H5亚型禽流感灭活疫苗免疫后鸡血凝抑制抗体动态变化观察

选择国家指定的两个厂家生产的禽流感灭活疫苗(H5亚型,N28株)进行无母源抗体来航鸡的免疫试验.通过鸡免疫后血凝抑制(HI)抗体的动态性检测,对两个疫苗的免疫效果进行了观察.研究结果表明,两个疫苗均具有良好的免疫效果,但也存在一定程度的差异;加强免疫可以明显提高抗体水平,延长免疫保护时间.     

不同因素对禽流感病毒H7亚型血凝——血凝抑制试验的影响

本文分别从抗体稀释液、红细胞悬液、孵育温度、抗体作用时间等不同因素分析禽流感病毒H7亚型血凝血凝实验效果的影响,在操作、方法、人为等因素进行规范,从而避免血凝抑制试验的失败和实验准确性,进而提高免疫抗体的监测准确性、可靠性、稳定性,为一线疫病监测特别是流感检测提供可鉴之资。     

汉中市H5亚型禽流感抗体监测与分析

禽流感是一种由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的一种烈性传染病,几乎可以感染所有的家禽和野禽.1878年首次发生于意大利,被世界动物卫生组织列为A类动物疫病,我国将其列为一类动物疫病.禽流感分为非致病性、低致病性、高致病性禽流感三大类,前两类发病症状较轻,对养禽业造成的影响相对较小,属于温和性禽流感,而高致病性禽流...     

影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素分析

禽流感血凝和血凝抑制试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法,随着动物疫病防控形势的需要,禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量的逐年增加,禽流感血凝和血凝抑制试验成为当前基层动物疫病预防控制中心实验室检测禽流感最常用的方法。但是由于试验中不规范的操作和细节方面的不注意,导致出现了不正确的检测结果,影响了试验的准确性。     

禽流感血凝和血凝抑制试验的影响因素分析

禽流感严重危害我国的养禽业,疫苗免疫是目前预防和控制禽流感发生的最有效手段,免疫后抗体水平的高低直接关系到实际的免疫效果,因而免疫抗体监测操作技术的准确性、有效性、可靠性对禽流感防控工作起着不可忽视的作用。禽流感免疫抗体水平监测一般采用血凝和血凝抑制试验(HA-HI试验),经济、操作简便和容易量化是该试验方法的优点,但影响试验结果的因素也较多,导致HA-HI试验结果失真,下面将就禽流感血凝和血凝抑制试验的影响因素浅析如下。     

禽流感血凝和血凝抑制试验的影响因素分析

在进行禽流感血凝和血凝抑制试验时,要严格按照操作规程,考虑多方面的因素,尤其要注意各步骤操作的细节,认真细致地进行操作,尽量消除不利影响,减少误差,确保试验结果的准确性.     

禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求和禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程规定的抗原制备方法,研制了一批禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原国家参考品,用于检测禽流感病毒（H5亚型）制品生物效价和血凝抑制操作过程中的校验。该批抗原经过8家单位对其协作标定后对结果进行统计学分析,确定该批禽流感抗原的血凝效价为1：80。另对所研制的禽流感抗原均一性、稳定性、无菌检验、剩余水分测定、真空度测定等各项指标进行检测,结果均符合禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制试验抗原制造及检验规程和国家一级标准物质要求。说明该禽流感病毒（H5亚型）血凝抑制抗原可以作为国家参考品。     

佛山市存栏禽群H5亚型禽流感抗体效价连续监测结果初报

佛山市从2005年1月至2006年9月,对规模养殖和散养两类养禽场的禽群,开展了H5亚型禽流感抗体效价连续监测.监测结果表明:禽群H5亚型禽流感抗体效价总体合格率较高,但合格率有较明显的季节性波动,且规模场和散养禽场之间存在一定的差异.     

禽流感抗体效价准确度影响因素浅析

<正>禽流感抗体效价准确度在测定疫苗免疫效果、鉴定禽流感病毒亚型、反映机体抗体免疫水平、判定免疫机体免疫间隔时间等方面具有重要的价值依据。血凝抑制试验(HI)是测定禽流感抗体效价的常用方法,本实验方法简单易操作,能对大量检测样本进行分析,但是在实际(HI)实验操作时,有很多因素如果操作者不注意,就会影响实验结果的准确性。本文通过多年的检测经验,总结归纳了影响实验准确性的几点体会和大家共同探讨如下:     

影响禽流感血凝抑制试验结果的因素分析

血凝抑制试验是检测禽流感抗体效价的一种常用方法,具有简便、快速、灵敏、准确等特点,在区县级动物疫病预防控制中心化验室被广泛应用。但是由于试验中不规范的操作和细节注意不够,从而导致不正确的检测结果出现的现象时有发生,从而提供错误的基础数据,导致各级决策层不能做出正确决策。     

免疫PCR检测微量H5亚型禽流感病毒

为了有效检测低浓度禽流感病毒,笔者通过将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接“三明治”抗体夹心免疫PCR方法.以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体,以禽流感病毒H5蛋白为检测对象,通过一系列免疫反应及亲和素-生物素桥联作用,将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接.充分洗涤后,在TopYield板孔中添加PCR反应液,对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增,间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标.通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度,2种免疫PCR技术都可检测到约1 fg的禽流感病毒H5蛋白,与常规ELISA方法相比,灵敏性提高了近1 000倍.     

鸭H5亚型高致病性禽流感疫苗研究进展及其效率影响因素

鸭在H5亚型高致病性禽流感的流行中发挥重要作用,成功控制鸭H5亚型高致病性禽流感对根除该病在家禽中的流行和人类健康具有重要的意义。本文对当前鸭H5亚型高致病性禽流感疫苗使用和研究进展,以及影响疫苗效率的因素（疫苗类型、鸭的品种、免疫程序、疫苗的抗原匹配性、佐剂、免疫覆盖率）进行了综述。     

荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证

根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。     

影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素及对策

血凝和血凝抑制试验是目前较为广泛使用的监测禽流感抗体水平的一种试验方法.对血凝和血凝抑制试验中的影响因素及对策进行了阐述.     

不同H5亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR试剂盒的比较

H5亚型禽流感病毒严重威胁家禽产业的发展和人类健康,实时荧光定量PCR是快速准确诊断该病毒的有效方法之一。比较和分析了国内4种H5亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR试剂盒的灵敏度、重复性和特异性,结果表明,不同厂家的试剂盒总体检测效果都不错,但是不同厂家的试剂盒在灵敏度等方面存在一定差异。     

双重RT-PCR同时快速检测H5亚型禽流感病毒和新城疫病毒强毒株

本研究针对AIV H5的血凝素(HA)基因和vNDV的融合蛋白(F)基因设计两对引物,建立了单管同时检测AIVH5和vNDV的双重RT-PCR(dRT-PCR),该方法能在单一反应管内同时检测AIVH5和vNDV,不与其它亚型AIV、弱毒NDV毒株以及其它病原体发生非特异性扩增;对含有AIV H5 HA基因和vNDV F基因重组质粒DNA的最低检测限分别为20.6和406fg,敏感性与单项RT-PCR相同;从样本处理到报告结果仅需5h。对24份临床疑似样本进行检测,AIVH5均为阴性,vNDV阳性18份,PCR产物测序证明为靶基因序列,其具有vNDV F基因的特征性序列,随机选9份vNDV阳性样本接种SPF鸡胚,分离出6株vNDV,病毒分离率为6/9;对100 ELD50的AIV H5N1和100 ELD50的vNDV人工同时感染5日龄SPF鸡的脑、肝脏、肺脏和泄殖腔棉拭子进行dRT-PCR检测,AIV H5的检测率为4/5,3/5,5/5,4/5,vNDV的检测率为3/5,5/5,4/5,3/5,而对H9N2和LaSota毒株实验同时感染样本及阴性对照样本的检测均为阴性。可见本研究建立的dRT-PCR为AIV H5和vNDV诊断、监测、检疫及分子流行病学调查提供了特异性强、操作简单、检测速度快、成本低廉的新方法。     

H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒.采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线.敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9％和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰.在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA;特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出;重复性试验结果显示,组内变异系数小于1％.建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测.     

禽流感(H9亚型)HI稳定抗原的制备

禽流感（H9N2）灭活病毒液经浓缩纯化、离心及超声波处理，分组后加入不同物质如明胶、甘油、蔗糖作为稳定剂，制备HI诊断抗原。通进对不同温度条件（-20℃、4℃和室温）、不同存放时间诊断抗原HA效价的比较，筛选出了-20℃和室温保存6个月，4℃保存至少12个月抗原HA效价不发生改变的稳定剂——甘油。经实验室和田间试验，用该组抗原检测的禽流感H9亚型抗体与国家流感中心活病毒抗原检测结果基本一致。