家蚕微粒子病血清学检验技术应用于稚蚕期的预知检微

<正> 经过3～4年实验室内和生产中的应用试验,证实N.b炭素凝集反应不仅能应用于原种补正检微,还能应用于1～3龄稚蚕期迟、小、弱蚕的预知检查。经三年750个样品的试验研究,N.b炭素凝集反应具有灵敏度高,准确性大,能检出镜检不能检出的低浓度微孢样品,经三次试验的证实,N.b炭素凝集反应检出微孢样品浓度范围是3.1×10~3、粒1ml～7.5×10~6粒/ml,故用炭素凝集反应检微比镜检检出的有微样品数多5.1倍。 一、材料和方法 (一)、试验材料 1.家蚕微孢r～IgG致敏炭素母液:用西     

家蚕微粒子病血清学检验技术的研究 Ⅲ—N.b碳素凝集反应用于原种母蛾检微

对700个母蛾用N.b碳素凝集反应法进行检微,碳检检出率为95.45%,对检的镜检检出率为22.72%.碳、镜检检出率的比值是4.2倍(即碳检有微数>镜检有微数);碳检发生的阳性反应样品,再用显微镜复检有微吻合率达100%,准确性大,误判率为零.检出微孢灵敏度高,最高N.b浓度是7.5×10~6个/ml,最低N.b浓度是2.5×10~3个/ml,可视为碳检700个母蛾批的检微浓度范围,以上数据证实用N.b致敏碳素检查母蛾微孢是可行的.     

应用炭素凝集反应进行家蚕原种补正检查的研究 Ⅱ、——检出蛾区各发育阶段微粒子病发生规律调查

应用N.b炭素凝集反应进行家蚕原种补正检微是一种适合检含微孢量少的检微方法。为了弄清该法检出的有毒原种有无微孢,除用有毒蚕卵孵出蚁蚕及转青死卵等镜检验正外,还应用该法检出的有毒原种进行孵蚁饲育、上蔟结茧、化蛹化蛾。再按蚕、蛹、蛾各发育阶段调查微孢发生的数量及规律,从而证实应用N.b炭索凝集反应检查含少量微孢蚕种的必要性和准确性。故西南农业大学蚕桑丝绸学院蚕病组于1992年秋蚕在病理实验室内进行了该调查研究。     

鸡红细胞C_(3b)受体被检出

人类、灵长类动物及某些哺乳类动物的红细胞表面具有C3b受体,禽类红细胞表面是否也具有这种受体未见报导。我们用C3b致敏酵母菌及未致敏酵母菌分别对成年鸡红细胞进行了试验。其原理为C3b致敏的酵母菌上吸附有C3b,在红细胞与C3b致敏酵母菌数比例适合及一定pH值条件下,红细胞可通过C3b受体吸附C3b致敏酵母菌,红细胞被酵母菌包绕形成花环(红细胞C3b受体花环)。红细胞表面上的C3b受体可以通过粘附免疫复合物(IC)中的C3b成分而将IC吸附于细胞膜表面。未致敏酵母菌表面附有酵     

用铬变素2R法对家蚕微孢子虫孢子染色的研究

采用铬变素 2R法 (Chromotrope 2R)染色家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)孢子和绿僵 (Nomuraearile yi)孢子、曲霉 (Aspergillusflavus)孢子、花粉粒 (Pollengranule)等与N .b孢子形状相似物 ,结果表明 :Chromotrope 2R法特异性地将N .b孢子染成粉红色 ,绿僵孢子、曲霉孢子、花粉粒未被染成红色 ,初步认为Chromotrope 2R法可应用于母蛾镜检的N .b鉴定 ,能明显提高N .b的检出率与准确性 ;染色N .b孢子的最佳时间与温度为 4 0min ,30℃。鉴于本染色法的条件、技术操作简便 ,染色特异性强 ,因而具有良好的应用前景     

不同地域来源的家蚕微孢子虫DNA特异片段序列及同源性分析

利用碱裂解方法抽提到山东株系的家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)的基因组DNA ,通过PCR技术扩增得到了N .b的一段特异的DNA片段 ,经测序发现 ,该片段大小为 317bp。将其与日本株N .b和广东株N .b的序列比较得知 ,山东株N .b和广东株N .b ,山东株N .b和日本株N .b ,以及广东株N .b和日本株N .b之间的序列同源性分别为 94 .0 0 %、96 .2 1%、92 .11%。进一步聚类分析发现 ,山东株N .b和日本株N .b之间的亲缘关系更接近     

山东省病原性家蚕微孢子虫的初步研究

从山东省境内家蚕成虫体内分离到 4种病原性家蚕微孢子虫 ,与N .b比较研究结果表明 ,4种微孢子虫的大小、形态、极丝圈数及倾斜角与N .b相比均存在差异 ,但血清学反应及在蚕体内的发育过程与N .b相同。初步认为该 4种病原性微孢子虫为N .b的同属微孢子虫。这 4种微孢子虫对家蚕具有极强的食下感染率和胚种传染力。     

微粒子感染对家蚕过氧化氢代谢的影响

本文探讨了100万N.b/(mm)~3感染五龄起蚕对家蚕过氧化氢代谢的影响,结果表明:①N.b感染后H_2O_2:水平后期显著增加,SOD活性差异不显著,CAT活性显著升高;②硒处理组添食N.b后H_2O_2水平与单纯添食N.b相似,SOD活性在第5、第7天显著升高,CAT活性第2、4、5天显著增加;③磁处理组添食N.b后与单纯添食N.b相比,H_2O_2含量初期显著升高,但从第5天开始显著降低而与对照接近,SOD活性初期显著降低,中后期与单纯N.b处理接近,CAT活性第6、7、9三天显著下降.N.b感染对家蚕H_2O_22代谢的最显著影响是CAT活性上升.     

N.b和SCM6交叉感染对家蚕中肠碱性磷酸酶活性的影响

以家蚕病原性微孢子虫Nosema Bombyx和SCM6交叉感染家蚕,每种交叉感染设不同病原浓度下的同时攻毒和先后攻毒处理,每2d取样测定中肠碱性磷酸酶活性.试验结果表明,当家蚕受到不同浓度的N.b、SCM6感染及不同组合的交叉感染后,受到感染的家蚕中肠AKP活性均出现一定程度的降低,被SCM6/N.b组合感染的家蚕中肠AKP活性高于N.b/SCM6及N.b-SCM6组合.     

家蚕微粒子病血清学检验技术的研究——炭素凝集反应的影响因素

本文应用致敏炭素检液,检测家蚕微粒子孢子,具有凝集效应强,凝集块大、多,凝集反应速度快等特点。本实验范围内凝集效应最佳的1gG含量为1mg/m1～1.5mg/ml,凝集效应最佳的炭素颗粒的粒径为200目。以含微粒孢子为10~3～10~8/ml凝集效应最佳。被检母蛾液凝集效应最佳PH值6～8.5。     

家蚕微孢子虫诊断新技术的研究

为了正确诊断家蚕微孢子虫(Nosema bobycis, N.b),共征集了11种微孢子虫作为诊断的材料。根据N.b.孢子(日本株)的DNA序列,设计一对引物,以N.b.DNA为模板进行PCR扩增得到一个约317bp的片段,将此片段克隆到大肠杆菌DH5 α中,提取重组质粒、酶切、回收目的片段,经地高辛标记为探针,对N.b.等11种微孢子虫DNA进行核酸杂交检测,只有N.b.DNA呈阳性反应。检测灵敏度均达到1ng DNA水平。     

一种简易、快速、灵敏的滤纸片固相载体放射免疫分析法

用100～150чg/m1抗原致敏的Whatman No.I活化滤纸片与人工感染弓形体病猪血清及相应的阴性对照血清在室温下作用3小时(或放置4℃过夜),再与125~IA蛋白作用1小对(或4℃过夜),在半自动r计数器计数.结果,阳性病猪血清的CPm数约高于阴性猪血清2倍左右,差异显著.活化滤纸片可在真空条件下保存8个月.致敏滤纸片在-70℃真空条件下可保存3周。滤纸片固相休放射免疫分析法是一种简易、快速、灵敏、经济的放免诊断新方法,可作为可靠的实验室辅助诊断手段.     

蚕种生产的微粒子病预知检查

在蚕种生产中,微粒子(N.b)病预知检查越来越发挥着重大的作用.通过消毒前、后的N.b检查,能够有的放矢,能够知道消毒的效果如何.蚕期的预知检查,能够及时淘汰带毒饲育区(批),降低生产风险.因此,做好预知检查是蚕种生产中重要的防微措施之一.下面谈谈宿迁蚕种场N.b检查的一些做法.     

猪肺炎支原体抗原致敏红细胞冻干与保存试验

继应用间接血凝反应诊断猪气喘病试验后,进行了猪肺炎支原体抗原致敏红细胞的冻干保存试验,先后冻干13批。测定结果表明冻干前、后血凝价一致.在4—8℃保存6个月,效价无变化.     

鸡红细胞免疫功能研究 I.鸡红细胞C_(3b)受体测定

建立了用C_(3b)致敏酵母检测鸡红细胞C_(3b)受体的E—C_(3b)R花环试验,以及用C_(3b)未致敏酵母检测鸡红细胞表面免疫复合物的E—IC花环试验.经检测,Avian(45例)、AA(282例)、罗丝(141例)和星杂579(58例)4个品种鸡的E—C_(3b)R花环率/E—IC花环率分别为19.4±4.4%/5.2±3.2%,15.4±3.1%/3.2±2.8%,9.7±3.2%/4.6±2.0%和9.4±2.3%/3.9±1.5%.本实验结果表明,鸡红细胞上存在C_(3b)受体,该受体对不同动物来源的补体有不同的亲和性,其免疫粘附具有较强的pH值依赖性.     

间接血凝试验测定猪弓形体病抗体若干因素的探讨

1、鞣酸处理绵羊红细胞可提高与抗原的亲和力,提高致敏效果。2、不同固定剂处理红细胞的效果以戊二醛-丙酮醛最好,双醛固定次之。但双醛固定法所用试剂均系国产,因此仍可作为较理想的固定方法。3、致敏条件以pH3.3～4.8,温度36～38°C,致敏时间以60分钟为适宜。4、一步法与二步法的致敏效果相同,一步法操作简便。5、在9～15°C冰箱保存下,双醛和戊二醛-丙酮醛固定绵羊红细胞可使用3个月;致敏红细胞可使用40天。6、间接血凝试验对检出弓形体抗体具有特异性。     

家蚕微孢子虫单抗金银染色法检测技术的研究

使用新构建的抗家蚕微孢子虫（N．b）的单克隆抗体,结合免疫金银染色（IGSS）,进行检测N．b。设计6种温度和5种时问,对N．b等9种微孢子虫检测,结果表明,该细胞株单抗直接IGSS法最佳工作条件：胶体金标记pH值6.2～6.5,金标抗体染色37℃、保湿30min,经显影后光镜观察,N．b孢子周边被染上棕褐色,其它类型孢子呈无色或浅褐色;实验还比较了抗原涂片后,不同物理、化学方法固定,结果甲醇固定效果较好。     

泻痢康对鸡红细胞免疫功能的影响

采用 E- 3b R花环试验 ,E- IC花环试验对饲喂 0 .5 %泻痢康 2 0 d的实验鸡和对照鸡的红细胞的免疫功能进行检测。结果发现 ,试验组和对照组鸡红细胞 C3b R致敏酵母花环率分别为 ( 4 .91± 1 .85 )与 ( 4 .31± 0 .6 4 ) ;试验组和对照组鸡红细胞未致敏酵母花环率分别为 ( 1 6 .5 0± 4.5 6 )与 ( 7.2 6± 2 .6 1 )。试验结果表明使用泻痢康饲喂鸡 ,不仅可有效地减少鸡下痢 ,而且可使鸡红细胞 C3b受体花环率增高 ,增强红细胞的免疫功能。     

模拟感染家蚕微粒子病的蚕卵、蚕蛾PCR检测的初步研究

在比较研究不同浓度家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,N .b)孢子与模拟染毒N .b孢子蚕卵、蚕蛾的模板DNA制备方法的基础上 ,选用MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物进行PCR扩增检测。结果为 :碱性条件预处理N .b孢子后再抽提的DNA ,其得率略高于常规方法抽提的DNA ,但两者的模板质量相同 ;MP1/MP2和V1F/ 5 30R两对引物均可有效地检出N .b孢子DNA ,前者的检测灵敏度为 1μL 3× 10 6mL-1以上浓度的N .b孢子DNA ,后者为 1μL 3× 10 5mL-1以上浓度 ;对不同浓度N .b孢子DNA与蚕蛾DNA混合后进行PCR检测 ,V1F/ 5 30R引物的检测灵敏度为1μL 3× 10 6mL-1N .b孢子DNA。     

切根虫夜蛾亚科的一种昆虫微孢子虫的研究

从切根虫夜蛾亚科的一种昆虫中分离到能感染家蚕的微孢子虫 (MA) ,研究发现该微孢子虫的形态、大小、对家蚕的致病性、寄生部位、传染方式及超微结构等方面的特征与家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis,简称N .b)相似 ,表明MA和N .b具有密切的亲缘关系