甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究

【目的】探索一种利用甘蓝胞质雄性不育系(CMS)下胚轴和子叶进行快速扩繁的技术,为利用CMS大量繁制甘蓝杂交种提供一条新途径。【方法】以甘蓝CMS 05-2-10为试材,将苗龄5~7 d无菌苗的下胚轴和子叶切下,接种于MS培养基上,45~50 d后统计再生芽数,比较6-BA与NAA不同质量浓度配比对不定芽的诱导情况;将诱导出的不定芽接种于添加不同质量浓度(0,0.1,0.3,0.5 mg/L)NAA的MS生根培养基上,20 d后比较生根率和根的长势。【结果】在对下胚轴和子叶进行不定芽诱导时,MS培养基中分别添加1.0和4.0 mg/L的6-BA对下胚轴、子叶的诱导效果较好,其芽再生频率和分化系数分别为83.3%,53.0%和3.6,3.0。在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其对下胚轴不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为80.7%,分化系数为3.4,褐化率为1.5%;在MS培养基中添加4.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,其对子叶不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为50.0%,分化系数为3.2,褐化率为3.4%;二者的褐化率均明显低于仅添加6-BA的处理。在MS生根培养基中添加0.3 mg/L NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达100%,且根系生长健壮。【结论】利用甘蓝胞质雄性不育系CMS 05-2-10的下胚轴和子叶作为外植体进行不定芽的诱导,对于下胚轴,其适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂;对于子叶,其适宜培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。不定芽诱导生根的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。     

葡萄柚不定芽再生体系建立研究

为建立葡萄柚上胚轴离体再生体系,且为遗传转化技术在葡萄柚上的应用提供产参考,以葡萄柚种子实生苗上胚轴为材料,研究了不同激素种类与浓度对上胚轴愈伤组织诱导与分化及无菌苗生根的影响。结果表明:在添加KT 1.5～2.0 mg/L的MT培养基上,上胚轴切口愈伤发生率及对应的不定芽发生率均高于对照及其它处理;在KT 2.0 mg/L的基础上,添加浓度为0.2～0.3 mg/L的NAA对愈伤分化无增加作用,但对不定芽分化率有较大的提高作用,不定芽分化率达87.23%;3种激素比较,ABT 1.0 mg/L的生根效果高于其它处理,生根率达81.3%;卡那霉素对上胚轴的选择压力为60mg/L。综上所述,MT基本培养基中添加KT 2 mg/L及NAA 0.2～0.3 mg/L对葡萄柚上胚轴的不定芽发生率有显著的促进作用;ABT是无菌苗生根的较合适激素;卡那霉素对上胚轴的选择压力为60 mg/L。     

哈路比葡萄柚茎段的组培快速繁殖

以成年态葡萄柚的茎段为材料,研究不同激素组合、基本培养基对丛生芽增殖的影响,以及再生苗生根、炼苗与移栽技术。结果表明:(1)WPM+6-BA 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.2mg·L~(-1)+蔗糖40g·L~(-1)为初代培养的最佳培养基,腋芽诱导率达78.33%;(2)继代增殖的最适培养基为WPM+6-BA 0.75mg·L~(-1)+NAA0.2mg·L~(-1)+蔗糖40g·L~(-1),增殖系数达4.93,芽长达2.62cm;(3)培养基1/2WPM+NAA 0.1mg·L~(-1)+IBA 1.0mg·L~(-1)+蔗糖40g·L-1+AC 0.1%的生根效果最好,生根率达63.33%,株高3.03cm,根粗壮;(4)生根苗移栽成活率达78%以上。     

黑果枸杞产业现状及快速繁殖技术研究

为掌握黑果枸杞组培快繁技术,促进产业发展,以野生黑果枸杞为研究对象,对其不定芽增殖、诱导生根的培养条件进行筛选,并探讨产业发展措施。结果表明,黑果枸杞组培苗最佳初代培养基是MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+30mg/g蔗糖+6mg/g琼脂,达到83.3%的萌芽率;最有利于不定芽增殖的继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L+30mg/g蔗糖+6mg/g琼脂,芽增殖系数达3.63;最佳生根培养基1/2MS+NAA 0.1mg/L+IBA 0.1 mg/L+15mg/g蔗糖+6mg/g琼脂,生根率达到100%。     

甜魔芋芽鞘分化及植株再生条件的研究

以甜魔芋芽鞘为外植体,进行愈伤组织诱导、芽分化及植株再生的研究.结果表明:芽鞘在培养基MS +6-BA0.6 mg/L + NAA 0.1 mg/L+蔗糖 30g/L上愈伤组织诱导率最高,达92.3 %;芽分化最适培养基是MS +6-BA 1.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L+蔗糖 30g/L,分化率达93.8 %;切割后的芽在生根培养基1/2MS +NAA 0.1mg/ L+蔗糖 30g/L上,能100%形成完整植株.     

杂种枫香组织培养再生研究

目的枫香具有适应性强、生长速度快、观赏价值高等特点,既可以作为用材树种又可以作为优良的园林绿化树种。北美枫香能够与中国枫香杂交并可产生有杂种优势的后代,但是杂种枫香的快速繁殖技术和遗传转化体系还有待完善。方法本研究以北美枫香为母本,中国枫香为父本进行杂交,选用子一代杂种枫香的子叶、子叶节以及下胚轴为外植体材料建立高效的组培再生体系,并对3种外植体的分化能力进行比较。结果(1) 子叶和子叶节外植体最佳芽诱导培养基为0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基,而下胚轴外植体最佳芽诱导培养基为0.1 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基。(2)3种外植体在0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.8 mg/L GA不加琼脂的WPM芽伸长液体培养基中获得最高的平均不定芽诱导数。(3)不定芽在2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA的WPM培养基中生根,生根率达到100%。(4)不定芽生根培养2个月后长为完整植株,移栽成活率在90%以上。结论(1) 杂种枫香3种外植体的分化能力依次为:子叶节>子叶>下胚轴,其中子叶节的分化能力显著高于子叶和下胚轴。(2)TDZ能够有效促进不定芽的诱导,GA对不定芽的伸长具有显著的影响。(3)杂种枫香外植体在固体培养基中获得了最高的不定芽诱导率,在液体培养基中获得了最高不定芽平均数量,而且液体培养中未出现玻璃化。本研究为杂种枫香新品种的快速繁育以及遗传转化体系的建立奠定了良好的基础。      

华重楼组培快繁技术研究

【目的】建立华重楼组培快繁技术体系。【方法】以华重楼幼苗为试材,研究外植体预处理方式 和消毒方法,筛选适宜诱导的外植体,筛选不定芽诱导、增殖以及生根和结鳞茎最佳培养基。【结果】华重楼 外植体先经过 0.5% 多菌灵浸泡 2 h,再利用 75% 乙醇浸泡 45 s 和 0.1% HgCl2 消毒 10 min,污染率最低（1.67%）, 诱导的不定芽长势最好。高 5~10 cm、带根系的华重楼幼苗或去掉茎叶的幼苗是最适外植体,不定芽诱导最佳 培养基为 WPM+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖,诱导率达 98.33%,萌发的新芽生长更快;不定芽增殖 最适培养基为 MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+30 g/L 蔗糖,培养 90 d 后增殖系数为 3.75;不定芽生根和结鳞茎 最适培养基为 WPM+2.0 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖,生根和结鳞茎率达 96.67%,根系数 3.84 条,根长 4.15 cm,鳞茎直径 0.86 cm。生根苗 3—5 月份移栽到基质为泥炭土︰珍珠岩︰河沙 =2 ∶ 1 ∶ 1 的组合物中成活 率最高,为 30%。【结论】建立了适合华重楼幼苗组培快繁的技术体系,为华重楼的资源保护及规模化生产优 质种苗奠定了基础。     

文冠果成熟胚离体培养及细胞学研究

以文冠果成熟胚为外植体,进行了初代培养、继代培养和生根培养研究,结果表明:初代培养诱导文冠果成熟胚形成不定芽的适宜培养基是MS+2.0mg.L-16-BA+0.1mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,分化率可达94.7%;继代高生长的适宜培养基是MS+0.5mg.L-16-BA+0.5mg.L-1NAA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,培养50d后,苗高大于0.5cm芽数量平均达11.67株;生根培养的适宜培养基是WPM+1.0mg.L-1IBA+30g.L-1蔗糖+6g.L-1琼脂,生根率为70.30%,平均根数为3.57条。并通过石蜡切片技术,观察愈伤组织诱导、愈伤组织分化不定芽以及不定芽发育过程。     

番茄宝大906高频再生系统的建立及其潮霉素选择压的测定

以番茄宝大906品种为试材,通过对其子叶、下胚轴的离体培养,研究了不同6-BA/NAA植物生长物质浓度配比对愈伤组织诱导、不定芽再生及生根的影响.另外,还测定了潮霉素选择压.结果表明:以子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织的最适培养基分别是MS+ 2.0 mg,/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA和MS+ 2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LNAA;诱导芽分化的最适培养基均为:MS+ 2.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,子叶的芽分化率高达93.5％;不定芽适宜的生根培养基为MS+0.1 m g/L NAA;子叶、下胚轴的潮霉素选择压分别以20、40 mg/L为宜.     

光皮桦叶片再生体系的建立

【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6 mg/L TDZ 的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05 mg/L NAA及不同质量浓度（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L）TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0 mg/L的NAA组成生根培养基,用于再生苗生根,筛选最佳生根培养基,建立光皮桦叶片再生体系。【结果】光皮桦无菌叶片诱导不定芽的最适基本培养基为MS培养基,其诱导的不定芽最多,且芽生长状况良好,颜色深绿;最适不定芽诱导分化培养基为：MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上叶片丛生芽诱导率可达到80.00%,平均不定芽数高达12.00个,且芽生长健壮,呈深绿色;最适再生苗生根培养基为：1/2MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上再生苗的生根率达100%,平均根数为14.5个,平均根长为11 cm,根较粗壮,基部无愈伤组织,且产生了很多毛细根。【结论】建立了光皮桦无菌苗叶片的高效再生体系。     

丽格海棠叶片优化培养高效再生体系的研究

以丽格海棠叶片为外植体,进行不定芽的诱导和植株再生试验研究,结果表明:叶切块可直接分化不定芽,以MS+6-BA2.0 mg/L+TDZ0.1 mg/L+NAA0.5 mg/L是较适合的分化培养基,分化率达100%,平均芽数8.1;不定芽增殖以MS+6-BA 1.0 mg/L+KT0.5 mg/L+NAA0.2 mg/L效果较好,平均增殖倍数为12.2左右,生根培养基以1/2MS+NAA0.1 mg/L+IBA0.3 mg/L效果较好,平均生根数为4.4条左右,生根率为100%;瓶苗移栽于森林土∶草碳=(1∶1)的基质中生长良好,成活率达98%以上.     

何鲁牵牛的组培快繁研究

[目的]建立何鲁牵牛的组培快繁体系,为其规模化生产提供理论依据。[方法]以何鲁牵牛茎段为外植体,研究何鲁牵牛不定芽增殖和生根的最适培养基。[结果]何鲁牵牛在WPM+0.3 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA+0.1 g/L活性炭的启动培养基上成功诱导腋芽抽出,将腋芽转接到WPM+0.3 mg/L 6-BA+0.1 g/L活性炭培养基上进行不定芽的增殖,增殖率达4.30;在WPM+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+0.1 g/L活性炭培养基上生根率较高,可达90%。[结论]该研究建立了何鲁牵牛的组培快繁体系,有利于何鲁牵牛种质资源保护和工厂化生产。     

甘菊下胚轴离体再生体系的建立

以甘菊下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导不定芽分化,建立了甘菊下胚轴高效再生体系,为甘菊遗传转化体系的建立奠定了基础。结果表明:将甘菊种子播种于MS培养基上,置于黑暗条件下培养7 d可以迅速获得大量下胚轴;下胚轴在MS+1.0 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L 6-BA的培养基上培养15 d后,愈伤组织形成率最高为8666%,愈伤组织呈淡黄色,大小一致;将愈伤组织转接到MS培养基中培养30 d左右即可分化不定芽,不定芽分化率达25.50%,平均每个外植体产生不定芽数目为4.25个;不定芽在添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培养基中培养15 d后,生根率达到100%。生根试管苗出瓶后,经过适宜培养,均可以获得健壮的开花植株。      

黄瓜离体培养植株再生技术及影响因素分析

以3个不同的黄瓜(Cucumbis sativus L.)品种作为试验材料,研究了不同苗龄外植体和激素组合对黄瓜离体再生的影响.结果表明,黄瓜离体再生最适外植体苗龄为5～6 d,苗龄太小或太大都不利于不定芽的诱导发生;激素在调控诱导不定芽方面起着决定性的作用,诱导不定芽分化的最适培养基为MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA+0.1 mg/L NAA,不定芽伸长后在MS+30 g/L,蔗糖+7 g/L琼脂+0.2 mg/L IAA+0.1 mg/L NAA的生根培养基上诱导不定根效果最佳.本试验条件下黄瓜植株再生率为76%.     

大青杨再生体系的优化

采用正交试验设计,研究不同培养基和不同激素质量浓度配比对大青杨无菌苗叶片植株再生体系的影响,优化大青杨植株再生体系。结果表明:对大青杨不定芽诱导的影响最大为激素NAA,其次是培养基类型,最后是激素6-BA;不定芽增殖的影响最大是NAA,其次是培养基类型,最后是6-BA;对丛生苗生根的影响最大是激素类型,然后是培养基类型;培养基类型和激素的质量浓度对大青杨再生体系有着较明显的影响。最适宜大青杨分化的培养基为:WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,诱导率达100%;最适宜大青杨丛生芽增殖的培养基为:MS+0.05 mg/L 6-BA+0.01 mg/L NAA,芽健壮;最适宜大青杨生根的培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA,经过14 d生根,生根率达100%。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。     

白玉龙火龙果不同外植体的离体培养

【目的】研究白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节的不定芽诱导及茎段增殖技术,为白玉龙火龙果的品种改良及快繁育苗提供技术支持。【方法】以白玉龙火龙果种子培育的无菌苗为材料,采用正交试验设计分析不同培养基、不同植物生长调节剂与浓度及其组合对白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节不定芽诱导及茎段增殖与生根的影响。【结果】白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节均能直接诱导不定芽发生。其中,16个正交处理均能诱导子叶节不定芽发生,其最优诱导培养基为WPM+0.50 mg/L TDZ+0.50 mg/L CPPU+0.05 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,诱导率为87.1%~100.0%;子叶仅1个处理未能诱导出不定芽,最高诱导率为36.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.50 mg/L TDZ+0.05mg/L CPPU+2.00 mg/L 6-BA+0 mg/L NAA;下胚轴仅5个处理能诱导出不定芽,最高诱导率仅3.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L CPPU+1.00 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA。茎段去顶处理有利于腋芽的诱导萌发,去顶处理的最大增殖系数为4.2,不去顶处理的最大增殖系数为3.1,其最优增殖培养基为WPM+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA。NAA处理能促进茎段生根,适宜的生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA,生根率达100.0%。【结论】不同基本培养基、植物生长调节剂与浓度及其组合均能诱导白玉龙火龙果子叶、下胚轴和子叶节不定芽发生及茎段芽增殖和不定根产生。其中,不定芽诱导以子叶节最易诱导发生,其次为子叶,下胚轴较难;茎段芽增殖和不定根诱导均较容易。     

红叶石楠离体培养与高效再生体系建立

以红叶石楠(Photinia×frasery)带芽茎段、叶片为外植体,对其启动培养、叶片愈伤诱导与分化、芽增殖、生根培养及试管苗驯化等技术进行了较为系统的研究,建立了红叶石楠离体培养的高效再生体系。结果表明,幼茎启动培养适宜培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+GA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,诱导率达63.3%;叶片愈伤诱导适宜的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,愈伤诱导率达86.0%;愈伤分化不定芽的适宜培养基为N6+6-BA1.5mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,诱导率达21.6%,增殖率为1.4倍;芽增殖培养适宜的培养基为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.3mg/L+GA0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,最高增殖率达6.1倍;生根培养方法为用25mg/LNAA溶液浸泡0.5～1.0h后接种于1/2MS培养基中,生根率达93.4%以上;试管苗驯化的适宜混合基质为泥炭∶珍珠岩=3∶1,成活率可达96.7%。     

‘宏绿1号’辣椒离体培养与植株再生体系的建立

【目的】建立高辣度辣椒的高效离体培养再生体系,为其工厂化育苗生产奠定基础。【方法】以云南宏绿辣素有限公司选育的高辣度辣椒品种宏绿1号种子为试材获得无菌外植体,采用单因素试验和正交试验设计对基本培养基、芽诱导分化、增殖、生根培养及移栽等影响因子进行研究。【结果】不定芽诱导的适宜基本培养基为MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂;筛选出MS+2.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+5 mg/L AgNO3为不定芽分化的最佳培养基,分化率达93.3%;在MS+5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基上进行不定芽茎伸长诱导,伸长率可达100%;最适生根培养基为B_5+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,生根率达100%,炼苗移栽后成活率可达98.0%。【结论】建立了该辣椒品种高效的离体快繁培养技术体系。     

退化非洲菊的根段组织培养与植株再生

【目的】开展退化非洲菊根段的组织培养和植株再生研究,旨在为恢复其退化性状,实现优良品种的可持续利用提供技术保障。【方法】以退化非洲菊瓶苗的不同长度根段作为外植体,以MS为基础培养基,研究不同激素及其配比对不定芽分化、增殖和组培苗生根的影响。【结果】最适宜根段长度为0.5 cm;适合不定芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L,分化率为48.3%;不定芽增殖最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L,增殖倍数为5.07,且在此条件下,不定芽以较高倍数增殖的同时保持旺盛的生长势;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L+蔗糖15~20g/L,第20天时生根率达到97.8%,根系粗壮较整齐且生长较快。【结论】建立了以根段为外植体的非洲菊最佳组织培养体系,在该体系下不定芽分化率、增殖倍数高,组培苗生根情况好。