质中CDNF和TH表达量降低,进而抑制多巴胺合成有关。     

迷迭香酸甲酯对6-OHDA所致脑内氧化损伤的影响

采用脑内定位注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)建立帕金森病小鼠模型,以阿朴吗啡诱导的转圈试验、转棒试验检测小鼠的运动功能,免疫组织化学染色法检测各组小鼠纹状体区TH阳性纤维的量,以化学比色法测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)活性水平,以Western-blot检测小鼠纹状体区SOD1、SOD2和Nrf2水平,q-PCR检测各组脑内NQO1、Sod1、Sod2、Cat和Gpx1水平。结果表明:迷迭香酸甲酯可显著减少阿朴吗啡诱导的PD小鼠旋转圈数量,增加PD小鼠在转棒上的停留时间、纹状体区TH阳性纤维量及SOD1、SOD2和Nrf2的蛋白水平。结果提示迷迭香酸甲酯对6-OHDA诱导的PD小鼠多巴胺能神经元损伤有显著的保护作用,其可能通过抑制脑内氧化应激水平而发挥神经保护作用。     

骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植对颞叶癫痫大鼠学习记忆障碍的改善作用

   探讨骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至海人酸(kanic acid,KA)致痫大鼠海马后对学习记忆障碍的改善作用,从而为干细胞移植治疗癫痫提供理论依据.体外分离大鼠骨髓基质细胞,并在特定条件下培养、诱导分化为神经干细胞.在海马内注射KA建立大鼠癫痫模型,之后把诱导的神经干细胞移植至KA致痫鼠的海马内,用Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,用PCR方法检测海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达,采用Western blot技术检测海马内NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达.结果显示:骨髓基质细胞成功诱导分化为神经干细胞,诱导分化的神经干细胞移植到脑内可明显改善大鼠的学习记忆障碍;移植组大鼠海马内NSE、c-fos和SEZ-6基因表达下调,NSE、C-FOS和SEZ-6蛋白表达亦下调,与阳性对照组及假移植组比较,差异显著(P<0 05).说明骨髓基质细胞诱导的神经干细胞移植至KA致痫大鼠海马后对学习记忆障碍有明显的改善作用,其机制可能与NSE、c-fos、SEZ-6基因和蛋白的表达下调相关.     

运输应激对大鼠行为、血清皮质酮及下丘脑视上核nNOS表达的影响

为研究运输应激对动物行为、内分泌以及脑内神经型一氧化氮合酶(Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响,采用摇床加制动束缚模拟公路运输途中的摇晃、拥挤和限制活动等因素,建立大鼠运输应激模型(35℃,120r/min,应激2h)。将18只大鼠随机分为对照组、应激组和应激恢复组,采用旷场试验评定大鼠行为反应,放免法测定大鼠血清皮质酮含量,免疫组化法检测大鼠下丘脑视上核(Supraoptic nucleus,SON)中nNOS的表达。结果显示,与对照组相比,应激组大鼠的自主活动明显减少(P0.01),血清皮质酮(Corticosterone,CORT)含量显著增加(P0.01),SON中nNOS的平均光密度值显著上升(P0.01),应激恢复组大鼠的自主活动次数和血清皮质酮含量恢复至正常水平,而SON中nNOS的平均光密度值进一步上升。上述结果表明,运输应激对大鼠情绪、行为和神经内分泌有显著影响,24h后行为及内分泌状况改善,而神经递质的改变则需更长时间恢复。     

运动疲劳大鼠可能通过海马LTP抑制及CaN蛋白表达增多降低学习记忆功能

目的:通过观察运动疲劳对大鼠学习记忆、海马CA1区长时程增强(LTP)效应和钙神经素(CaN)蛋白表达的影响,探讨运动疲劳影响学习记忆功能的生理机制.方法:32只健康雄性8周鼠龄SD大鼠,随机分为安静对照组(CG)和运动疲劳组(FG),每组16只.运动疲劳组做连续7天递增负荷跑台运动,每天运动至力竭,对照组不加干预.7天建模结束后,运用避暗穿梭实验检测2组大鼠学习记忆能力,并分别采用在体脑立体定位—神经电生理方法观察海马CA1区LTP效应和免疫组织化学方法观察大鼠海马CA1区CaN蛋白表达水平.结果:与CG大鼠相比,FG大鼠避暗潜伏期缩短,错误次数增加,日差异显著(P＜0.01);最大场兴奋性突出后电位(fEPSP)的平均幅值FG大鼠(113.81％±2.36％)较CG大鼠(129.31％±2.38％)显著降低(P＜0.01);FG大鼠CaN蛋白表达也较对照组显著上调(P＜0.01).结论:运动疲劳可降低大鼠学习记忆能力,抑制海马CA1区LTP效应,上调CaN蛋白表达.提示:运动疲劳降低大鼠学习记忆功能的生理机制可能与海马CA1区LTP抑制及CaN蛋白表达增多有关.     

c-fos基因在内脏高敏感大鼠中的表达

研究检测c-fos在在肠易激综合征中的表达,探索肠易激综合征内脏感觉过敏的神经机制。用经新生期母婴分离方法建立内脏感觉过敏大鼠模型,成年后(出生后60 d)给予结直肠球囊扩张(colorectal distension,CRD),用免疫组化方法检测脑干中缝背核、脊髓腰骶节段背角c-fos蛋白的表达量。结果表明:母婴分离组CRD后中缝背核和脊髓背角c-fos疫反应阳性细胞的数量均较对照组显著增加,由此反映出早期生活事件所致脑-肠轴表达异常可能在肠易激综合征内脏感觉过敏发生机制中起重要作用。     

基于DirectX的地貌晕渲实现机制研究

目的:探讨偏侧帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠黒质致密部(SNpc)胶质细胞的变化.方法:6-羟多巴胺(6-OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型.采用免疫组化方法观察大鼠黒质致密部酪氨酸羟化酶(TH)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、增殖细胞核抗原(PCNA)和S-100蛋白免疫阳性细胞并对其面密度进行定量分析. 结果:帕金森病组大鼠毁损侧SNpc部位的TH免疫阳性面密度较正常组大鼠明显减少(P<0.01),而GFAP、PCNA、S-100免疫阳性面密度则明显增多(P<0.01).结论:PD大鼠毁损侧SNpc部位存在明显的胶质细胞增生;SNpc部位的胶质细胞可能影响着PD的发生及其严重程度.     

HT29和HCT116结直肠癌细胞增殖及其裸鼠移植成瘤研究

【目的】比较HT29和HCT116两株细胞系体外培养细胞增殖和在裸鼠体内移植后的成瘤情况。【方法】检测结直肠癌细胞HT29和HCT116的细胞活力,观察克隆形成细胞的形态,检测2株细胞p53和p21蛋白的表达水平;将2株细胞移植于裸鼠右侧腹股沟皮下,观察移植瘤的生长情况,记录裸鼠的体质量及移植瘤的体积。【结果】与HT29细胞相比,HCT116细胞在体外的增长率极显著升高(P<0.01),p21蛋白正常表达,p53蛋白表达水平极显著降低(P<0.01);在阿霉素存在的情况下,HCT116细胞中的p21蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)。14 d内HCT116细胞移植量对裸鼠体质量无显著影响(P>0.05);单只细胞接种量为4×105和2×106个时,HT29细胞肿瘤体积显著高于HCT116细胞(P<0.05)。【结论】HCT116细胞在体外的增殖速率显著高于HT29细胞,但是在体内HT29细胞比HCT116细胞更易成瘤,其分子基础可能与HT29细胞中p53基因突变导致的p53蛋白高表达及其下游p21蛋白低表达有关;高浓度的癌细胞移植有利于肿瘤形成。本研究...     

内毒素对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响及阳离子A的保护效应

为研究内毒素(ET)致大鼠肝细胞凋亡变化、对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响及阳离子A(CA)的保护效应.将试验动物随机分为3组:对照组(Ⅰ组)、ET组(Ⅱ组)和CA保护组(Ⅲ组).3组动物经相应处理后分别在3、4、8、12 h采集肝脏检测肝细胞凋亡情况和Caspase-3蛋白的表达情况.结果表明,肝细胞凋亡与Caspase-3蛋白的表达成正相关的关系.ET可上调Caspase-3蛋白在肝脏的表达,诱导肝细胞凋亡,最终导致肝脏受损;而CA则能明显下调Caspase-3在肝脏的表达,抑制肝细胞凋亡,对由ET诱导的肝损伤具有显著的保护效应.     

甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲减 大鼠海马SNAP-25的影响

阐明甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马突触小体相关蛋白25(SNAP-25)表达的影响,探讨成年甲减脑功能损伤及恢复机制。结果显示甲减大鼠血清T3、T4及海马CA1、CA3区和齿状回(DG)SNAP-25蛋白水平显著升高。单独甲状腺素或联合治疗后血清T3、T4水平恢复正常,但单独甲状腺素治疗后,海马SNAP-25水平仍显著高于对照组大鼠,联合治疗后海马各层SNAP-25蛋白水平与对照组无显著差异。这些结果提示,成年期甲减可致海马内SNAP-25蛋白表达增加,单独甲状腺素治疗后SNAP-25蛋白表达恢复不理想,与多奈哌齐联合治疗使甲减大鼠海马内SNAP-25蛋白恢复到正常水平。     

甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲减大鼠海马SNAP-25的影响

阐明甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马突触小体相关蛋白25(SNAP-25)表达的影响,探讨成年甲减脑功能损伤及恢复机制。结果显示甲减大鼠血清T3、T4及海马CA1、CA3区和齿状回(DG)SNAP-25蛋白水平显著升高。单独甲状腺素或联合治疗后血清T3、T4水平恢复正常,但单独甲状腺素治疗后,海马SNAP-25水平仍显著高于对照组大鼠,联合治疗后海马各层SNAP-25蛋白水平与对照组无显著差异。这些结果提示,成年期甲减可致海马内SNAP-25蛋白表达增加,单独甲状腺素治疗后SNAP-25蛋白表达恢复不理想,与多奈哌齐联合治疗使甲减大鼠海马内SNAP-25蛋白恢复到正常水平。     

鹅细小病毒vp2基因工程亚单位疫苗的免疫试验

为研究鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验对GPV延边分离株的vp2基因进行原核表达,将Western-blot试验鉴定为阳性的表达蛋白进行乳化,免疫BALB/c小鼠,应用ELISA方法监测试验动物的体液免疫水平,以此评价该疫苗的免疫效果。结果表明,在三免后2d,重组蛋白佐剂组检测到的血清OD450nm值达0.687,而生理盐水阴性对照组为0.038,两者差异极显著(P<0.01),提示本研究制备的基因工程亚单位疫苗在试验动物体内产生了VP2抗体水平。     

SNAP-25在成年期甲减大鼠海马内表达变化及甲状腺素治疗效应

观察成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)大鼠海马内突触相关蛋白SNAP-25(synaptosomal associated protein of 25 kD)改变及不同剂量甲状腺素治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复可能的分子机制。结果显示,甲减大鼠血清T3、T4水平显著低于正常对照组(P<0.05),背侧海马突触小体内SNAP-25的表达水平显著高于正常对照组(P<0.05);常规剂量替代治疗组大鼠血清T3、T4恢复至正常水平,SNAP-25表达水平与甲减组比较未见明显改变(P>0.05);经大剂量替代治疗后血清T3、T4高于正常;SNAP-25的表达恢复到正常水平(P<0.05)。这些结果提示,成年期甲减大鼠海马内SNAP-25表达增加,甲状腺素治疗能使其恢复,大剂量替代治疗使SNAP-25表达恢复至正常水平。     

卷烟烟气暴露对大鼠学习记忆功能及海马组织病理和BDNF表达的影响

设对照组(未染毒)、低剂量组(约2.5支烟,每天染毒10 min)、中剂量组(约5支烟,每天染毒20 min)及高剂量组(约10支烟,每天染毒40 min)4个处理,将雄性SD大鼠置于气体染毒箱内行被动吸烟,研究卷烟烟气暴露对大鼠学习记忆功能及海马病理和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophicfactor,BDNF)的影响。结果表明:染毒30 d,染毒组大鼠潜伏时间均显著短于对照组,BDNF表达显著高于对照组;染毒60 d,中剂量组大鼠潜伏时间显著短于对照组,BDNF表达显著高于对照组;染毒180 d,染毒组大鼠潜伏时间显著长于对照组,BDNF表达显著高于对照组;不同剂量处理大鼠的海马HE染色均无明显变化,大鼠的海马组织均无器质性损伤;短期烟气暴露可提高大鼠学习记忆功能,随染毒时间的延长,大鼠学习记忆功能下降,该作用与海马BDNF的表达密切相关。     

奥扎格雷钠对大鼠局灶性脑缺血C-Fos蛋白表达的影响

目的:观察奥扎格雷钠对大鼠局灶性脑缺血C-Fos蛋白表达的影响并探讨其作用机制。方法:采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,通过免疫组化法检测脑缺血24 h C-Fos蛋白的表达以及经奥扎格雷钠(8 mg/kg)处理后对该蛋白表达的影响。结果:脑缺血24 h C-Fos蛋白的表达明显增加;奥扎格雷钠可显著抑制脑缺血后C-Fos蛋白表达。结论:奥扎格雷钠对脑血的保护作用可能与抑制C-Fos蛋白的表达有关。     

不同抑郁模型大鼠行为学及神经营养因子表达的对比研究

目的 对比分析不同抑郁模型大鼠的生物学特点,为抑郁模型研究提供实验依据。方法 40只SD大鼠随机分为空白对照组、溶媒对照组、束缚应激组、慢性不可预见性温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）组,皮质酮注射组,每组8只。除对照组外,各组分别进行造模,时间均为21 d,造模结束后采用Morris水迷宫测试、旷场实验、强迫游泳实验检测大鼠的抑郁样行为,蛋白印迹法检测大鼠海马和前额叶皮质区脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）、神经生长因子（nerve growth factor,NGF）的含量。结果 与对照组比较,3种模型组大鼠逃避潜伏期时间均显著增加（P<0.01）,但只有皮质酮组大鼠进入目标象限潜伏期时间增加（P<0.05）;旷场测试中活动次数显著下降,其中CUMS组和皮质酮组对比束缚组有显著差异（P<0.01）;同时,3种模型组大鼠强迫游泳中的不动时间均显著增加（P<0.01）;此外,与对照组比较,各模型组大鼠海马和前额叶皮质区BDNF、NGF表达均显著下降（P<0.01或P<0.05）,但各模型组之间相互比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 慢性束缚应激、CUMS、慢性皮质酮注射均能使大鼠产生明显的抑郁样行为,且在脑内神经营养表达上差异无统计学意义。     

丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活化与脓毒症大鼠肺组织和血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及组织炎症反应的关系。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)模型制造大鼠腹腔感染。随机将56只大鼠分为正常对照组、CLP组和CLP+MAPK抑制剂(SB203580)处理组,各组又分不同时间点亚组。采用反转录多聚酶链式反应和酶联免疫吸附试验检测试剂盒分别测定血浆和肺TNF-αmRNA和蛋白水平;同时测定肺髓过氧化酶(MPO)活性、HE染色病理切片检测肺组织炎症反应程度。结果与正常大鼠相比,CLP后各时间点肺血浆和肺组织TNF-αmRNA、蛋白含量均升高明显;同时肺MPO和组织病理学评分升高明显。MAPK抑制剂处理后,与CLP组相应时间点相比,MPO和病理学评分均显著下降;TNF-αmRNA表达和蛋白含量同时显著降低。结论抑制MAPK活化可缓和脓毒症所致大鼠肺组织炎症反应,减轻肺组织损伤。     

中药脑泰方对大鼠脑缺血后VEGF和Angiopoietins表达的实验研究

目的 探讨中药脑泰方对大鼠脑缺血后血内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和血管生成素（angiopoietins,Ang）的表达变化及其在血管生成中的作用。方法 选择40只雄性SD大鼠,采用随机区组法分为A正常对照组,B假手术组,C MCAO模型组,D脑泰方组;,观察各组大鼠神经功能缺失计分、脑梗死体积;RT-PCR、Western blot方法检测不同组大鼠脑组织中VEGF、Ang-1及Ang-2 mRNA和蛋白的表达变化。结果 神经功能缺失计分及TTC染色显示脑泰方组脑缺血情况缓解;大鼠脑缺血后VEGF、Ang-2的表达水平增高,脑泰方组表达显著高于模型组（P<0.05）;Ang-1的表达水平在大鼠脑缺血后呈下降趋势,脑泰方组表达显著低于模型组（P<0.05）。结论 大鼠脑缺血后VEGF、Ang-1和Ang-2共同协调作用促进血管生成,中药脑泰方在脑缺血损伤后治疗血管新生样作用中发挥着促进作用。     

红景天苷对运动疲劳大鼠骨骼肌线粒体自由基代谢及呼吸链功能的影响

为研究红景天苷对运动疲劳大鼠骨骼肌线粒体自由基代谢及呼吸链功能的影响,将健康雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组(A组)、运动模型组(B组)、红景天苷低剂量运动组[50 mg·(kg·d)-1,C组]、中剂量运动组[100 mg· (kg· d)-1,D组]、高剂量运动组[200mg· (kg· d)-1,E组].除A组外,其余各组大鼠进行递增负荷跑台运动建立运动疲劳模型,记录大鼠体重及末次跑台力竭时间,检测骨骼肌线粒体锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平及呼吸链酶复合体Ⅰ-Ⅳ(CⅠ-CⅣ)活性,采用蛋白免疫印迹法检测骨骼肌Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核呼吸因子2(Nrf2)及血氧红素加氧酶(HO-1)表达水平.结果 表明:①与A组相比,B组大鼠跑台力竭运动时间,Mn-SOD、GSH-Px、C Ⅰ-CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达均显著降低,MDA含量显著升高(P＜0.01).②与B组相比,D、E组大鼠跑台力竭时间、Mn-SOD活性显著增加(P＜0.01),E组大鼠MDA含量显著降低(P＜0.01);C、D、E组GSH-Px、CⅢ、CⅣ活性及Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量显著增加(P＜0.01或0.05),D、E组CⅠ活性显著增加(P＜0.01或0.05),E组CⅡ活性显著增加(P＜0.05).红景天苷可通过提升机体抗氧化防御能力及线粒体呼吸链中相关酶活性,缓解运动性疲劳的产生,其机制可能是通过激活Keap1-Nrf2-ARE通路来实现的.     

血必净注射液治疗大鼠脓毒症的实验研究

目的 观察血必净注射液(XBJ)对脓毒症大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响,探讨XBJ治疗脓毒症的作用机制.方法 120只雄性SD大鼠随机等分为假手术组(A组)、盲肠结扎穿孔组(B组)、XBJ早期治疗组(C组)、XBJ晚期治疗组(D组).采用盲肠结扎穿孔术制作大鼠脓毒症模型,C组术后立即腹腔注射XBJ,D组术后24h注射XBJ.术后0h、6h、12h、24h、48h、72h随机处死大鼠,采用ELISA和RT-PCR分别检测血浆、肝组织中HMGB1表达.另取30只大鼠以B、C、D3组同样的模型及处理方式观察生存时间.结果 B组大鼠的脓毒症表现最为明显,其生存时间比C组和D组明显缩短(P＜0.01).A组各时间点均较低;B组大鼠血浆HMGB1水平在术后6h开始升高,24h达到峰值;C组24h浓度显著低于B、D组(P＜0.05或0.01);D组仅在72h时显著低于B组(P＜0.01).B组大鼠肝组织HMGB1表达水平在术后12h开始升高,24h达到高峰;C组24、48、72h水平显著低于B组(P＜0.01);D组48h显著低于B组,而24、72h高于C组(P＜0.01或0.05).结论 血必净是治疗脓毒症的可靠药物,其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关.