香菇gpd启动子的克隆及序列分析

以香菇L26菌株为材料,采用Promoter predictions、Web Signal Scan Program及Gardiner-Garden方法对gpd扩增序列进行启动子及Cp G岛预测,MEGA4软件构建与其它食用真菌系统发育树。结果发现该序列(Gen Bank:KF972468.1)具有TAT-box、CAAT-box、IBOXCORE和Cp G岛等特征位点,与Gen Bank中多个食用真菌gpd启动子序列同源性较高,基本证实该序列为香菇gpd启动子,可为转基因研究等提供参考。     

姬松茸(Agaricus blazei Murrill.)gpd启动子的克隆及其序列分析

[目的]对姬松茸中分离的gpd启动子片段进行序列分析。[方法]根据报道的gpd启动子序列设计合成1对引物,以姬松茸基因组DNA为模板,采用PCR扩增法克隆得到了2条DNA特异性片段,并利用启动子信号扫描和启动子预测程序对2条序列的片段启动子区和转录结合位点进行分析。[结果]测序结果表明,2条序列分别为372bp和614bp,分别命名为J-gpd 1和J-gpd2,GenBank登陆号分别为：EU220746和EU220747;J-gpd 1有3个,J-gpd 2有4个核心启动子区;2条序列不仅具有基本启动子作用元件CAATBOX和TATABOX外,还具有多个重要作用元件,如CGCGBOX、GATABOX、ASF-motif、W-BOX、TGACGT-motif和GTGA motif等。利用TFSEARCH ver．1．3分析表明,2条序列还舍有多个转录因子结合位点,包括GCR1、ADR1、HSF、ABF1和RAP1等。[结论]研究推测,2条序列所启动的基因具有较高的多样性和准确性。     

草菇gpd启动子的克隆及表达载体的构建

从草菇基因组中克隆内源强启动子,为草菇基因工程育种提供启动子元件材料。［方法］采用PCR技术从草菇基因组DNA中克隆gpd启动子片段,利用生物信息学手段对其序列特征和调控元件进行分析,并构建表达载体。［结果］从草菇基因组中克隆出2条特异gpd启动子片段,大小分别为1056和614bp;成功构建了分别以这2条启动子片段驱动的、以gfp基因为报告基因的2个表达载体。［结论］该研究为进一步利用基因工程手段培育品质优良的草菇新菌株奠定了基础。     

棉花种子特异性启动子的克隆及序列分析

启动子是基因表达的重要顺式调控元件,在基因工程中,种子特异性启动子可以调控外源基因在种子中特异表达,提高表达效率,增强转基因的效果。本试验根据棉花LEA蛋白D34基因序列设计引物,以海岛棉基因组DNA为模板,通过touch down PCR技术,获得D34基因的种子特异性启动子片段。测序结果表明该片段长1 384 bp,与已发表的D34基因序列相似度为94.87%。该片段除了含有启动子的基本元件TATA框、CAAT框外,还含有种子特异性启动子元件E-box、G-box、B-box、AACA基序等。此外,对其顺式元件做了生物学功能分析。     

根结线虫诱导型启动子RKNIP的克隆及序列分析

通过对烟草根特异性基因TobRB7调控序列的分析,构建了受根结线虫诱导的特异性表达启动子RKNIP的克隆载体,其中RKNIP500已于GenBank注册,注册号为DQ486886。模序分析表明,RKNIP500具有双向启动子的功能,而RKNIP300不具有启动子的功能,但存在大量与启动子功能相关的元件,特别是存在25个根特异性表达的元件。     

植物凝集素SMLII 基因启动子的克隆及序列分析

根据已克隆的丹参植物凝集素SMLII基因cDNA序列,利用染色体步移技术克隆出SMLII 启动子区序列,并进行生物信息学预测分析该基因的功能,结果得到了该基因上游1023 bp的启动子序列（GenBank AccessionNo: KF193867）。分析表明,在该序列中不但含有真核生物典型的核心启动子区TATA-box、CAAT-box,而且含有一些特有的上游启动子元件ABRE、ARE、ASF1MOTIFCAMV、HSE、IBOXCORE、WBOXATNPR1等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件。     

木薯MeSSSIV基因启动子克隆及序列分析

木薯是热带典型的高淀粉、抗逆、抗旱作物.可溶性淀粉合成酶(SSS)是植物淀粉合成过程中的关键酶之一.根据已发表的拟南芥SSSⅣ基因序列,通过同源比对从木薯AM560、KU50基因组中获得木薯MeSSSⅣ基因的cDNA序列以及该基因部分启动子序列,设计特异引物,从木薯栽培种KU50基因组DNA中克隆了MeSSSⅣ基因系列1068 bp(该序列包含978 bp的启动子调控序列及90 bp的基因编码序列).序列分析表明,启动子调控序中除含有典型的真核生物核心启动子区域外,还含有多个TATA-box、CAAT-box等启动子元件以及多种与脱水、激素和光响应相关的顺式作用元件,特别是发现CGACGOSAMY3、DOFCOREZM、SREATMSD、SURE等与糖信号相关的重要顺式元件,这些元件预示MeSSSⅣ基因的表达可能与糖信号相关.以上结果说明,MeSSSⅣ可能参与木薯多种代谢过程,其表达可能受多种调控因子的调节.     

胡萝卜sⅡ基因启动子克隆及序列分析

克隆胡萝卜直根特异性表达的液泡转化酶Ⅱ型同工酶(sⅡ)基因启动子序列,为实现外源基因在胡萝卜直根特异性表达做准备。从天红五寸参胡萝卜叶片中提取总DNA,采用PCR扩增方法获得sⅡ基因启动子序列,然后结合5'RACE实验方法和生物信息预测方法对sⅡ基因启动子进行序列特征分析。结果表明:从胡萝卜基因组DNA中PCR扩增得到预期大小的启动子片段,序列分析表明该启动子序列与已发表的序列具有99.6%的同源性;试验确定了该启动子的转录起始位点位于翻译起始位点上游26bp处的“A”;生物信息学预测该启动子的核心序列及上游增强子序列、抑制子序列、根特异性序列及受病原菌、损伤、干旱、ABA激素调控序列等顺式作用元件。成功克隆并序列分析了胡萝卜直根特异性表达的sⅡ基因启动子,为该启动子在植物基因工程中的应用奠定基础。     

家蚕中肠特异启动子BmAPN的克隆及活性分析

【目的】克隆和鉴定1个家蚕中肠特异启动子,为研究家蚕的免疫应答和应用研究提供新的工具。【方法】从家蚕品种大造中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆家蚕中肠特异表达基因BmAPN（GenBank登录号：BAA33715.1）的上游调控序列。利用此序列构建以EGFP为报告基因的转基因表达载体pBac[BmAPN-EGFP-SV40,3×P3-DsRed],通过显微注射获得转基因家蚕,在个体水平上检测启动子的活性。【结果】所克隆的BmAPN启动子长度为1 598 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕中肠特异表达,与内源基因BmAPN的表达特征一致。该启动子在家蚕幼虫时期活性相对较高,且在起蚕期的活性要明显高于眠蚕期,推测该启动子中的特异元件受激素调控。【结论】经克隆获得的BmAPN启动子为有活性的启动子,且为家蚕中肠特异启动子。     

百合LhTPS基因启动子的克隆及序列分析

为明确百合LhTPS基因的启动子序列特征,利用反向PCR技术和DNAMAN、PlantCARE等分析软件,对8个不同百合品种萜烯合酶基因LhTPS的启动子进行克隆和生物信息分析。结果表明:1)克隆得到的LhTPS基因启动子序列长度在1 376~1 414 bp,相似性为90.26%,核苷酸多态性位点404个,大于5 bp的插入缺失有6处;2)不同百合品种的LhTPS启动子序列均包括核心元件和应答元件,应答元件又分为生长发育、光响应、胁迫响应及激素响应4类,其中与MeJA反应相关的顺式作用元件(CGTCA-motif、TGACG-motif、MYC和MYB)所占比例最大;3)根据启动子序列信息,可将8个百合品种分为4组,即东方百合组、亚洲百合组、喇叭百合组和东喇百合组,分类结果与传统分类结果一致。综上,LhTPS基因启动子序列的首次获得,为日后进行LhTPS启动子活性和功能分析奠定了基础,也为阐明百合萜类挥发物形成的调控机制奠定了理论基础。     

鸡腿菇多糖发酵条件优化研究

研究鸡腿菇多糖发酵中碳源、氮源、pH、时间、温度对多糖积累的影响,结果表明:对发酵影响顺序为碳源＞氮源＞pH＞时间.通过正交优化试验确定了鸡腿菇多糖最佳发酵条件为玉米粉3%、蛋白胨0.3%、pH值6.0、温度22～24℃、时间5 d.     

鸡腿菇胞外多糖发酵条件的研究

以胞外多糖产量为指标对鸡腿菇(Coprinus comatus)的发酵条件进行研究.结果表明,其最佳培养基组成为:玉米粉3.0%,酵母粉1.0%,葡萄糖 2.0%,KH2PO4 0.20% ,MgSO4·7H2O 0.15%,VB1 15 mg·L-1;培养温度22℃,pH6.1,发酵时间为96 h.     

鸡腿菇非硫护色保鲜技术的研究

[目的]解决鸡腿菇的采后保鲜问题,延长其货架期。[方法]采用6种非硫护色剂对鸡腿菇进行护色处理。[结果]结果表明:氯化钠、柠檬酸、维生素C的护色保鲜效果较好,其中维生素C的护色效果与焦亚硫酸钠相当。复合护色剂中以"维生素C 0.12%+柠檬酸0.6%+氯化钠0.6%"的护色保鲜效果最好。鸡腿菇在护色液中的浸泡时间以20~30 min为宜,浸泡后可用清水漂洗菇体表面残留的护色液。保鲜膜采用密闭包装可以维持包装内的低氧高二氧化碳,有利于鸡腿菇的护色保鲜。[结论]该技术是一种很好的保鲜技术,但必须结合其他方法来控制鸡腿菇生长,才能获得理想的护色保鲜效果。     

毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(TMV)活性研究初报

【目的】为探讨毛头鬼伞多糖(Coprinus comatus)的生物活性,对毛头鬼伞多糖抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行测定,明确活性部位,为进一步分离纯化提供理论依据。【方法】从毛头鬼伞子实体和菌丝体提取多糖,并初步纯化,采用半叶法和叶碟法对抗病毒活性进行测定。【结果】毛头鬼伞多糖对TMV具有较强的体外抑制和抗病毒侵染作用,对TMV具有明显的体内抑制复制效果;在TMV接种前施用可以显著降低TMV侵染能力。【结论】毛头鬼伞多糖具有较好的抗TMV活性,为其进一步开发利用提供理论依据。     

鸡腿菇中多酚氧化酶性质及其抑制剂研究

[目的]为鸡腿菇的保鲜提供理论依据。[方法]从新鲜鸡腿菇中提取多酚氧化酶(PPO)的粗酶液,研究pH值和温度对鸡腿菇PPO活性的影响,分析其热稳定性,并探讨亚硫酸氢钠、抗坏血酸和柠檬酸3种抑制剂对鸡腿菇PPO活性的抑制作用。[结果]在强酸性和强碱性环境中,PPO都会失去活性。PPO酶活性随保温时间的延长呈降低趋势,说明PPO是一种热敏感性酶。3种抑制剂对鸡腿菇PPO活性均有抑制作用,其中NaHSO3的抑制作用最强,抗坏血酸和柠檬酸次之。[结论]在鸡腿菇的加工过程中,添加NaHSO3能有效降低PPO活性和防止褐变的发生。     

鸡腿菇子实体多糖提取工艺的优化

[目的]优化鸡腿菇子实体多糖的提取工艺。[方法]以水为浸提液,通过单因素试验研究了浸提温度（60、70、80、90℃）、浸提时间（2、3、4、5h）、料液比（1：10、1：20、1：30、1：4Jo）对鸡腿菇子实体多糖得率的影响,并采用正交试验对提取工艺进行优化。[结果]苹因素试验表明,最佳浸提温度、浸提时间和料液比分别确定为4h、90℃、1：30。正交试验表明,浸提温度对鸡腿菇多糖得率的影响最太,其次是浸提时间,液固比影响最小。通过对提取条件的优化,结合收益、成本等综合因素选出适合本地条件的优化工艺为：浸提温度90℃、浸提时间3h、料液比1：30。验证试验显示,在最佳工艺条件下提取的多糖得率达7．99％。[结论]该优化工艺的回收率高迭98％,说明工艺条件较稳定,适用于工业化生产。     

不同覆土出菇方式对鸡腿菇产量的影响

鸡腿菇具有不覆土不出菇的特性,覆土是鸡腿菇栽培的一个重要环节。研究了不同覆土方式对鸡腿菇出菇的影响,结果表明,不同覆土方式对鸡腿菇的出菇时间和产量都有较大影响,在不同处理间生物学效率存在较大的差异。     

酶解法提取鸡腿菇多糖的研究

[目的]为鸡腿菇多糖的生产提供有益的参考,拓宽鸡腿菇的食品应用价值。[方法]在单因素试验的基础上进行正交试验,确定酶解法提取鸡腿菇多糖的最佳工艺条件。[结果]温度、pH和水解时间3个因素对酶解法提取鸡腿菇多糖的影响依次为温度〉水解时间〉pH,但差别不大。鸡腿菇多糖提取的最佳工艺条件为：水解时间3.5 h,温度30℃,pH 3.0,纤维素酶1.0%。在该最佳方案下,鸡腿菇多糖提取率为17.1%。[结论]优化了酶解法提取鸡腿菇多糖的工艺。     

鸡腿菇模式化栽培技术研究进展

鸡腿菇是一种营养价值较高、市场前景广阔、栽培价值较高的珍稀食用菌。主要从品种选择、栽培季节、覆土技术、出菇方式、栽培原料配方等方面综述了鸡腿菇模式化栽培技术,并提出了鸡腿菇栽培产业化的发展方向。     

鸡腿菇单孢分离和单孢杂交的研究

[目的]杂交育种被应用在各个物种之间.选育高品质,高产量的菌种.[方法]单孢分离技术是杂交育种行之有效的育种手段之一,近年来国内已开展这方面的研究.试验利用简单的仪器,设计一种适合鸡腿菇孢子收集和单孢分离的方法.[结果]鉴定挑选出35个单核菌株进行配对杂交,经染色镜检、拮抗试验、瓶栽试验,获得48个杂交新菌株.[结论]应用单孢分离技术对鸡腿菇进行杂交行之有效.