两株能利用甲烷的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的分离和鉴定

分别从杭州华家池黄松田稻田土和浙江金华老黄筋泥稻田土中分离得到能利用甲烷的Z5 6 菌株和J2 6 菌株,通过形态特征、生理生化实验鉴定,初步认为 2菌株属于链霉菌属(Streptomyces)吸水类群(Hygroscopicus)的能氧化甲烷的菌株,暂命名为吸水链霉菌甲烷氧化菌株S.hygroscopicusstrainmethane oxidizingZ5 6 和S.hygroscopicusstrainmethane oxidizingJ2 6 。     

两株能利用甲烷的吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）的分离和鉴定

分别从杭州华家池黄松田稻田土和浙江金华老黄筋泥稻田土中分离得到能利用甲烷的Z_5-6菌株和J_2-6菌株,通过形态特征、生理生化实验鉴定,初步认为2菌株属于链霉菌属（Streptomyces）吸水类群（Hygroscopicus）的能氧化甲烷的菌株,暂命名为吸水链霉菌甲烷氧化菌株 S. hygroscopicus strain methane-oxidizing Z_5-6和S.hygroscopicus strain methane-oxidizing J_2-6。     

两种放线菌基因组DNA PCR模板制备方法的比较

[目的]比较制备放线菌基因组DNA PCR模板的两种方法液氮研磨法及TE煮沸法.[方法]以从河西走廊盐碱土壤中分离鉴定的8属16株菌为材料,包括糖丝菌属（Saccharothrix）Ⅳ23-3-4、类诺卡氏菌属（Nocardioides）Ⅴ22-5-1、原小单孢菌属（Promicromonospora）ⅨX5-4-3、小单孢菌属（Micromonospora）Ⅱ23-4-1、放线多孢菌属（Actinopolyspora）Ⅳ8-2-5、拟诺卡氏菌属（Nocardiopsis）Ⅱ8-4-3、链单孢菌属（Streptomonospora）DA01305、链霉菌属金色类群DA03401、链霉菌属金色类群DA01408、链霉菌属蓝色类群DA09140、链霉菌属金色类群DA01308、链霉菌属灰红紫类群DA05213、链霉菌属蓝色类群DA11417、链霉菌属粉红孢类群DA04401、链霉菌属灰红紫类群DA04402、链霉菌属球孢类群DA04307.对两种方法制备的PCR模板进行16S rDNA的扩增,PCR产物进行电泳检测.[结果]两种方法均能得到比较清晰的目的条带,但TE煮沸法简化了放线菌基因组DNA PCR模板制备的过程,可用于高通量放线菌PCR模板的快速制备.[结论]该研究为大批量菌株的快速鉴别和系统分类提供了有效的方法.     

西安市北郊污灌区土壤中抗铅链霉菌的多样性分析

从西安市北郊污灌区采集土样,用添加K2Cr2O75 μg·mL-1和青霉素2 μg·mL-1的高氏1号、HV和SC固体培养基分离到120株具有链霉菌特征的放线菌.采用浓度梯度法,用含Pb2+培养基对分离菌株进行筛选,得到50株抗铅链霉菌.在抗铅能力实验结果的基础上,选取14株抗性较强链霉菌代表菌株进行形态培养特征、生理生化和16S rDNA基因序列相似性等分析.结果表明,14株代表菌株可归为6个不同的颜色类群,其表型特征与生理生化性质和链霉菌相符合,在系统发育树上处于8个不同的进化分支.菌株HQ0031与已知链霉菌相似性差异较大,可能为链霉菌属内1个潜在新种.研究表明西安市北郊污灌区土壤中抗铅链霉菌具有丰富的多样性,可为重金属污染环境的生物修复提供有益的微生物资源.     

拮抗稻瘟病病菌放线菌Amy-627的筛选及鉴定

菌株Amy-627是一株从长白山地区分离纯化出的对22种植物病原真菌和3种致病细菌都有较明显抑制效果的放线菌,其抗菌谱较广,尤其对水稻稻瘟病病菌(Pyricularia oryzae)具有显著的拮抗作用。通过形态特征、培养特征、生理生化检测及抑菌谱等一系列比较。结果表明,发现该菌株与链霉菌属的吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的特征基本相符,通过16S rDNA序列比对同源性达99%。根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株暂归入吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)类。     

新疆13种荒漠植物根内生放线菌多样性及其抗菌活性筛选

以荒漠植物骆驼刺、铃铛刺、碱蓬、盐穗木、柽柳等13种植物的根为材料,利用SCA培养基分离其内生放线菌,通过菌株16S rRNA基因测序,分析荒漠植物内生放线菌物种多样性。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、细极链格孢菌、大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌为靶标,通过琼脂扩散法和平板对峙法开展抗菌活性筛选。从13种荒漠植物分离出533株内生放线菌,鉴定的361株,分布于6个目,7个科,9个属,77个种,另有3个潜在新种,其中链霉菌属为优势类群,冢村氏菌属与伦茨菌属首次从植物中分离得到。研究表明13种荒漠植物内生放线菌多样性有明显差异,骆驼刺内生放线菌最丰富,分离到6个属27个种,链霉菌属有20个种;老鹳草分离到的菌株数量最多,有3个属;铃铛刺分离到2个属,其中的链霉菌属有28个种;猪毛菜、盐穗木等植物只分离到链霉菌属。抗菌活性筛选显示80株放线菌有抗菌活性,其中链霉菌74株,拟无枝酸菌3株,拟诺卡氏菌、糖霉菌和链孢囊菌各1株。本研究为寻找新型抗菌活性化合物,为生物医药和生物肥料提供菌株来源。     

一株抗花生青枯病菌海洋放线菌的分类鉴定及其活性产物研究

从2 200多个海洋放线菌株中筛选得到菌株H41-26对花生青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)有较强的拮抗作用.通过菌株形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁化学组分及16S rDNA序列分析,初步确定菌株H41-26为链霉菌属金色( Aureus)类群中的新种-闸坡链霉菌(Streptomyces zhapoensis).采用硅胶柱层析和高效液相半制备的分离纯化技术,主要活性成分鉴定为放线菌素V.首次报道了放线菌素V对花生青桔病菌的最小抑制浓度为3.91 mg/mL,8％放线菌素V乳油稀释1000倍施药7d和10d后对花生青枯病的盆栽试验防治效果均在70％以上,具有较好的防治效果,为放线菌素V在植物病害防治方面的研究应用奠定了基础.     

吸水类群链霉菌的研究——Ⅰ.用扫描电子显微镜观察孢子丝和孢子形态

链霉菌的吸水类群是根据孢子成熟后,孢子堆自溶呈所谓“吸水现象”,使菌落表面形成褐黑、褐紫或黑色的粘性湿斑为唯一特征而建立起来的一个类群。这个类群所产生的抗生素类型比较多,特别是农用抗生素方面,如日本筛选的有效霉素,二重霉素,以及我国筛选的井冈霉素、农抗5102、内疗素等都是由这个类群的菌株所产生的,所以受到人们很大的重视。我们结合农用抗生素的筛选,将我室从教学和科研中逐年分离和累积起来的35株不同的吸水链霉菌进行系统研究。包括菌株的分类地位,抗菌范围和性能,素的类型等等。     

利用多相分类法鉴定瓜类枯萎病拮抗菌株HVG60

对分离自东北蔬菜保护地土壤的一株拮抗菌株HVG60进行了形态学特征、培养特性、生理生化特征分析以及分子生物学鉴定.结果表明,链霉菌HVG60菌落圆形,气丝稀疏不发达,顶端直线型、大环状或松散敞环螺旋状,基丝发达,多分支;聚类分析表明,菌株HVG60与教酒链霉菌、拒霉素链霉菌、美浓链霉菌、纳塔尔链霉菌和橄榄产色链霉菌的同源性均较高,达98%,但又有所差别,最终将菌株HVG60确定为链霉菌属的一个新种,命名为瓜类链霉菌.     

贵州矿区放线菌多样性及对汞的抗性

为探明贵州喀斯特重金属污染区域土壤放线菌多样性特征以及为其污染修复应用奠定基础,从贵州铜仁地区的25份土壤样品中,采用梯度稀释涂布法,利用3种处理方式、7种培养基分离放线菌;通过形态特征、16SrDNA基因序列分析结合生理生化特征鉴定放线菌;同时筛选重金属汞抗性菌株。结果从土样中共分离出56株典型放线菌菌株,经初步鉴定,分属于链霉菌属、孢囊链霉菌属、高温单孢菌属、线杆菌属、间孢囊菌属、诺卡氏菌属、小单孢菌属;其中链霉菌属放线菌占68%。筛选出了1株对汞有较高抗性(75mg·L~(-1))的放线菌菌株,优良耐受菌株的最大抗性约85 mg·L~(-1),菌株经鉴定为枝链霉菌Streptomyces rameus。共分离出56株,分属于7个属的放线菌菌株;筛选出1株重金属汞高抗菌株,经鉴定为枝链霉菌。     

瓜类枯萎病拮抗放线菌T8-41的鉴定

[目的]为阐明1株拮抗放线菌菌株的分类地位提供依据。[方法]以从东北地区蔬菜保护地土壤中分离的1株拮抗放线菌菌株T8-41为试材,分析其形态和培养特征、细胞壁成分和生理生化特性。经PCR扩增后,对其与相关菌株的16S rDNA进行同源性分析和聚类分析。[结果]拮抗菌株T8-41属于典型的链霉菌属菌丝形态。其细胞壁中含有L-DAP和甘氨酸,细胞壁类型为I型。该菌可利用D-木糖、L-鼠李糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、葡萄糖、D-甘露醇和肌醇,但不利用乳糖。可以初步鉴定为绿产色链霉菌。T8-41菌株的16SrDNA全长为1 465 bp,与绿产色链霉菌相似性达99%。[结论]链霉菌T8-41属于青色类群的绿产色链霉菌,可将其定名为绿产色链霉菌T8-41(S.viridochromogenes T8-41)。     

土壤放线菌分离与16S rDNA系统发育分析

为探讨燕山山脉土壤中可培养放线菌的物种多样性,建立该区域放线菌资源信息库,采用稀释涂布平板法对燕山山脉的26份土壤样品进行了放线菌的分离纯化,根据菌落表型共分离到1 055株分离物,并随机挑选其中200株进行初步鉴定。首先采用链霉菌属(Streptomyces)的特异引物对分离物DNA进行PCR扩增,从而快速鉴定分离物是否属于链霉菌属,然后对其余的分离物进行16SrDNA序列分析。结果表明,随机挑选的200株放线菌分属于19个属,其中哈马达菌属(Hamadaea)为我国首次报道。16SrDNA系统发育分析结果表明,菌株Y0450-41与哈马达菌属模式种的16SrDNA序列相似性为97.3%,是哈马达菌属的一个潜在新种;菌株Y0371-4与其系统发育关系最近已知种特殊链霉菌(Streptomyces specialis)的16SrDNA序列相似性为95.5%,可能代表着一个潜在的新属。     

新疆荒漠盐碱环境中抗动物病原菌的放线菌筛选与鉴定

【目的】从新疆荒漠地区特殊生境中,分离筛选对动物病原菌具有较高抑制活性的放线菌。【方法】采用皿内琼脂块法和发酵液滤纸片法,对新疆荒漠盐碱土环境中分离到的412株放线菌的拮抗性进行筛选,并对其中拮抗活性高的菌株进行形态特征、培养特征、生理生化特性及16SrRNA序列的分析鉴定,初步确定其分类地位。【结果】筛选结果显示:新疆地区荒漠土中39.6%的放线菌对所选的8种病原菌有拮抗作用,且随着靶标菌数的增加,拮抗比例减小;供试菌对革兰氏阳性菌的拮抗效果优于革兰氏阴性菌,对牛无乳链球菌Ⅰ、Ⅱ和猪金黄色葡萄球菌Ⅰ、Ⅱ的抑菌效果平均为26.0%和22.3%。通过初筛和复筛得到10株抑菌效果较好的拮抗性放线菌,经多相分类鉴定确定为链霉菌属的不同种,具体分类地位如下:XJ 6-2菌株为天蓝褐链霉菌(Streptomyces coeruleofuscus),XJ 1-5-10菌株为粪生链霉菌(Streptomyces fimicarius),XJ 2-9菌株为灰平链霉菌(Streptomyces griseoplanus),XJ 2-5-1菌株为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae),XJ 19-11菌株为变异链霉菌(Streptomyces variabilis),XJ 1202菌株为苍黄链霉菌(Streptomyces luridus),XJ 1625菌株为微黄绿链霉菌(Streptomyces flavidovirens),XJ 2-9-7菌株为库尔萨诺夫链霉菌(Streptomyces kurssanovii),XJ 617菌株为堆孢链霉菌(Streptomyces massasporeus),而XJ 1-6-5菌株的序列相似度在98%以下,可能为潜在新种,需要进一步鉴定。【结论】新疆地区荒漠土中存在大量拮抗性放线菌,并且获得了10株对动物病原菌有较高抑制活性的放线菌。     

济宁市土壤放线菌资源调查研究

从济宁市采集土样,采用高氏1号琼脂和淀粉铵琼脂两种培养基分离放线菌,按国内外通用方法进行鉴定,并对土壤放线菌主要属——链霉菌属的类群进行分析与鉴定。结果表明:同一样品在高氏1号琼脂培养基上分离得到的放线菌要高于淀粉铵培养基上的。放线菌组成中,链霉菌占绝大多数,达放线菌总数的70%以上,其次是小单孢菌属,马杜拉放线菌属和诺卡氏菌属;链霉菌类群的组成较复杂,主要为白孢类群和粉红孢类群。     

深海链霉菌拮抗香蕉枯萎病菌活性菌株的筛选及鉴定

为寻求防治香蕉枯萎病的药物新资源,从90株深海链霉菌中筛选到拮抗香蕉枯萎病病原菌的活性菌株,通过其菌块及发酵液抑制香蕉枯萎病病原菌菌丝生长和孢子萌发活性筛选法,对活性菌株220362进行形态、细胞壁成份及16SrRNA基因序列鉴定。结果表明:筛选获得24株拮抗香蕉枯萎病病原菌活性的深海链霉菌菌株,活性率高达26.7%,其中8株归类为链霉菌粉红类群,3株菌株在20%盐浓度下代谢最佳拮抗香蕉枯萎病病原菌活性物质;菌株220362拮抗活性强,嗜盐性高,产生的拮抗物质稳定,初步鉴定为链霉菌属的1个新种。     

西藏亚高山草原土放线菌研究

采用常规方法了分布于西藏海拔４０００－４６８０ｍ之间６个亚高山草原土的放线菌数量与组成,并从分离纯化所得３５５株放线菌中选出９８株代表菌株进行详细研究。结果表明：（１）供试放线菌分为９个属和２个未定属,链霉菌属和小单孢菌分别占土壤放线菌总数的５２．７％和２７．３％,钦氏菌属,孢囊放线菌属及孢链囊菌属共占１４．１％;链霉菌属共分为１２个类群,白孢类群,粉红孢类群及黄色类群分别占土壤链霉菌总数的４９．     

人参锈腐病拮抗放线菌筛选、形态及培养特征研究

从吉林省集安市和通化市采集的土样中分离到249个放线菌菌株.拮抗试验表明:有13个菌株对人参锈腐病菌表现出不同程度的抑制作用.其中菌株1a效果最好,抑菌带大于16mm,抑菌率为75.8%,1014-5,1013-2,5a和313-3效果较好,抑菌带为9～16mm,抑菌率分别为61.9%,56.6%,54.1%和53.8%.依据形态特征鉴定,这5个菌株属于链霉菌属,其中菌株1a和313-3为金色类群,1013-2为粉红孢类群,1014-5为绿色类群,5a为球孢类群.     

吸水链霉菌新种的筛选和鉴定

从土壤中分离得到一株产生对叶螨等有高活性抗生素的新链霉菌株。该抗生素对各种叶螨(红蜘蛛)、蚜类等都有较高的防治效果。通过对该菌株进行形态特征、培养特征、生理生化、细胞壁组份分析及16S rDNA序列分析,确定该菌种为吸水链霉菌的一株新菌,命名为冰城链霉菌(Streptomyces bingchengensis.n.sp.)     

A2C菌株杀菌活性研究及菌株初步鉴定

从陕西户县土样中分离到放线菌A2C菌株,经培养特征、形态特征以及生理生化特性研究,初步鉴定为链霉菌属吸水类群中的烬灰吸水链霉菌的一个变种,其代谢产物具有广泛的杀菌活性。杀菌活性生测结果表明:A2C菌株发酵液滤液对15种供试病原真菌中的10种真菌的菌丝生长抑制率达90%以上,其中对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌的抑制中浓度(EC50)分别为67.25、40.87、45.19μg/ml,对玉米大斑病菌、烟草赤星病菌和马铃薯干腐病菌的孢子萌发抑制中浓度分别为104.12、264.47、305.05μg/ml。对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、假丝酵母菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径分别为30.1、32.6、28.5、32.9 mm。A2C菌株发酵滤液防治小麦白粉病的盆栽保护和治疗效果分别达到90.3%和87.0%。田间防治番茄叶霉病和黄瓜霜霉病的效果分别为87.8%和59.8%。     

新农抗万隆霉素产生菌的鉴定与分类

新农抗万隆霉素产生菌是从来自马来西亚的土壤样品中分离筛选出来的一株放线菌菌株（保存于中国典型培养物保藏中心,编号为GAAS2507）,根据菌株GAAS2507孢子堆的颜色,其可以归入到烬灰类群．又通过对其形态、生理生化特性的比较发现,其与灰色变异链霉菌Streptomyces griseovariabilis非常相似,但是又有一定的差异,故将其命名为灰色变异链霉菌万隆亚种Streptomyces griseovariabilis subsp．bandungensis subsp．nov．．