犬新孢子虫病

正犬新孢子虫病是新发现的一种致死性原虫病。由犬新孢子虫感染寄生于畜主体内引发的。病畜主要表现脑炎、肝炎、持续性肺炎等病变。怀孕母畜流产、死胎,新生儿四肢运动障碍和神经系统疾病。     

视网膜小胶质细胞的研究进展

视网膜小胶质细胞可存在于视网膜的外核层、外丛状层、内丛状层、神经节细胞层和神经纤维层。小胶质细胞具有“双刃剑”的功能,许多视网膜疾病的发展和转归与小胶质细胞有着密切的关系,使其成为近年来眼科领域研究的热点。本文就视网膜小胶质细胞的功能及其与常见的多因素眼科疾病的关系的研究进展做一综述。     

菌毒清对小鼠免疫细胞活性的影响

为探讨新型纯中药口服液制剂——菌毒清对小鼠免疫细胞活性的影响,将小鼠分成4组,分别是1.5%、1.0%、0.5%菌毒清处理组和空白对照组(CK),饮水给药7d,测定菌毒清对小鼠T淋巴细胞的增殖、抗体生成细胞数量(PFC)以及单核巨噬细胞吞噬能力的影响。结果显示,与对照组相比,在T淋巴细胞增殖试验中,1.5%、1.0%菌毒清处理组能显著促进T淋巴细胞的增殖,但0.5%菌毒清处理组影响不明显;在抗体生成细胞数量(PFC)试验中,1.5%、1.0%、0.5%菌毒清处理组都能显著促进抗体生成细胞数量;在单核巨噬细胞吞噬能力试验中,1.5%、1.0%菌毒清处理组能显著促进单核巨噬细胞的吞噬能力,而0.5%菌毒清处理组作用不明显。说明菌毒清对小鼠的免疫细胞活性具有增强作用。     

红松籽粕蛋白酶解物对受试小鼠NK细胞活性的影响

以雄性ICR小鼠为受试对象,以4种不同分子量松籽粕蛋白酶解物为受试物,以YAC-1细胞为模型,综合分析了4种松籽粕蛋白酶解物对小鼠NK细胞活性的影响情况。研究结果表明,与去离子水受试组相比,4种不同分子量的松籽粕蛋白酶解物均可增强受试小鼠NK细胞活性P0.01),且对受试小鼠体重、饮水、摄食的影响无显著差异(P0.05);对于小于1 kDa的红松籽粕蛋白酶解物对受试小鼠NK细胞活性影响程度最大。本研究能够为后期开发红松籽免疫活性蛋白产品的开发提供了研究基础。     

犬新孢子虫免疫相关蛋白筛选及其生物信息学分析

利用新孢子虫感染小鼠血清对新孢子虫c DNA表达文库进行SEREX筛选,获得的阳性克隆经测序后进行Blast分析,并利用生物学软件对其编码的蛋白结构进行预测。结果显示,经筛选共获得了4个阳性克隆序列,分别为新孢子虫表面抗原SAG1,两个假定蛋白(XM_003882171.1)和(XM_003882600.1),以及一个未命名蛋白(XM_003885351.1)。研究共获得了4个新孢子虫免疫相关蛋白,为新孢子虫诊断及其疫苗研究等研究奠定了基础。     

细胞型朊蛋白在BV2小神经胶质细胞体外激活中的作用

【目的】研究细胞型朊蛋白对小神经胶质细胞不同激活方式的影响。【方法】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激BV2细胞,RT-PCR方法检测PrPC的mRNA表达量。SiRNA干扰将PrPC沉默,用上述因子刺激细胞,用RT-PCR和Western-blot检测相关参数。【结果】用IFN-γ、IL-4和IL-10分别刺激小神经胶质细胞后可导致PrPC的mRNA表达量下降;PrPC沉默后的小神经胶质细胞对IFN-γ刺激的反应应答减弱;PrPC沉默可以显著地改变由IL-4诱导的神经胶质细胞的激活表型;但是对IL-10诱导的小神经胶质细胞激活却没有影响。【结论】PrPC既能影响小神经胶质细胞从静止状态到激活状态的转换,也在小神经胶质细胞的经典激活和替代激活途径中发挥调节作用。     

小鼠子宫内膜细胞对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC转化与分泌活性的影响

【目的】探索小鼠子宫内膜细胞培养上清液对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monouclear Cells,PBMC)的转化及分泌活性的影响。【方法】采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附测定法(ELISA),分别研究小鼠子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)和基质细胞(Endometrial Stro-mal Cells,ESCs)培养上清液,对离体培养的小鼠脾脏淋巴细胞、山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood MonouclearCells,PBMC)的增殖转化及白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)和白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)分泌活性的影响。【结果】小鼠子宫内膜基质细胞和上皮细胞培养上清液,均可无种属差异地刺激小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC的增殖转化,同时抑制植物血球凝素(Plant hemaggluti min PHA-P)诱导的小鼠淋巴细胞和山羊PBMC分泌IL-2的活性,但对PHA-P诱导的IL-4分泌有促进或协同作用。【结论】EECs和ESCs通过影响小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PB-MC的增殖转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。     

比格犬神经垂体存在内分泌样细胞

透射电镜观察表明,比格犬(Beagle)神经垂体内除含大量的无髓神经纤维、神经纤维膨体(赫令小体)、神经胶质细胞和血窦外,还可分辨出少量的肥大细胞和内分泌样细胞。内分泌样细胞的主要特征是：胞质内含有大量高电子密度的小分泌颗粒,颗粒呈圆形,表面有膜包裹,直径约109—213nm,主要分布于一侧胞质内。     

神经介素U在体外对猪树突细胞活性及功能的影响

[目的]本文旨在探讨不同浓度神经介素U(NMU)对外周血单核源树突细胞(DC)刺激T淋巴细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响。[方法]采集小梅山猪外周血,用集落刺激因子(GM-CSF)和IL-4联合诱导外周血单核细胞形成未成熟树突细胞,再加入脂多糖(LPS)刺激获得成熟的树突细胞,同时观察DC形态。加入不同浓度(0.01、0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU并分别培养2、4、8和12 h后,收集细胞上清液,用ELISA法测定IL-4、IL-5和IL~(-1)3的浓度。加入不同浓度(0.1、1、10、100、1 000 nmol·L~(-1))NMU培养24 h后,收集细胞,用CCK-8试剂盒和细胞凋亡检测试剂盒分别检测DC刺激混合淋巴细胞时细胞的增殖和DC凋亡率。[结果]NMU(0.1~100 nmol·L~(-1))能够抑制未成熟树突细胞(i DC)的细胞凋亡(P0.01),且NMU与NMU+LPS作用效果相一致,10 nmol·L~(-1)NMU组与10 nmol·L~(-1)NMU+LPS组都能降低i DC凋亡,凋亡率分别为2.383%和2.360%,与LPS组相比,NMU+LPS组抑制i DC细胞凋亡效果极显著(P0.01),说明NMU与LPS协同发挥抑制i DC细胞凋亡作用;与对照组相比,0.1~100 nmol·L~(-1)NMU能极显著促进m DC分泌IL-5(P0.01)和抑制IL-4分泌(P0.01)。NMU对IL~(-1)3的影响呈现多样性,低剂量(0.01~0.1 nmol·L~(-1))NMU在2、4 h抑制m DC细胞分泌IL~(-1)3(P0.05),中剂量(1~10 nmol·L~(-1))NMU在2 h先抑制m DC分泌IL~(-1)3(P0.05),4 h后又促进其分泌(P0.05),高剂量(100~1 000 nmol·L~(-1))NMU则促进m DC分泌IL~(-1)3(P0.05)。经NMU诱导后,i DC和m DC均能促进T淋巴细胞增殖(P0.01)。[结论]在一定浓度范围内,NMU能够抑制猪树突细胞的凋亡,并提高其细胞活性和促进树突细胞刺激淋巴细胞增殖的功能,并能影响树突细胞细胞因子分泌,提示神经介素U参与了对猪免疫功能的调节。     

钼对小鼠黄嘌呤氧化酶活性的影响

钼是动植物必需的微量元素之一,摄入过多,会引起中毒,导致动植物的各种疾病。为探索长期钼暴露对动物血清中钼酶活性的影响,试验选取雌性小鼠40只和雄性小鼠20只(F_0代),适应5 d后,随机分成4组,将每组10只雌性和5只雄性小鼠雌雄分开饲养,自由采食基础日粮,饮水中加入不同剂量的钼(以Na_2MoO_4·2H_2O形式),分别是对照组(0 mg·L~(-1))、低钼组(100 mg·L~(-1))、中钼组(200 mg·L~(-1))、高钼组(400mg·L~(-1))。4周以后,雌雄合笼养,产仔后从每组仔鼠中随机选出雌性小白鼠30只和雄性小白鼠15只按原分组给予不同剂量的钼,8周后,再从每组中随机选取雌性小白鼠10只和5只雄性小白鼠合笼饲养。待其产仔,如此往复,使小鼠繁殖到第四代(F_3代)。对第三代(F_2代)、第四代(F_3代)小鼠进行眼球采血,采用紫外分光光度计测定血清中黄嘌呤氧化酶的吸光度值,采用SPSS 11.5统计学软件对数据进行统计分析,结果表明,钼暴露F_2代、F_3代小鼠与对照组相比黄嘌呤氧化酶活性显著降低(P0.05),且随钼暴露剂量的提高呈现递减趋势;同等剂量钼暴露下,黄嘌呤氧化酶活性呈现F_3代高于第F_2代的趋势,其中Mo-200组差异显著(P0.05)。     

牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析

[目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为阳性的质粒进行测序分析。[结果]PCR扩增犬新孢子虫IMP1基因大小为762 bp,克隆质粒经测序分析与GenBank（XM003879531.1）中IMP1基因的同源性为99.9%。[结论]该试验为犬新孢子虫IMP1基因的表达及后续研究奠定了基础。     

犬新孢子虫NcSRS2基因片段的克隆及原核表达

以含有犬新孢子虫NcSRS2基因的质粒pMD18-NcSRS2为模板,应用PCR方法扩增Nc-SRS2基因,将该基因片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,构建了重组表达质粒pGEX-Nc-SRS2,转化大肠杆菌BL21中并诱导表达。结果显示,克隆的基因片段长1100bp,SDS-PAGE、Western blotting分析显示,重组质粒pGEX-NcSRS2在大肠杆菌中得到了高效表达。     

PrP106-126对BV-2小胶质细胞NO含量影响及作用机制

朊蛋白多肽PrP106-126可激活小胶质细胞并产生活性物质。探讨PrP106-126作用于BV-2小胶质细胞对NO生成状况影响,从酶学角度检测其作用机制。在细胞培养液中加入50μmol.L-1PrP106-126,培养48 h后检测培养液NO含量,采用实时定量RT-PCR检测细胞内iNOs和nNOs在mRNA表达水平。结果表明,PrP106-126显著提高细胞培养液中NO含量(9.34倍,P<0.01),且iNOs和nNOs表达水平均极显著提高(11.60倍和4.36倍,P<0.01),从而为解释朊病发生机制提供基础数据。     

林蛙油活性肽对小鼠免疫功能的影响

以林蛙油蛋白双酶水解超滤后获得的2种不同分子质量区间的活性肽BPOR1及BPOR2为试验原料,体外通过脾淋巴细胞增殖试验,分别加入不同剂量的BPOR1、BPOR2和Con A诱导,观察淋巴细胞的增殖情况,体内通过灌胃不同剂量BPOR1及BPOR2(100、300、600 mg·kg-1·d-1)30 d,以脾脏指数和胸腺指数的变化来观察2种活性肽对小鼠免疫器官的影响,利用流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群的变化情况。结果表明:BPOR1可明显地促进小鼠脾淋巴细胞增殖,且具有对Con A诱导的脾淋巴细胞增殖的协同刺激作用。2种混合肽对小鼠脾脏指数和胸腺指数比均有影响,并且都能影响小鼠CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的分布。可见,林蛙油活性肽能增加小鼠的免疫能力,且BPOR1的作用效果比BPOR2明显。     

脂质体转染对小鼠肠上皮细胞的影响

小鼠肠上皮细胞(IEC)是一种快速更新的细胞,脂质体转染法是哺乳动物细胞转基因常用的转染方法.以IEC为研究对象,从转染前后细胞形态、细胞周期及染色体倍性等方面的变化研究脂质体转染对IEC的影响.结果显示,脂质体转染后形态不正常的细胞增多;细胞周期中G0/G1期细胞比例显著增加(P＜0.05),以3代的细胞转染为例,由对照的62.4％增加到73.4％;S期同转染前相比显著降低(P＜0.05),由20.4％降低至13.2％;然而从染色体倍性看,统计分析表明转染前后没有显著差异.从以上几个方面可以看出,脂质体转染对IEC产生了一定的负面影响.     

细胞接种密度对小鼠iPS细胞诱导效率的影响

为研究小鼠胚胎成纤维细胞的接种密度对iPS(induced pluripotent stem, iPS)细胞诱导效率的影响,采用逆转录病毒载体法将Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc 4个基因或者Oct4,Sox2,Klf4 3个基因转入到携带有Oct4-EGFP转基因的小鼠胚胎成纤维细胞(Oct4-EGFP mouse embryonic fibroblasts, Oct4-EGFP MEF)中.感染病毒后的第4天将Oct4-EGFP MEF以500~128 000个/孔(每孔面积9.6 cm2)进行梯度铺盘,并分别于病毒感染后的第12天和第16天对4因子组和3因子组进行碱性磷酸酶染色和Oct4-EGFP阳性细胞比例检测.结果表明,Oct4-EGFP MEF感染病毒后的接种密度对于iPS细胞诱导效率存在较大的影响.4因子和3因子诱导产生iPS细胞的最佳接种密度分别为8 000个/孔和32 000个/孔.此外,通过逆转录病毒法,在最佳的接种密度下,可顺利地建立起iPS细胞系.     

双氢青蒿素对犬乳腺肿瘤细胞生物学特性的影响

犬乳腺肿瘤是犬类的一种常见肿瘤性疾病,目前治疗多为手术结合放、化疗法,但结果多易转移复发。双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是中药提取物,近年来其抗肿瘤作用越来越受到重视。为探求双氢青蒿素是否影响犬乳腺肿瘤细胞的侵袭及其影响机制,本试验取对数增长期状态相同的犬乳腺肿瘤细胞CHMm,使用低(5μM)、中(10μM)、高(20μM)浓度DHA处理并分别培养24,48,72h。收集各组细胞,使用CCK-8法检测细胞活性;利用细胞划痕试验检测细胞迁移性;利用transwell检测细胞侵袭性;利用CCK-8检测细胞毒性。结果表明:DHA对CHMm细胞抑制率呈明显药物浓度依赖性。细胞划痕试验检测细胞迁移速率结果表明,相同培养时间,与空白对照组相比,低、中、高试验组对CHMm细胞迁移性抑制作用效果极显著(p0.01)。各组组间比较,DHA对细胞迁移性抑制影响差异极显著(p0.01)。DHA对CHMm细胞迁移性抑制呈明显的药物时间、浓度依赖性。细胞侵袭试验检测细胞侵袭性结果表明,相同培养时间,与空白对照组相比,低、中、高试验组穿透基底膜着色细胞个数显著增多,说明DHA对CHMm细胞侵袭性抑制效果极显著(p0.01),组间比较,不同DHA作用浓度效果差异显著(p0.05)。相同DHA作用浓度,随着培养时间的增加,细胞侵袭性降低,效果显著(p0.05)。细胞毒性结果表明,相同培养时间,与空白对照组相比,低、中、高试验组对CHMm细胞抑制性影响效果极显著(p0.01)。各组组间比较,DHA对细胞抑制性影响差异极显著(p0.01)。综上所述,DHA对犬乳腺肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭作用具有显著抑制作用,且随着DHA作用浓度增加和时间增长,抑制作用增强,呈浓度时间依赖性。     

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的 观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果 湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）,且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论 百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。     

人参三肽对脂多糖诱导小胶质细胞一氧化氮释放的保护作用

本研究考察了人参三肽(PGP3)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞炎症的抑制作用。利用MTT法观察人参三肽(0.1,1,10,100μM)对细胞存活率的影响;Griess法检测一氧化氮(NO)的释放;酶联免疫法检测TNF-α的水平;并利用试剂盒检测了超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平。结果发现人参三肽在不影响细胞存活率的情况下,减少了活化小胶质细胞N0和TNF-α的释放,并提高了抗氧化水平。提示人参三肽可能通过提高抗氧化能力抑制LPS诱导的BV一2小胶质细胞NO释放,发挥抗炎作用。本研究为进一步开发人参治疗神经退行性疾病提供理论依据。