高短肽得率羊骨酶解物的制备及其体外抗氧化活性

以短肽得率为指标,响应面法优化羊骨碱性蛋白酶水解工艺,对酶解物的抗氧化活性进行研究,为羊骨的高值利用奠定基础。结果表明,以所得最优工艺即骨粉浓度8.24%,p H值9,加酶量4.35%,46℃水解5 h制备酶解物,短肽得率达71.19%;酶解物对3种自由基的清除率随浓度的增加而增加,对3种活性氧的清除能力为DPPH·O_2~-··OH;0.3 mg/m L酶解物对DPPH·,O_2~-·,·OH的清除率分别为46.21%,29.82%和24.16%。由此可见,以最优工艺制备的、富含短肽的羊骨碱性蛋白酶解物具有体外抗氧化活性,有望应用于饲料、食品、医药等领域。     

响应曲面法优化卵白蛋白抗氧化肽制备工艺研究

为优化酶解卵白蛋白制备抗氧化肽的工艺条件.以酶解物羟自由基(HO·)清除率为指标,在单因素实验的基础上选取实验因素和水平,根据Box - Behnken设计原理采用三因素三水平的响应面分析法,研究底物浓度,酶添加量和水解时间工艺的影响,对酶解条件进行优化研究.结果胃蛋白酶酶解卵白蛋白制备抗氧化肽的最优条件为:底物浓度3.24%、胃蛋白酶添加量11 332.12U/g蛋白、水解时间7.8h.酶解液的羟自由基清除率为44.20%,与预测值的相对误差为4.088%,理论值与预测值基本一致,与模型预测具有较好的拟合性.结论建立的模型在实践中进行预测是可行的.     

波纹巴非蛤活性肽的体外抗氧化活性

研究波纹巴非蛤活性肽体外清除自由基的作用,以实验室自制的波纹巴非蛤活性肽(27 406~69 000 u)为原料,测定其对羟自由基、超氧自由基、过氧化氢和亚硝酸根离子的清除能力。结果表明,当波纹巴非蛤活性肽的相对分子质量在40 000~45 000 u时,清除超氧自由基、过氧化氢、羟自由基和亚硝酸根的能力均达到最高峰。     

钙果仁活性肽的制备及其体内抗氧化活性评价

利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶对钙果仁蛋白进行三酶复合分步水解制备活性肽,通过给正常小鼠和模型鼠灌胃不同剂量的钙果仁活性肽来研究其对试验小鼠的抗氧化作用。结果表明,经三酶水解后的钙果仁活性肽有较好的清除DPPH·自由基能力,其IC50值为1.06 mg/mL。另外,活性肽高剂量组还能够显著提高正常小鼠以及模型鼠血清、肝脏和肾脏中SOD和GSH-PX的活力,同时可显著降低其血清和肝脏中MDA的含量,但对降低肾脏中MDA的含量作用不显著,说明钙果仁活性肽可清除自由基对机体的损害,在小鼠体内有一定的抗氧化作用。     

啤酒糟蛋白抗氧化肽的酶法制备及其体外抗氧化活力

为了更好地了解和研究啤酒糟蛋白的酶水解特性,选取了4种微生物蛋白酶(Alcalase、Flavourzyme、Neutrase和Protamex)对啤酒糟蛋白进行水解试验,并监测反应过程中水解度的变化和中间产物的还原力改变.结果表明:Alcalase的水解啤酒糟蛋白能力最强.在水解接近3h时基本达到DHmax.水解度的变化同还原力的变化并不完全符合对应关系,在接近DHmax时,还原力的变化随着水解的进行波动很大,还原力的极值点也基本都出现在水解度曲线的拐点附近,说明抗氧化活力同水解度的变化并不完全符合对应关系.     

猪血红蛋白抗氧化肽的酶法制备及其体外抗氧化活力观察

为建立猪血红蛋白抗氧化活性肽的酶法制备工艺,采用6种食品级商业蛋白酶Alcalase 2.4L、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和AS1398中性蛋白酶在各自最适反应条件下分别酶解猪血红蛋白8 h,结果显示：采用AS1398中性蛋白酶获得的产物水解度最高,其酶解过程中第2小时获得的抗氧化活性肽（NDAPⅡ）还原力最高,较猪血红蛋白还原力高31.8%;AS1398中性蛋白酶的酶解条件为底物5%（质量分数）,底物中含酶400U/g,温度45℃,pH 7.0。NDAPⅡ的还原力随浓度的增加基本呈线性增长趋势,虽然在低浓度下其还原力较阳性对照物BHT及VC弱,但在40 mg/mL质量浓度条件下,其还原力已略高于天然抗氧化剂VC,极具作为天然抗氧化剂的潜力。     

鲈鱼活性肽的制备工艺及其体外降血脂活性研究

以海洋鲈鱼为原料,采用胰蛋白酶酶解制备活性肽,以水解度为指标,采用正交试验法对酶解条件进行优化,运用胆酸盐结合试验比较制备的活性肽的体外活性.结果表明,胰蛋白酶酶解鲈鱼蛋白最佳酶解条件为:酶解温度40℃、酶添加量20 000 U/g、pH值8.5、酶解时间5h,此时水解度可达到12.5％;通过胆酸盐结合试验,发现其体外降血脂活性与酶解时间有关,酶解5h的酶解液降血脂活性最高(与降血脂药物考来烯胺相当).     

芝麻肽的制备及抗氧化活性

为探明芝麻蛋白肽的抗氧化活性,采用Box-Behnken设计响应面试验优化碱性蛋白酶水解芝麻蛋白条件,研究芝麻肽清除DPPH自由基的能力、还原能力以及抑制猪油和冷藏熟肉糜的氧化活性.结果表明,较优水解条件为:底物与酶的质量比为12.24,底物浓度6.91%、水解时间6.82 h,在此条件下水解度为30.2%.芝麻肽具有较强的抗氧化活性和还原能力,0.2 mg/ml 芝麻肽对DPPH自由基的清除率为98.55%;0.8 mg/ml 时,还原能力的吸光度为1.267,并达到稳定.0.02%的芝麻肽能明显抑制猪油的过氧化,144 h时能将其过氧化值从126.6 meq/kg降至43.0 meq/kg;芝麻肽浓度高于0.02%时抑制效果不明显.0.08%的芝麻肽对冷藏熟肉糜氧化的抑制率达到80%.     

酶促水解制备猪脑抗氧化活性肽

本文以新鲜猪脑为原材料,比较了13种生产用酶的酶解效率;采用筛选的几种较优酶进行酶解,获得酶解产物,经超滤分离获取不同分子质量的多肽,探究其总抗氧化能力;最后基于总抗氧化能力,优化猪脑抗氧化活性肽的酶解工艺。对13种酶进行筛选发现,胃蛋白酶、Ban 480 L、Palatase 2000 L和胰蛋白酶的酶解率显著高于其他酶。分子截留后发现分子量<1 ku组分的总抗氧化能力显著高于1~5 ku组分,且胰蛋白酶酶解产物中<1 ku组分的总抗氧化能力显著高于胃蛋白酶和Palatase 2000 L酶解产物;在加酶量20 mg、酶解时间3 h、酶解温度40 ℃、pH 7.0的条件下,胰蛋白酶酶解猪脑最佳,此时总抗氧化能力为17.03 mmol·g^-1。     

棉籽蛋白酶解物的制备及其抗菌活性

【目的】通过体外模拟动物胃肠道消化环境,对两种棉籽蛋白的酶解产物抗菌活性进行研究,为棉籽蛋白精深加工、高值化利用提供理论依据。【方法】以棉籽粕为原料,用Osborne法和传统的碱溶酸沉法分别制备棉籽蛋白(清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白)和棉籽分离蛋白(cottonseed protein isolate,CPI),用凯氏定氮法测定所得棉籽蛋白的蛋白含量,Tricine-SDS-PAGE测定蛋白亚基组成,通过扫描电镜观察蛋白的表面微观结构,选取蛋白含量较高的球蛋白(cottonseed globulin,CPG)和CPI进行研究。通过体外模拟动物胃肠道消化环境,用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次对CPG和CPI进行酶解;以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为受试菌,分别以抗生素卡那霉素(Kanamycin,Kan)及未经酶解的蛋白溶液为对照,研究棉籽蛋白酶解产物的抗菌活性,同时用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测酶解产物中小肽的分子量大小及分布。【结果】碱溶酸沉法的提取率为(70.52±2.40)%,所得CPI的蛋白含量为(89.53±0.66)%;用Osborne法分别得到清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等4种棉籽蛋白,提取率为(67.55±1.16)%,其中CPG的蛋白含量最高为(82.57±1.02)%。Tricine-SDS-PAGE图谱表明CPG的亚基组成与CPI较接近;扫描电镜观察到的蛋白表面微观结构差别较大,CPI为颗粒大小较均匀整齐的蜂窝状结构,CPG由大小不均一的蛋白颗粒构成;相对于CPI,CPG中氨基酸保留较为完全。相同加酶量处理情况下,CPI的水解度高于CPG,且棉籽分离蛋白的小分子肽段(MW≤0.8 k Da)含量(70%—85%)显著高于棉籽球蛋白(40%—60%)。抗菌活性检测结果表明,当胃蛋白酶-胰蛋白酶加酶量为5 000—5 000 U时,两种蛋白酶解产物的抗菌能力最强,此时CPI和CPG的水解度分别为(24.72±1.07)%和(19.26±0.39)%,二者酶解产物对大肠杆菌的抑制能力均高于对金黄色葡萄球菌的抑制能力;CPI酶解产物的抗菌活性比CPG高,两者未经消化的蛋白溶液均无抗菌能力。通过分子量测定结果分析得到CPI酶解产物的抗菌活性物质的分子量在0.57—0.75 k Da,而CPG分子量分布在0.66—0.78 k Da。【结论】两种方法制备的蛋白在提取率方面没有显著差异(P0.05),在亚基组成方面,Osborne法分级的蛋白间差异较大,但CPG和CPI组成较为相似;二者经体外模拟消化后的酶解产物均具有一定的抗菌活性,CPI酶解产物的抗菌活性高于CPG。     

水溶性灵芝肽在动物体外的抗氧化活性

【目的】研究水溶性灵芝肽在动物体外的抗氧化活性。【方法】用丙二醛(MDA)试剂盒测定MDA含量，用分光光度法测定大鼠血清自氧化溶血及小鼠肝线粒体肿胀度。【结果】当水溶性灵芝肽的剂量为0.25 mg•ml-1时，对大鼠红细胞自氧化溶血的抑制率达62.33%，对溶血过程中MDA生成的抑制率达91.24%；在有或无自由基诱导剂（Fe2+或H2O2）时，0.35 mg•ml-1的水溶性灵芝肽均能极显著抑制小鼠肝匀浆中MDA的生成（P＜0.01），且抑制率大致相当，为60%左右；当水溶性灵芝肽剂量为1.00 mg•ml-1时，对线粒体肿胀度的抑制率为90.52%，对线粒体中MDA生成的抑制率达65.42%，且呈明显剂量-效应关系。【结论】水溶性灵芝肽在体外具有明显的抗氧化作用。     

鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺研究

为建立鲍内脏抗氧化活性肽制备工艺,在单因素试验基础上,利用响应面法优化酶解工艺条件,建立了酶解时间、酶添加量、酶解温度与DPPH自由基清除率之间的数学模型;经超滤分离获得了不同分子质量的酶解产物,采用DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O_2~-·)的清除能力评价其抗氧化性,经MALDI-TOF/TOF分析其分子质量分布。结果表明:酶法提取鲍内脏抗氧化肽的最佳工艺为料液比1∶1、酶解时间4.8h、酶添加量3 000U·g~(-1)、酶解温度54℃;获得的分子质量为2~6ku的组分具有较强的自由基清除能力,DPPH自由基和O-2·清除能力分别为94.76%和60.24%。     

蟾蜍皮肤生物活性肽成分提取及体外抗氧化活性

为研究蟾蜍皮肤生物活性肽成分及体外抗氧化活性,以蟾蜍皮肤分泌物为研究对象,对其皮肤生物活性肽进行提取分离,得到F₁和F₂ 2种组分,测定2种组分对DPPH·、ABTS⁺·、·OH的清除作用及还原力,并进行比较。结果表明:F₂的抗氧化结果均高于F₁,其中,F₁、F₂对DPPH·最大清除率接近100%,IC₅₀分别为2.24,1.004 mg/mL;F₁、F₂对ABTS⁺·最大清除率也接近100%,IC₅₀分别为1.94,1.13 mg/mL;F₁、F₂对·OH最大清除率均>80%,IC₅₀分别为0.73,0.63 mg/mL。还原力测定结果也证实F₁与F₂均有很强的抗氧化性,并且F₂的还原力高...     

豇豆籽肽的制备及抗氧化活性研究

[目的]采用酶法制备豇豆籽蛋白肽,并探讨其抗氧化活性。[方法]先用碱提酸沉法制备豇豆籽蛋白,然后分别用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解制备豇豆籽肽,后者脱盐后进行DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除活性分析。[结果]碱性蛋白酶水解能力强于木瓜蛋白酶,2种酶水解后的豇豆籽肽对3种自由基均具有较好的清除活性。在相应浓度范围内,对DPPH自由基最大清除率分别为63.92%(碱性蛋白酶)和63.06%(木瓜蛋白酶),半数抑制浓度IC50分别为3.20和3.28 mg/ml;对羟基自由基最大清除率分别为87.66%(碱性蛋白酶)和85.88%(木瓜蛋白酶),相应IC50分别为4.21和4.89 mg/ml;对超氧阴离子自由基的最大清除率64.06%(碱性蛋白酶)和47.92%(木瓜蛋白酶)。[结论]研究可为豇豆籽蛋白肽的深度开发和综合利用提供一定的理论基础。     

鸭皮胶原蛋白肽的制备及抗氧化活性

以鸭皮为主要原料,采用湿法粉碎、碱性蛋白酶酶解技术进行鸭皮中胶原多肽的提取,以鸭皮胶原蛋白的水解度为主要指标,分别研究pH值、料液比、温度、酶用量和时间等因素对其的影响规律。通过正交试验结果确定鸭皮中胶原蛋白水解工艺的最佳条件为温度60 ℃,料液比1:20,加酶量7 000 U·g^-1,pH值8.5,反应时间4 h,此时水解度为22.14%;在添加浓度为16 mg·mL^-1时,其羟自由基清除能力、DPPH清除能力和还原力分别为65.22%、77.45%和79.36%;其分子质量分布为1 000~5 000 u的多肽占83.56%。     

花生肽的膜分离制备及抗氧化活性研究

热轧花生粕经过双菌种混菌固态发酵,将发酵产物溶解后经过膜分离得到1 ku以下、1～3 ku、3～10 ku、10 ku以上四种分子量范围的发酵滤过液。对四种分子量范围的滤过液分别以不同的浓度进行羟自由基清除、DPPH自由基清除、还原力、铁离子螯合力试验,并以还原型谷胱甘肽作比较,发现3～10 ku分子量范围的滤过液具有最高的抗氧化活性,其次为10 ku以上的滤过液,然后是1～3 ku的滤过液,1 ku以下的滤过液抗氧化活性最低。     

蝇蛆抗氧化肽的制备及其纯化

以DPPH自由基清除率为评价指标,通过单因素试验和正交试验优化碱性蛋白酶水解蝇蛆蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。采用超滤、Sephadex G25凝胶过滤层析对蝇蛆蛋白水解物进行分离纯化,筛选高抗氧化活性组分。结果表明,酶法制备蝇蛆蛋白抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量7000 U/g,底物质量浓度1%,酶解时间15 min,酶解温度50℃,p H值7.5。水解物经超滤得到相对分子量大于10 k D、5~10 k D以及小于5 k D的组分,以小于5 k D组分清除DPPH自由基活性最强。该组分通过凝胶过滤层析进一步分离得到2个组分,其中组分Ⅱ的清除DPPH活性明显高于组分Ⅰ,达到81.83±0.80%。酶解产物经2步纯化后,其DPPH清除活性得到了显著提高,提高约57.88%。     

微波辅助酶法制备的玉米抗氧化肽的抗氧化活性分析

为了研究微波辅助酶法制备的玉米抗氧化肽的体外抗氧化活性,试验对其还原能力及羟基自由基、超氧自由基、ABTS自由基和DPPH自由基清除能力进行分析。结果表明,玉米抗氧化肽具有较强的还原力,且对ABTS自由基、超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基的IC_(50)分别为22.93,14.18,11.28,8.2 mg/mL,说明该玉米抗氧化肽具有较好的体外抗氧化活性。     

罗非鱼鱼鳞活性肽的提取及其抗氧化活性研究

以罗非鱼鱼鳞为材料,采用单因素试验和正交试验,探讨了酶解提取罗非鱼鱼鳞活性肽的最佳条件,应用ABTS法和DPPH法评价其抗氧化活性。结果表明,酶解提取该活性肽的最佳工艺参数为:pH值9.0、水解温度55℃、料液比4%、碱性蛋白酶5 g/L、水解时间2 h。在此条件下,罗非鱼鱼鳞水解度保持20%左右,所提取物活性肽具有较强的抗氧化活性,其对ABTS的清除率为70.76%、对DPPH的清除率为73.02%。