江苏省河蟹主养区微孢子感染情况调查报告

2015年7月江苏省兴化及周边盐城地区河蟹养殖大范围爆发河蟹肝胰腺坏死病,经调查研究确认为微孢子虫感染。采用PCR的方法对江苏省河蟹主要养殖区养殖塘口进行抽样调查,对所采集的河蟹标本进行微孢子虫感染情况调查。结果表明:抽样的八个河蟹主要养殖区,均有微孢子虫感染情况,其中以兴化和盐城的河蟹微孢子虫感染情况最为严重。     

鱼类基因组DNA提取方法的优化及PCR扩增

以海水鱼军曹鱼为材料,分别采用4种不同处理方法———经典蛋白酶K法、CTAB法、改良SDS法及优化的一步法(ROSE)等提取基因组DNA,通过紫外分光光度计测定OD260/280值、琼脂糖凝胶电泳检测,结果显示这4种方法均可以获得较高质量的基因组DNA,该基因组DNA用于目的基因的PCR扩增,均能得到PCR扩增的特异条带。改良SDS法及优化的一步法更加方便、快捷,而且成本低廉。     

甲壳动物微孢子虫的研究进展

微孢子虫是一类细胞内专营寄生生活的微生物。它种类多样,寄主范围广泛。本文综述了目前发现的甲壳动物微孢子虫的分类、生活史、微孢子虫病的现状、危害及防控的研究进展,以期为虾蟹养殖中有关微孢子虫病防控提供参考。     

西施舌基因组DNA的提取及其RAPD反应条件的优化

通过实验比较获得了一种高效、简便的西施舌基因组DNA的提取方法,以该法提取的基因组DNA为模板,对西施舌RAPD分析中的DNA模板浓度、镁离子浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶浓度进行了研究,初步确定了适于西施舌RAPD分析的最佳反应体系:25μL反应体系中,含模板DNA 25 ng,10×PCR缓冲液2.5μL,dNTPs 0.3 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,引物15 ng,Taq DNA聚合酶1.5U。     

中华绒螯蟹微孢子虫全基因组分泌蛋白的预测分析

本试验运行真核生物分泌蛋白预测流程EuSecPred 2.0在中华绒螯蟹微孢子虫全基因组范围内预测分泌蛋白,同时分析分泌蛋白的序列特征,注释功能.结果表明,分泌蛋白序列长度大多为30～300 aa;信号肽长度为11～23 aa;信号肽切割位点处主要由疏水性氨基酸组成;对预测所得蛋白质功能的注释,发现了多种关键蛋白,如血...     

中华绒螯蟹微孢子虫研究进展

微孢子虫是专性细胞内寄生的真核生物,有着广泛的宿主。中华绒螯蟹微孢子虫可以引起中华绒螯蟹微孢子虫病,因此而受到重视。本文简要综述了中华绒螯蟹微孢子虫的生物学特性,检测方法以及中华绒螯蟹微孢子虫病的研究现状,以期为有效防治河蟹微孢子虫病提供参考。     

鱼类血液基因组DNA提取方法优化

The genomic DNA extracted from frozen whole blood of rainbow trout with methods of chloroform-potassium acetate, rapid genomic DNA extraction （RGDE） , improved RGDE, traditional phenol-chloroform and DNA reagent kit respectively, and detected by agarose gel electrophoresis. The results showed that mothode of improved RGDE can obtain better genomie DNA of fish. Then, the effect of extracting with improved RGDE methods were compared by ultraviolet spectrophotometric method with other mothods such as traditional phenol-chloroform from blood or muscle and DNA reagent kit from blood. The results showed that the average concentration of DNA extracted with method improved RGDE was 1 050 ng/μL, and was very significant higher than that by DNA kit or by phenol- chloroform, and the average output of DNA was 1 575μg/mL, and the rate of A260/A280 was between 1.65 - 1.97. It only spent 2 hours to extract DNA with the method of improved RGDE, and there were many obvious merits such as quick speed, low cost, no pollution and no using specific installations and so on, and to amplify by random primers, the rusuhs was stable,and the electrophoresis banding was clear.     

微生物制剂对河蟹育苗水质控制作用的研究

通过在河蟹(Eriocheir sinensis)育苗池中添加微生物制剂调控水质,降低育苗过程中的用药和换水量,提高幼体的变态率.在试验组中分别添加光合细菌和芽孢杆菌及二者混合制剂,与批次的对照池进行比较.试验组的水质状况均好于对照组,幼体变态率平均提高了20%,抗生素等药品使用量平均减少85%,病害发生率平均降低31%,对照组的换水率为485%,而微生物制剂处理组均为150%,平均减少换水量56%,生产成本平均降低21%.微生物制剂在河蟹育苗中能有效控制氨氮等有害物质,降低换水成本,减轻环境污染.     

微生态制剂对河蟹养殖成活率的影响

为了进行河蟹生态健康养殖技术的示范推广,研究了一种微生态制剂对河蟹养殖池塘水质及河蟹成活率的影响。结果显示,使用含浓缩复合芽孢杆菌的微生态制剂(主要成分为枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌)的试验池水质优于对照池。与对照池相比,水体透明度增加26.1%,溶解氧降低22.6%,pH下降5.5%,电导率下降26.0%,氨氮含量降低75.1%,亚硝酸盐含量减少51.4%,河蟹养殖成活率提高了11.5%,河蟹养成规格提高25.0%。研究表明,浓缩复合芽孢杆菌微生态制剂对养蟹池塘的水质具有一定的净化效果,并可通过调节河蟹免疫系统减少病害发生,提高河蟹养殖成活率。     

甲壳动物幼体消化酶研究进展

通过研究近年来国内外学者关于甲壳动物幼体消化酶方面的研究现状,发现目前已测定出甲壳动物幼体消化酶的种类主要有：蛋白酶、胰蛋白酶、羧肽酶A、羧肽酶B、氨肽酶、胶原酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、酯酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、几丁质酶、麦芽糖酶、蔗糖酶、昆布多糖酶等种类,初步归纳了甲壳动物幼体主要消化酶的分子量、最适pH和最适温度;分析了幼体发育过程中消化酶活力变化模式以及与食性的关系,并采用淀粉酶/蛋白酶活力（A/P）比值或淀粉酶/类胰蛋白酶（A/T）比值作为甲壳动物幼体的食性指标;观察了幼体消化器官的发育,阐明幼体消化酶的合成与分泌不仅由遗传控制、中肠腺发育程度等因子决定,而且还与饲料的营养水平有关,提出采用幼体消化酶对饲料组成的适应性研究幼体营养需求的新途径.[中国水产科学,2006,13（3）：492-501]     

Development of In situ hybridization and real‐time PCR assays for the detection of Hepatospora eriocheir,a microsporidian pathogen in the Chinese mitten crab Eriocheir sinensis

A microsporidian parasite, Hepatospora eriocheir, is an emerging pathogen for the Chinese mitten crab Eriocheir sinensis. Currently, there is scant information about the way it transmits infection in the crustacean of commercial importance, including its pathogenesis, propagation and infection route in vivo. In this study, chromogenic in situ hybridization (ISH) and quantitative real‐time PCR (qPCR) assays were developed to address this pressing need, and we provided an advance in the detection methods available. Pathogens can be seen in situ with associated lesions using ISH. Positive hybridization signals were noted inside the epithelial cells of the hepatopancreas, and putative free parasite spores were observed within the tubule lumen, which were associated with lesions detected by electron microscopy and haematoxylin and eosin (H&E) analysis. qPCR allows the determination of parasite loads in infected tissues, which is important for understanding disease progression and transmission. The hepatopancreas displayed the biggest statistical copy numbers among different tissues of infected crabs, confirming a tissue‐specific pathogen infection characteristic. The qPCR assay also proved to be suitable for the diagnosis of asymptomatic carrier crabs. Combination of the two methods could facilitate the study of H. eriocheir infection mechanism in E. sinensis, enhance the early diagnosis of the pathogen and improve the management of microsporidian diseases in commercial crustaceans.     

盐度对黄鳍鲷幼鱼消化酶活性的影响及消化酶活性的昼夜变化

研究了盐度对黄鳍鲷幼鱼主要消化酶(蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶)的影响及消化酶活性的昼夜变化。实验设计5、10、15、20、25、30等6个盐度梯度组。结果表明,蛋白酶、脂肪酶的比活在盐度为25时最高,而淀粉酶的比活在盐度为20时最高。各种消化酶在盐度20~30时消化酶比活的平均值要明显高于5~15时消化酶的平均值。对黄鳍鲷消化酶比活昼夜变化的测定表明,蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶比活的最高值分别在14∶00、20∶00和18∶00,最低值分别是12∶00、10∶00和6∶00。     

水产动物饲用酶制剂的研究现状

本文综述了主要饲用酶制剂的种类，纤维素酶、木聚糖酶、植酸酶及复合酶在水产饲料中的应用研究现状，分析了饲用酶制剂在水产饲料中应用存在的问题。     

盐度对点篮子鱼消化酶活性的影响

以自然海水组(盐度30～32)为对照,研究了20、10、5三种盐度对点篮子鱼(平均体重86.09 4-17.99g,平均全长13.90±1.53 cm)幽门盲囊、肠、胃和肝脏中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活力的影响.结果表明:第24天盐度20的点篮子鱼幽门盲囊蛋白酶活力显著低于对照组(P<0.05);第24天和第48天,在同...     

盐度对施氏鲟幼鱼消化酶活力的影响

研究了盐度对施氏鲟幼鱼消化酶活力的影响.将施氏鲟(Acipenser schrenckii Brandt)幼鱼[初始体长(24.95±1.89)cm,初始体质量(117.80±16.72)g]分别在淡水(盐度0)、盐度10、盐度25条件下饲养10 d,检测不同盐度下施氏鲟幼鱼消化器官(幽门盲囊、瓣肠、十二指肠、胃和肝脏)蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力.结果表明:(1)在相同盐度条件下,不同消化器官中同种消化酶活力高低顺序不同.在不同消化器官中蛋白酶活力(淡水和盐度25时)及淀粉酶活力(淡水时)由大到小依次为幽门盲囊、瓣肠、十二指肠、胃和肝脏;蛋白酶活力(盐度10时)及淀粉酶活力(盐度10和25时)由大到小依次为瓣肠、幽门盲囊、十二指肠、胃和肝脏;在淡水和盐度10时脂肪酶活力由大到小依次为瓣肠、十二指肠、胃、肝脏和幽门盲囊:在盐度25时脂肪酶活力由大到小依次为瓣肠、十二指肠、肝脏、胃和幽门盲囊.(2)同种消化器官中不同盐度条件下同种消化酶的活力不同.幽门盲囊、十二指肠、胃和肝脏中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力均在淡水中最高(P<0.05),盐度25中最低,说明盐度对以上消化器官中3种消化酶均具有抑制作用;瓣肠中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的活力均在盐度10下最高(P<0.05),说明一定的盐度对瓣肠中3种酶具有激活作用,但盐度过高则会抑制这些酶的活性.     

虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响

本实验以初始体质量为(4.88±0.90)g、体长为(4.85±0.32)cm的红小丑鱼(Amphiprion frenatus)为养殖对象,研究饲料中添加0(对照组)、2‰、4‰、6‰、8‰的虾青素对红小丑鱼消化酶活性的影响。本试验每组3个重复,每个重复6尾鱼,饱食投喂2次/d(投喂时间为08∶30和14∶30),试验周期为20 d。结果表明:添加虾青素组的红小丑鱼胃肠消化酶活性均高于未添加虾青素组,当虾青素添加量为4‰时,红小丑鱼前肠蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及后肠淀粉酶活性达到最高(P0.05);当添加量为6‰时,其胃脂肪酶和淀粉酶活性最高(P0.05);当添加量为8‰时,其胃和后肠的蛋白酶以及后肠脂肪酶的活性达到最高(P0.05)。因此,在饲料中添加4‰~8‰的虾青素能够较有效地提高红小丑鱼消化器官的消化酶活性。     

海水养殖鱼类消化酶研究进展

综述了海水养殖鱼类消化酶活性研究的以下三方面：（1）消化酶活性的研究,内容包括消化酶的活性分布,温度、pH、外界环境及季节变化对消化酶活性的影响;（2）不同生长阶段消化酶活性的变化,内容包括与仔鱼生长发育相对应的消化酶形成的时间,稚鱼、幼鱼在生长进程中,消化酶的变化规律;（3）鱼类的食物组成对消化酶活性的影响,内容包括饲料的种类和性质,以及饲料不同成分对鱼类消化酶的分泌、活性的影响,进而对饲料利用率的影响。本本对海水养殖鱼类消化酶的活性进行了较为系统的综述,为海水养殖鱼类饲料的开发提供参考数据。     

罗非鱼皮营养成分分析及鱼皮明胶提取工艺的探讨

以罗非鱼皮为原料,对其营养成分进行分析,并通过正交试验方法探讨罗非鱼皮明胶的提取工艺,同时对明胶的理化及微生物指标进行分析。结果表明,罗非鱼皮中粗蛋白含量高达33．14％,其中胶原蛋白含量为27．8％,占其粗蛋白的83．9％;鱼皮提取明胶的适宜工艺条件为在2．5％（W／V）NaOH溶液中浸泡3．5h,然后在0．02％（V／V）HCl浸泡约3h,熬胶温度为55℃,提取得率为26．5％;所得鱼皮明胶的凝胶强度达468g,粗蛋白含量为82．46％,菌落总数为1．3×10^5CFU·g^-1,大肠菌群结果报告为阴性。     

斑点鳟(Oncorhynchus mykiss)幼鱼消化酶活力的昼夜变化

以斑点鳟(Oncorhynchus mykiss)幼鱼为研究对象,探讨了胃、前肠、中肠、后肠、肝胰脏中4种消化酶活力的昼夜变化规律。结果表明:胃蛋白酶活力在胃组织中活性最大,达到26.63 U,前肠、中肠、后肠和肝胰脏中活力值接近于0,24 h内无显著变化(P0.05)。胰蛋白酶活力24 h内呈波动变化,胃和肝胰脏中具有较高的活性,最大值分别能达到2 520.57 U/mgprot和2 143.53 U/mgprot,胃中17:00、9:00时出现峰值。肝胰脏中,胰蛋白酶活性显著高于其他组织,17:00时达到最大值。胃中的淀粉酶活性最低,且变化幅度不大,肝胰脏中的淀粉酶活性值最大,最大值达到0.57 U/mgprot,24 h内,总体变化较平稳,13:00和1:00时淀粉酶的活性于其他时间具有显著差异(P0.05)。胃和肝胰脏中脂肪酶具有较高的活性,且在白天时活性较大,前肠、中肠和后肠中活性均呈较低的水平。4种消化酶均呈现出一定的昼夜节律。