紫云英2个转脂蛋白基因在共生及重金属镉胁迫条件下的表达特征

采用实时荧光定量PCR技术,研究了紫云英共生表达的非特异性转脂蛋白编码基冈AsE246和AsJB259在根瘤发育和固氮过程中的组织和时空表达特征,并初步考察了其在重金属镉胁迫条件下表达水平的变化.结果表明:2个目标基因仪在紫云英根瘤中特异表达,并且均在接种华癸中慢生根瘤菌7653R后22 d左右表达量达到最高.在低浓度...     

紫云英根瘤中特异表达CCPs基因的同源分析及表达定位

将紫云英根瘤中特异表达的编码CCPs(cysteine cluster protein)同源多肽的蛋白AsF259在大肠杆菌表达菌株(DH10B)中进行体外诱导表达,分别检测其在洋葱表皮细胞与紫云英根瘤中的细胞定位,并利用免疫荧光技术,检测紫云英中AsF259基因的时空表达特征。结果表明:AsF259蛋白分布于洋葱表皮的细胞壁、细胞膜、细胞质;基因表达和融合蛋白定位实验显示,AsF259在根瘤中呈特异性表达,在类菌体分化前期大量表达,且AsF259蛋白与类菌体共定位,表明AsF259基因属于NCR家族,在类菌体分化、维持和共生固氮过程发挥重要作用。     

磷转运蛋白AsPT6对紫云英结瘤及固氮酶活性的影响

采用组织定位、超表达及RNAi等方法对紫云英中的Pht1家族磷转运蛋白AsPT6进行了研究。时空表达结果显示,AsPT6基因在根、茎、叶中均有表达,接种根瘤菌后在根和根瘤中高量表达;化学组织定位分析表明,AsPT6在根和根瘤的维管组织及根和根瘤连接处均有表达,起到向根瘤转运磷的作用;超表达及RNAi结果显示AsPT6能显著影响紫云英的结瘤及固氮酶活性。这些研究结果表明,AsPT6参与根瘤形成和发育过程中磷的转运。     

紫云英根瘤和其中类菌体的发育与固氮活性的关系

紫云英——根瘤菌共生系统中,根瘤的固氮活性与根瘤中含菌组织和类菌体的发育呈正相关。当瘤龄3天,含菌组织约占根瘤细胞10%左右时,即出现微弱的固氮活性。随着根瘤和其中类菌体的发育,根瘤固氮活性逐渐上升。温度和光照影响根瘤类菌体的发育和固氮活性的变化。越冬期紫云英生长停滞,根瘤固氮活性维持在50—70 n mol N_2/克鲜瘤/分的低水平上。翌春气温回升,根瘤和其中类菌体继续发育。至4月下旬紫云英进入盛花期,瘤龄达180天以上的早期根瘤衰败,类菌体自溶,固氮活性消失。此时主根下部和侧根上的中期根瘤承接了主根基部早期根瘤的作用,根瘤固氮活性达184 n mo1 N_2/克鲜瘤/分的最高峰。5月初紫云英生长进入结英期,植物营养主要运向豆荚,根瘤固氮作用缺少能源,固氮活性下降。     

大豆细胞色素P450家族GmCYP78A71固氮功能解析

大豆可与根瘤菌互作进行共生固氮,有效缓解其对土壤氮素的依赖。细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)是一种血红素单加氧酶,参与植物信号分子、植物激素和黄酮类等多种次生代谢物的合成,为探究其在大豆结瘤固氮中的生物学功能,分析了该家族GmCYP78A71基因的结构,并对其表达模式及生物学功能进行了深入解析。qRT-PCR和转启动子大豆毛根的根瘤GUS染色表明,GmCYP78A71在根瘤中特异表达,且随着根瘤的发育表达量逐渐增高,在成熟根瘤中达到峰值;与对照相比,超表达复合植株的根瘤个数、鲜重、固氮酶活性等显著提高,而RNAi毛状根的根瘤个数、鲜重、固氮酶活性等显著降低。上述结果表明GmCYP78A71对根瘤的生长发育和固氮发挥重要作用。     

参与紫云英共生固氮的1个上调表达结瘤素基因AsB6的分离与鉴定

基于接种华癸中慢生根瘤菌(Mesorhizobiumhuakuii)7653R的紫云英(Astragalus sinicusL.)感染根与未接种对照根在转录水平上的差异,利用抑制差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),建立了紫云英结瘤固氮过程中的差异表达cDNA文库,共获得527个有效克隆,其中增强或特异性表达的上调文库中包含341个克隆,抑制表达的下调文库包含186个克隆。对其中的1个上调表达cDNA克隆AsB6利用RACE(rapid amplification of cDNAends)方法获得了其基因全长序列,利用BLAST在线软件和GenBank,Gen-Bank EST和Tigr Porcine EST等数据库进行同源序列比较,表明AsB6与苜蓿的β-酮酯酰合成酶及依赖于SAM(S-adenosgl methiomine,S-腺苷蛋氨酸)的羧甲基转移酶具有66%的同源性,同时利用实时荧光定量PCR研究了该基因的时空表达特征。结果显示,接种根瘤菌7653R后,在紫云英感染根和根瘤中该基因的表达量显著增强,且在接种后根瘤形成早期和固氮中晚期表达...     

紫云英根瘤中共生固氮下调表达基因的分离与初步分析

对前期利用抑制消减杂交技术(Suppressive subtractive hybridization,SSH)构建的紫云英(Astragalus sinicus)根部组织的共生固氮差异表达cDNA文库进行了全文库测序和初步分析,并利用半定量RT-PCR方法验证了其中5个基因片段在根瘤中的下调表达。结果表明,从180个克隆中共获得94个有效序列,文库插入片段长度为200~1 300 bp。BLAST同源比对分析结果表明,有90个序列可以找到同源片段,有4个可能为新基因,按功能分为10个类群。     

StP5CS基因过表达增强高温胁迫下菜用大豆结瘤固氮的能力

高温胁迫严重影响菜用大豆的结瘤固氮过程,增强高温胁迫下菜用大豆结瘤固氮的能力对提高菜用大豆产量具有重要意义。采用蛭石栽培的方法,以转StP5CS基因菜用大豆(T6)为试验材料,研究在35℃高温胁迫下StP5CS基因过表达对菜用大豆结瘤固氮的影响。结果显示:转基因株系的株高、干鲜重及根瘤数目、根瘤干鲜重、单株荚数、粒数、种子重均显著高于非转基因株系(WT);转基因株系根瘤中脯氨酸、豆血红蛋白含量及谷氨酰胺合成酶活性均显著高于WT;经qRT-PCR分析,5个结瘤固氮关键基因(GmENOD40-1,GmENOD40-2,GmGS1β1,GmGS1β2及GmLba)在转基因株系中的相对表达量均显著高于WT。结果表明,高温胁迫下StP5CS基因过表达,促进了脯氨酸的积累,显著增强了菜用大豆的耐热性和结瘤固氮能力,进而提高了菜用大豆的产量。     

蒺藜苜蓿紫色酸性磷酸酶MtPAP3基因在共生固氮中的功能

利用启动子组织表达定位、超表达及CRISPR/Cas9基因敲除等方法对蒺藜苜蓿酸性磷酸酶MtPAP3基因的功能进行研究。结果显示:MtPAP3在蒺藜苜蓿根和根瘤的维管束组织以及根瘤的分生区和侵染区中表达,在低磷胁迫和根瘤中均表现为特异性诱导后的高效表达;超表达MtPAP3能够显著提高蒺藜苜蓿的结瘤数及根瘤固氮酶活,敲除MtPAP3基因能显著抑制根瘤的发育及固氮酶活。结果表明:MtPAP3参与低磷胁迫条件下根瘤中的磷代谢及共生固氮过程。     

MCHK＿7135基因在华癸中慢生根瘤菌共生固氮中的功能

为研究MCHK＿7135基因在根瘤菌与宿主植物共生固氮中的功能,用同源重组的方法构建了MCHK＿7135基因的突变体及回补菌株,对突变菌株和回补菌株在人工培养条件以及与宿主植物紫云英共生下的各项表型进行了考察,结果显示：与野生型菌株相比,突变菌株对氧胁迫的敏感性增强;接种突变株的紫云英长势矮小,侵染线及根瘤原基数目减少,根瘤数量少,固氮酶活性低,而向突变菌株导入完整MCHK＿7135基因后,各项共生表型得到不同程度恢复。研究结果表明,华癸中慢生根瘤菌的过氧化物还原酶基因MCHK＿7135基因在根瘤菌与宿主植物共生固氮的过程中具有重要功能。     

不同菌种发酵对藜麦蛋白质特性及脂质构成的影响

【目的】 比较不同菌种发酵对藜麦蛋白质水解及脂质变化的影响,为藜麦发酵食品的开发提供理论参考。【方法】 以藜麦为原料,加入不同菌种（酵母菌、植物乳杆菌及其混合菌）进行发酵,通过测定蛋白水解指数、蛋白质各组分、游离氨基酸、游离脂肪酸及脂质构成来判定发酵效果,确认哪种微生物更有利于藜麦营养成分的转化。【结果】 经酵母、植物乳杆菌、酵母和植物乳杆菌混合菌发酵后,藜麦蛋白质水解指数均有所升高,且主要是清蛋白和球蛋白发生了水解。发酵后藜麦中的游离氨基酸含量增加显著,尤其是必需氨基酸。酵母发酵藜麦更有利于蛋白质、多肽等水解成氨基酸。通过发酵处理,藜麦中的游离脂肪酸含量显著增加,且饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸的比例更为接近1﹕1﹕1;甘油三酯、甘油二酯含量降低,但磷脂等功能脂的含量有所提高,且有酵母菌参与更有利于上述转化。【结论】 酵母菌、植物乳杆菌发酵过程中主要水解藜麦清蛋白和球蛋白成氨基酸等小分子化合物,且游离必需氨基酸含量显著升高;两种菌发酵后都有利于增加游离脂肪酸含量,降低甘油三酯、甘油二酯含量,且提高磷脂的含量。经酵母发酵,更有利于改善藜麦营养。     

大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究

通过摄食生长实验来研究高植物蛋白饲料中添加牛磺酸及水解鱼蛋白对大菱鲆脂肪累积的影响。实验对照组(C)含有30%的鱼粉,高植物蛋白饲料+牛磺酸处理组(HT)使用植物蛋白替代对照组的一半鱼粉后添加0.8%牛磺酸,高植物蛋白饲料+牛磺酸+水解鱼蛋白处理组(HTPH)在HT饲料的基础上继续使用水解鱼蛋白替代7%的饲料鱼粉。室内流水系统养殖,每组4个重复。与对照组或HT组相比,HTPH组显著降低了鱼体的中性脂和肝体比。与对照组相比,HT及HTPH组均显著升高了鱼体水分含量,降低了肝脏总脂和中性脂含量。与对照组相比,肌肉总脂及极性脂仅在HTPH组显著降低。HTPH组的血清甘油三酯和胆固醇含量显著低于对照组。组织脂肪酸分析显示,HT及HTPH组有降低长链多不饱和脂肪酸含量,升高C18∶2n-6,C18∶3n-6及C18∶3n-3含量的趋势。综上,在高植物蛋白饲料中添加牛磺酸可以有效降低鱼体肝脏脂肪含量,而在此基础上继续使用水解鱼蛋白具有更好的脂肪调节效果,能够降低鱼体、肌肉、肝脏及血清中的中性脂肪及总脂肪含量。     

小麦抗性淀粉与主要营养成分的相关性研究

以全国94个春小麦品种为材料，研究小麦表观直链淀粉含量（AAC）、蛋白质、脂肪与生面粉和熟面粉抗性淀粉（RS）含量的相关性。结果表明，AAC与生面粉和熟面粉RS含量均呈极显著正相关；蛋白质含量与生面粉RS含量呈极显著负相关；脂肪含量与生面粉和熟面粉RS含量均相关不显著；生面粉与熟面粉RS含量呈极显著正相关。     

丙酮酸肌酸对肉鸡脂肪代谢和蛋白质代谢的影响

300羽1日龄雄性AA肉鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复25羽。分别于基础日粮中添加质量分数为1%、5%和10%丙酮酸肌酸(CrPyr),以不添加CrPyr为对照,饲喂至42日龄时各组每个重复分别随机宰杀4只,采集血样、肝脏、腹脂、左侧胸肌和腿肌,测定血清葡萄糖(BG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肌酸激酶(CK)、尿酸(UA)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、胰高血糖素、胰岛素和瘦素含量,以及肌肉核酸和蛋白质含量。结果表明:与对照组相比,CrPyr显著降低肉鸡腹脂率及肝脏和血清中TG、LDL-C、UA含量,但增加血清FT3含量;CrPyr明显提高胸肌率、腿肌蛋白质含量及RNA/DNA值;同时CrPyr还提高了肌肉胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)和生肌调节因子的mRNA转录水平。提示:CrPyr可通过提高肉鸡体内脂类分解代谢相关酶活性及激素水平,对脂肪代谢起调节作用;同时通过促进蛋白质的沉积,提高肌肉蛋白质含量,促进肌肉生长。     

Effects of Monoclonal Antibody Against Adipocyte-Specific Membrane Protein on Lipid Metabolism in Pigs

This study was to investigate the regulation of monoclonal antibodies against adipocyte membrane proteins （McAb） on lipid metabolism in pigs. Forty Landrace x Saba pigs were randomly divided into eight groups; the control group was given 10 mL saline and the treat groups were given monoclonal antibody against adipocyte-specific membrane protein with 0.1, 0.5, and 1.0 mg kg-I body weight at 15 and 60 kg body weight, respectively, by intraperitoneal injection. The results showed that McAb could increase, significantly, serum lipoprotein lipase activity and reduce serum nonesterified fatty acid （NEFA） content. Meanwhile, McAb increased content of serum lipid, triglyceride （TG）, cholesterol （CHO）, high density lipoprotein （HDL）, and low density lipoprotein （LDL） both at 15 and 60 kg body weight. However, McAb affected more significantly the lipid metabolism at 15 kg body weight than at 60 kg body weight. Moreover, this effect of McAb on lipid metabolism exhibited dose-dependent effect. These results suggested that this monoclonal antibody increased lipase activity, promoted lipolysis, and utilization of lipid so that McAb could be applied to restrain excessive fat deposition in porcine production through the regulation of fat metabolism.     

条纹锯鮨幼鱼配合饲料适宜的蛋白质、脂类含量及能蛋比

以初始体重为(59.44±0.65)g的条纹锯鮨幼鱼为试验对象,按L9(34)正交设计将饲料中的蛋白质、脂类、总能作为3个因素,并分别设3个水平配制9种饲料,以鲈鱼5号配合饲料为对照,在室内水族箱中进行为期68d的饲养试验,以增重率、特定生长率、蛋白质效率和饲料转化率为评价指标,初步研究条纹锯鮨幼鱼配合饲料中蛋白质、脂...     

花生荚果发育过程中子叶细胞内脂肪、蛋白质的积累及其与ATP酶活性的关系

花生荚果发育过程中,子叶细胞从小到大不断发育,脂体、蛋白体由小变大、从少到多直至充满整个细胞;子叶细胞中的淀粉粒数量则由多变少,表明了淀粉粒参与胚胎发育过程中活跃的的物质代谢,最后基本被消耗;ATP酶活性的强弱和分布部位也在整个荚果发育的不同时期发生明显变化;讨论了脂体和蛋白体的生物来源和形态结构,并指出花生油分和蛋白质的积累与ATP酶活性有关。     

我国六个产地卤虫初孵无节幼体的营养价值

对我国六个地区（河北沧州，河北黄骅，山东无棣，西藏措勒，内蒙锡林浩特，新疆巴里坤湖）所产卤虫初孵无节幼体的营养组进行了测定。结果表明，六个产地卤虫初孵无节幼体的蛋白含量为46％－53％，脂肪含量为21％－26％，除色氨酸因酸水解未测定之外，六个产地卤虫的无节幼体均含有17种氨基酸，氨基酸总量为干重的38％－445，必需氨基酸占氨基酸总量的48％－50％，六个产地卤虫无节幼体均含有较多的20：5n-3,18:3n-3含量很少，为海水型卤虫，其脂肪酸组成因产地而异，其中18:2n-6和20:5n-3的含量受产地的影响最大，西藏措勒的50:5n-3含量最高，达23．52％，内蒙锡林浩特最低为7．90％，六个产地卤虫的无节幼体均缺乏22：6n-3.     

The Inhibiting Effect of Bone Protein Hydrolysates on Lipid Oxidation in Pork Patties

Bone protein hydrolysates were prepared by limited alcalase hydrolysis （5 h）. The hydrolysates were formulated （0-3%, w/w） into pork patties to determine the antioxidant efficacy. 0.02% BHA （butylated hydroxyanisole） was used as a positive control. Lipid oxidation in patties during storage was analyzed by measuring the TBARS and protein carbonyl content. The results showed that bone protein hydrolysates possessed significant antioxidant activity, and antioxidant activity increased with the increasing hydrolysates concentration. Sensory evaluation indicated that bone protein hydrolysates improved the color and decreased lipid oxidation flavor of pork patties. The 2% bone hydrolysates possessed the highest antioxidant activity and better sensory quality, and its effect was closed to 0.02% BHA.     

我国六个产地卤虫初孵无节幼体的营养价值

对我国六个地区（河北沧州，河北黄骅，山东无棣，西藏措勒，内蒙锡林浩特，新疆巴里坤湖）所产卤虫初孵无节幼体的营养组进行了测定。结果表明，六个产地卤虫初孵无节幼体的蛋白含量为46％－53％，脂肪含量为21％－26％，除色氨酸因酸水解未测定之外，六个产地卤虫的无节幼体均含有17种氨基酸，氨基酸总量为干重的38％－445，必需氨基酸占氨基酸总量的48％－50％，六个产地卤虫无节幼体均含有较多的20：5n-3,18:3n-3含量很少，为海水型卤虫，其脂肪酸组成因产地而异，其中18:2n-6和20:5n-3的含量受产地的影响最大，西藏措勒的50:5n-3含量最高，达23．52％，内蒙锡林浩特最低为7．90％，六个产地卤虫的无节幼体均缺乏22：6n-3.