鲑鳟鱼类精子超低温保存研究进展

鱼类精子超低温冷冻保存技术发展至今已有60年的历史,取得了巨大的成就,尤其在鲑科鱼类的精液冷冻保存及应用方面。经过统计发现,国外学者在精子超低温冷冻方面取得的主要突破都集中在鲑鳟鱼类领域。本文综述了鲑鳟鱼类精子超低温保存技术的发展史、相应的关键技术和冷冻保存研究的意义、基本生物学原理以及有关精液冷冻保存的研究现状与进展。     

十足目甲壳动物精子冷冻保存

杂交育种、种质优选、雌核发育及物种保护等研究都要涉及到精液冷冻保存。精液的长期保存 ,可以保证基因长时间的稳定性 ,能以较少的时间和空间保证精子的供应 ,没有季节限制 ,也不需较高的饲养亲本的花费 ,大大提高了选择育种的可行性。和其他水生生物大量精子冷冻研究相比 (Ｍｉｓｔｕｔｏｓｈｉ,2 0 0 0 ) ,甲壳动物精子冷冻保存研究很少 ,主要集中在十足目甲壳动物。虽然十足目甲壳动物最近在养殖上越来越重要 ,但其精子冷冻保存技术依然很少(Ｃｈｏｗ ,1985 ;Ａｎｃｈｏｒｄｏｇｙ等 ,1988;Ｊｅｙａｌｅｃｔｕｍｉｅ和Ｓｕｂ ｒａｍｏ…     

鱼类精液超低温冷冻保存研究进展

鱼类精液超低温冷冻保存研究是从五十年代开始的,经过三十年的努力已取得很大成就。国外的工作主要是在海水鱼类和鲑科鱼类中开展的,并在某些鱼类,如鳕鱼、虹鳟、鲑鱼,大马哈鱼等的精液冷冻保存中获得成功。不少学者还对精液冷冻的原理,冷冻保存的技术环节如稀释液的配制、抗冻剂的种类及浓度、降温平衡、冷冻速度及保存方法等进行了较为详细的研究。我国在鱼类精液超低温冷冻保存方面的工作开展得比较晚。近年来,广东、广西和新疆等地对草、鲢、鳙、鲮等鱼的精液冷冻保存作了一些     

“低温超低温保存鱼类种质技术及其应用基础研究”通过鉴定验收

<正> 由中国水产科学研究院长江水产研究所承担并完成的“七五”国家科技攻关课题-“低温超低温保存鱼类种质技术及其应用基础研究”于1990年12月1日至2日在湖北沙市通过了技术鉴定和验收。该课题对我国主要养殖鱼类精子和胚胎的冷冻保存技术及其应用基础进行了系统的研究,筛选出三种理想的精子冷冻保存稀释液,首次以塑料管为容器冷冻精液,建立了效果稳定,操作简便的降温模式和冷冻授精技术,达到了生产应用水平。这一研究为建立鱼类种质资源冷     

鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用

鱼类精子的超低温冷冻保存对鱼类种质资源保护、低温生物学、遗传育种和水产养殖业都具有重要的意义。鱼类精子超低温冷冻保存技术主要包括冷冻保存方法、抗冻保护液、降温、解冻速率、冷冻保存温度、抗冻剂去除等过程。本文就鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用进行了综述。     

鱼精低温冷冻贮存、受精与孵化的实验研究

<正> 引言家畜低温冷冻精液的技术与理论已达高度水平,并且走向实用化,参考的资料也比较丰富,而有关鱼类的精液、卵子的低温冷冻,在国内外正处于研究发展中,其目的都是为育种工作提供保存优良品种鱼精。有关精子低温冷冻保存,1954年以鳟鱼、鲤鱼等为材料进行了研究,至今在冷冻方法、稀释保护液、温热解冻以及复苏率,受精孵化等仍存在着许多问题。最近有些日本淡水鱼类养     

长期超低温冷冻保存对鞍带石斑鱼精子超微结构及酶活性的影响

【目的】本文旨在探究长期超低温冷冻保存中鞍带石斑鱼精子质膜、活力、超微结构及酶活性的变化，为阐明影响鞍带石斑鱼精子冷冻保存质量的相关机制提供理论依据。【方法】采集2022年鞍带石斑鱼鲜精及储存时间分别为23、49、61个月冷冻保存精液，用伊红-苯胺黑染色方法检测精子质膜完整性；用计算机辅助精子分析仪（CASA）检测精子运动参数；测量精浆和精子中琥珀酸脱氢酶（SDH）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽还原酶（GR）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）和肌酸激酶（CK）共六种酶活性的变化及三磷酸腺苷（ATP）浓度变化；用扫描电镜和透射电镜观察鲜精和冻精超微结构。【结果】伊红-苯胺黑染色检测结果发现，鲜精质膜完整性最高为83.43±2.73 %，经过超低温冷冻后，精子质膜完整性显著降低（P<0.05），且随着冷冻保存时间的延长而逐渐降低。CASA结果显示鲜精活力最高为90.47±3.34 %，经过超低温冷冻后精子活力显著降低（P<0.05），但长期保存23-61个月精子活力无显著性差异，精子活力保持在63.95±3.66 %-68.58±2.73 %，具有稳定的活力，且鲜精与冻精之间精子平均直线运动速度（VSL）、平均曲线运动速度（VCL）和平均路径速度（VAP）均没有显著差异（P>0.05）。精子超微结构显示，鲜精形态结构正常、线粒体排列结构规则、形态大小正常。经过超低温冷冻保存后，精子形态结构损伤明显，表现为精子头部质膜破损、细胞质外漏、细胞核膜破损、尾部鞭毛断裂或脱落等损伤；鞍带石斑鱼精浆和精子超低温冷冻前后六种酶活性的变化及ATP含量结果显示，经过超低温冷冻后，精子内SOD、GSH-PX和CAT三种酶及ATP含量均有显著性降低（P<0.05）。精浆中酶活力升高，除GR和CAT外，其余酶活性均差异显著（P<0.05）。【结论】长期超低温冷冻对鞍带石斑鱼精浆和精子酶活性、精子活力及精子超微结构均具有较显著影响，【意义】研究结果为鱼类精子冷冻损伤机理研究积累了丰富的数据，为鱼类精子长期冷冻保存提供了技术参考和评价指标。     

黄鳝精子保存液的初步研究

在鱼类的繁育工作中,为解决雌雄亲鱼性成熟不同步、雄性亲鱼少、精液不足等问题,开展了鱼类精液保存技术的研究,以提高雄亲鱼的利用率。目前对鱼类精子的保存技术已取得明显进展,“四大家鱼”的冷冻精子保存技术已用于生产实践,并取得令人满意的结果,而对黄鳝精子的保存尚未见报道。笔者用不同种类的保存液保存黄鳝精子,观察对精子活力的影响,以筛选出保存效果好的精子保存液,并在人工授精技术的研究中应用,现将研究情况报告如下。     

家鱼冻精技术的研究

鱼类精液冷冻保存的关键，并不在于精子能否长期忍受低温，而是在于如何防止冷冻和解冻过程中，精子在安全地降温至-196℃，以及回升到常温时，不受或少受温差(冷、热)袭击，仍能保持精子的正常受精能力。本实验对鲢、鳙、鲤、鲮等几种家鱼精液的冷冻保存、解冻技术及授精育苗进行了研究。于1980年4月至1981年7月，共进行81批次实验。其中对鲢鱼进行了27批次，     

乌克兰鳞鲤精子超低温冷冻保存方法研究

为研究适用于乌克兰鳞鲤精子的超低温冷冻保存方法,分析比较3种稀释液[Hank′s、Cortland、Freezefish冻精稀释液,精子与每种稀释液均设置3种比例(1∶1、1∶3、1∶5)]及3种体积分数为10%的抗冻剂(二甲基亚砜、1,2-丙二醇和丙三醇)对乌克兰鳞鲤精子低温(4 ℃)保存活力的影响;运用筛选出的冷冻保护液及稀释比例,分析比较3种“3步冷冻法”以及3种解冻温度(20、30、40 ℃)对乌克兰鳞鲤精子活力的影响。试验结果表明,采用Hank′s作为稀释液,10%二甲基亚砜为抗冻剂,精子与稀释液比例为1∶3,平均降温速率为12 ℃/min,解冻温度为30 ℃时,精子活力最高(>68%)。通过对稀释液、抗冻剂、稀释比例、降温速率和解冻温度的层层筛选,建立了适宜乌克兰鳞鲤精子超低温冷冻保存的方法,在其种质保护方面具有重要意义,为开展其他鱼类精子超低温冷冻保存提供参考。     

鱼卵和胚胎冷冻保存研究进展

<正> 一、前言自Polge等(1949)成功地用甘油冷冻保存动物精子以来,低温生物学的原理很快被应用于动物卵子和胚胎的冷冻保存。目前,冷冻配子和胚胎已在医学和畜牧业中得到广泛应用。低温生物学在畜牧业生产和种群管理中的成功应用极大地鼓舞了鱼类生理学者们,并使其对鱼类卵子和胚胎的低温保存进行实验研究。由于鱼类卵子体积很大,具有二层     

虹鳟鱼精液的冷冻保存

<正> 本研究探讨长期冷冻保存虹鳟鱼精液的可能性。用保存了343天的精液进行授精试验,卵子发眼率接近40%。精细胞内主要阳离子浓度的变化和冷冻解冻过程的关系被作为造成精子受精能力下降的可能因素进行研究。研究发现,在冷冻解冻过程中,精细胞中钠、钙离子增加,钾、镁离子减少。目前,精液长期保存技术为家畜育种工作带来了很多益处。鲑鱼精液保存技术发展也必将促进选育技术的发展。从1960年     

冷冻、解冻对绵羊精液品质影响的研究

<正>精液冷冻保存是人工授精技术的一个重大发展。冷冻通过降低和抑制精子的新陈代谢速度和强度,达到延长精子在体外存活时间的目的。它对于精液的长期保存、充分发挥优良种公畜的作用、加速品种的育成和改良步伐具有重要的意义。     

鱼类冷冻精子结构变异的电子显微镜研究

<正> 引言液氮冻结保存鱼类精子,国内外虽已有成功的报道,但现有的冷冻技术水平,还无法克服精子的活力随操作顺序而逐趋下降的缺点,致使受精率、孵化率不够稳定,研究中也尚有许多不明之处,因此造成此项技术还未能在生产上迅速推广应用。若干年来,国内外都较侧重于冷冻技术(稀释液成分、冻结和解冻方法)方面的研究,而对冷冻中各个环节引起精子正常结构形态的变异,从而使复苏率、受精率受到影响的报告,迄今还未见有发表。我们用电子显微镜着重观察     

鱼类、水生生物配子及胚胎低温冷冻保存研究进展

自从五十年代初Blaxter开始大西洋鲜鱼精巢短期冷冻保存研究以来，国外的鱼类精子超低温冷冻保存研究已取得了很大进展，正在从最初的基础理论研究和方法探索向实用技术研究转变。但是，鱼类的卵子和胚胎研究进展就远不如精子。目前绝大部分工作都停留在解决冷冻过程中各技术环节的处理及冷冻机理的研究阶段。许多学者为了解决这些问题，把研究方向转向了体积较小的各种水生生物配子，以求从中找出解决问题的办法。我们通过计算机检索，对所查到的文献资料（特别是1090年之后的资料）进行了系统的归类整理，拟就国外在这方面所取得的最新研…     

黄鳍棘鲷精子冷冻保存方法探究

黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)是中国具有重要商业价值的海水鱼类之一,对其精子开展冷冻保存可为黄鳍棘鲷育种提供一定的技术支持,可有效预防其种质资源衰退,保持其养殖业的可持续发展.该研究以黄鳍棘鲷精子为实验材料,对其精子冷冻保存的稀释液、葡萄糖浓度、抗冻剂种类及浓度、精子与保护液稀释比例和降温程序等进行...     

鱼类精液保存技术

<正>精子运动所需要的能量来自于原生质中的营养物质,由于精子的原生质极少,能量有限,故精子排入水中被激活后的寿命很短。精子的能量还用于调节细胞内外渗透压平衡。鱼类精液的保存就是利用降低精子代谢率的方法减少能量的消耗,从而达到延长精子寿命的目的。随着鱼类养殖业的迅速发展以及杂交育种、优良品种的选育与提纯复壮等工作的开展,鱼类精液保存技术的应用越来越广泛。鱼类精液的保存方法有     

双斑东方鲀精子冷冻保存方法探究

双斑东方鲀(Takifugu bimaculatus)在福建已形成较大规模的养殖产业,但其精卵成熟同步率低、自然交配受精率低等繁殖特点已成为养殖规模化发展的最大制约因素。而精子超低温冷冻保存技术作为直接保存细胞遗传物质的一种有效方法,为双斑东方鲀规模化人工繁育问题的解决提供了方案。研究以复苏后的精子活力为选择指标,开展双斑东方鲀精子冷冻保存方法的研究,对抗冻剂、基础液、精子稀释浓度和降温程序等几个关键影响因素进行了筛选,获得了双斑东方鲀精子的最适冷冻方法:以含5%二甲亚砜(DMSO)的MPRS溶液与精子按1∶1比例稀释,样品在4℃冰箱中平衡30 min,液氮上方10 cm处熏蒸5 min,再下降到5 cm处熏蒸5 min,之后投入液氮。按此方法保存的双斑东方鲀精子在解冻激活后,其活力可达(83±3)%,与相应卵子受精,可得到平均70%的孵化率,可以满足双斑东方鲀规模化人工繁育的需求。研究结果也可为其他东方鲀鱼类的相关研究提供参考。     

半滑舌鳎精子冷冻保存

半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2．8mol／L的二甲基亚砜（DMSO）、甘油（Gly）和1,2-丙二醇（PG）冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS＋2．8mol／L DMSO以1：0．5、1：1、1：1．5和1：2的比例稀释并冷冻精子,1：1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82．50±3．54％,显著高于其他稀释比例（P〈0．05）。分别利用冷冻保存液A（MPRS＋2．8mol／L DMSO）和B（TS-2＋2．8mol／LDMSO）稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37．75±6．45S和145．00±78．98S,与鲜精无显著差异（P〉0．05）。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53．50±6．69％和98．00±13．51s,冷冻效果优于B液（P〈0．05）。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55．00±5．00％和35．00±13．23％,受精率与鲜精无显著性差异（P〉0．05）,因此认为MPRS＋2．8mol／L DMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。     

鱼类精液超低温冷冻保存的基本原理、研究现状及应用前景

<正> 利用低温保存生命是一项新兴的科学手段。自1949年英国Polge用甘油冷冻保存动物精液成功以来,这项技术突飞猛进。目前冷冻配子及胚胎已经应用在医学研究和畜牧业生产上。而水产生物配子(主要是精子)的冷冻保存,经过三十年的努力也取得很大成就。从现有资料看,鱼类精液冷冻保存的研究大多集中在冷水性的鲑鳟鱼类以及某些海水鱼类上,结果较为理想。而有关鲤科鱼类精液冷冻保存的研究报道尚不多。冷冻配子具有超越时空的功效,可以使不同生殖期或地理间隔的品系得以交配,性转换的个体得以自交;可以不间断地为水产遗传学及生物技术研究提供配子材料;还可