体内诱导抗原技术鉴定细菌毒力基因的研究进展

病原细菌的致病作用是其与宿主复杂的相互作用的结果。一方面细菌表达产生、分泌释放多种毒力因子,另一方面宿主通过其防御系统抵抗这些毒力因子的作用[1-2]。一般来说,由于环境条件的显著差差异,病原菌在体内外所表达的产物是明显不同的,其感染宿主时被诱导表达的基因,称为体内诱     

体内诱导抗原技术研究进展

病原菌入侵宿主是一个极其复杂的过程,它要求病原菌众多毒力基因产物的协调一致,并能与宿主的免疫系统一同进化.     

应用体内诱导抗原技术筛选病原菌体内表达基因的研究进展

病原菌体内诱导基因与其在体内的生存和致病过程密切相关,体内诱导抗原技术(IVIAT)已广泛应用于筛选体内诱导基因的研究。IVIAT不使用动物模型,采用经病原菌体外培养抗原吸附处理的感染动物血清来检测病原菌的原核表达文库,对体内诱导基因进行筛选。利用该方法可以快速、简单的筛选到体内诱导基因,有助于病原菌致病机制的研究,同时也能够为目标病原菌抗菌药物、诊断试剂及疫苗设计的开发研究提供理论依据。文章就IVIAT的原理、兽医致病病原菌中的应用及应用前景作一简略的概述。     

应用信号标签诱变技术检测细菌体内毒力基因的研究进展

细菌病原的感染是一个复杂的、动态的多因子作用过程,它要求病原菌众多毒力基因产物的协调一致,并能与宿主的免疫系统一同进化。在大多数情况下,病原菌会根据感染部位所遇到的环境随时调整各毒力基因的表达。为了有效地研究这个复杂的过程,许多体外系统已经被建立起来,力争在反映宿主体内生理条件下研究细菌基因的表达和各种突变株的行为。这些系统包括了运用一些特殊培养条件,如pH、温度、铁离子水平的改变等来观察检验病菌的黏附、侵袭、在巨噬细胞中的生存、细胞毒性等。然而,由于宿主体内环境的复杂性,特别是感染过程中免疫反应的复杂性,不可能在体外精确重现宿主一病原间相互作用的所有方面。一个在体外非常重要的基因或许在体内却不一定如此重要,反之亦然。体外实验中,多种毒力因子由一个确定的调控子控制,但这并不意味着在体内也是这样。     

细菌体内诱生抗原筛选技术的研究进展

只在进入宿主体内后表达而在体外不表达的基因称为体内诱生基因.大量研究表明,这些基因对病原菌进入体内的生存和致病具有重要的意义.体内诱生基因的筛选可为抗菌药物的开发、临床诊断试剂的研究、疫苗的设计提供新的准确靶标,从而为预防和治疗工作奠定基础.近年来有关病原菌体内诱导基因的研究越来越受到重视,人们发展了多种体内诱生基因的...     

筛选细菌毒力基因方法的研究进展

细菌的致病过程涉及多个毒力基因表达产物的相互作用。然而,随着越来越多的微生物基因组测序工作的相继或即将完成,对其毒力基因的研究却相对滞后。这不但影响了致病机理等基础研究的进展,还成为制约抗菌药物和疫苗研发的瓶颈。本文从生物信息学、筛选差异表达基因等4个方面介绍了筛选细菌毒力基因的方法及其应用,并综合了研究致病菌与宿主间相互作用关系的方法。为发现和研究致病菌新的毒力因子,理顺病原与宿主关系开拓了思路。     

猪囊尾蚴抗原基因TS11的真核表达研究

将猪囊尾蚴抗原基因TS11亚克隆至VRl020真核表达载体中，用菌落原位杂交法筛选重组质粒，将其转染COS7细胞，以Northern Blotting检测插入片段的转录；用ELISA检查其翻译表达产物。结果表明：VTS11在真核细胞中能够转录TS11基因的mRNA；其蛋白表达产物能为兔抗猪囊虫高免血清所识别，在转染真核细胞24h后，即可检测到正确表达的猪囊尾勘抗原蛋白。这些为深入研制猪囊虫的DNA疫苗奠定了可靠的基础。     

广西黄鸡β-防御素Gal-4基因的克隆和体内诱导表达

采用RT-PCR方法从广西黄鸡骨髓中扩增了β-防御素Gal-4基因的cDNA片段。序列分析结果表明，获得的广西黄鸡Gal-4基因大小为321bp，推导的Gal-4由63个氨基酸组成，其中N端20个氨基酸为信号肽，C端38个氨基酸组成Gal-4的成熟肽。另外，分析了Gal-4基因在正常广西黄鸡（对照组）和H9N2禽流感病毒感染的广西黄鸡（感染组）的肺、肝、腔上囊、十二指肠、肾、气管组织中的表达情况。分析结果表明，在检测的6个组织中，肺、十二指肠、肾组织Gal-4基因的表达在感染组和对照组之间没有明显的差别，而在肝、气管和腔上囊组织中的表达有明显差异，感染组比对照组的Gal-4阳性样品数多。在肝组织中，对照组的30个样品检测到26个阳性样品，而感染组的30个样品全都是阳性；在气管组织中，对照组30个样品检测到19个阳性样品，而感染组的30个样品检测到24个阳性样品；在腔上囊组织中，Gal-4基因的诱导表达情况非常明显，对照组30个样品中仅有9个阳性，而感染组的30个样品中有21个阳性。     

抗病毒基因MxA在鸡体内的表达

大量提取人抗病毒基因MxA的重组质粒pEGFP-C1-MxA,肌肉多点注射未成年广西土鸡,RT-PCR 免疫组化方法检测MxA基因在鸡体内各组织的分布表达.采用RT-PCR方法于注射后5 d、10 d在呼吸道上皮、脾脏、肌肉组织中均可检出MxA基因的转录;采用免疫组化方法检测到GFP和MxA基因均能在肌肉组织中得到表达,且注射5 d后的表达量高于注射10 d后.结果表明重组质粒肌肉多点注射可介导MxA在鸡体内多种组织中转录、表达,为进一步探讨MxA的生物学活性以及禽类抗病毒免疫制荆的研发奠定了基础.     

猪囊虫抗原基因TS21的真核表达

构建了猪囊虫抗原基因TS21的VR1020真核表达载体，以菌落原位杂交法筛选获得正确插入的重组质粒，用RNA印迹（Northern blotting)和ELISA检测插入片段的转录及其翻译表达产物。结果，VTS21在真核细胞中能够转录TS21基因的mRNA；兔抗猪囊虫超免疫血清可识别其蛋白表达产物，表明VTS21能正确表达猪囊虫抗原蛋白。     

H-Y抗原候选基因的研究进展

雄性特异性组织相容性抗原(male specific minor histompatibility antigens,H-Y抗原)是由Y染色体上的基因编码,在雄性动物细胞中普遍表达(包括胚胎和滋养层细胞)。H-Y抗原不仅能引起基因型相同的雌性动物排斥雄性组织,也能导致人白细胞抗原匹配干细胞移植术后出现移植抗宿主性疾病(GVH)。细胞毒性T淋巴细胞检测到几个不同的H-Y抗原表位,这些肽是从胞内蛋白分离出来,由主要组织相容性复合分子结合呈递在细胞表面。H-Y抗原肽与人白细胞抗原Ⅰ类和Ⅱ类分子特异结合参与免疫反应,从而影响移植结果。近年来越来越多的文献报道了H-Y抗原的相关研究,作者主要综述编码H-Y抗原的相关候选基因,并对它在疾病等方面的前景作出了一些展望。     

诱导畜禽体内细菌和病毒变异的原因及对策

当前养殖业迅猛发展．给我国的经济注入了新的活力。与此同时,各种抗菌、抗病毒药物和抗生素添加剂的滥用、低效价疫苗的使用．不但不能有效治疗疾病．而且还引发了各种细菌和病毒的变异．最终导致疾病的暴发。一系列畜产品安全事件相继发生．给国家造成了严重的经济损失．     

消减cDNA文库差异表达基因检测分析方法的研究进展

同已有的差异表达基因分离方法相比,抑制消减杂交以其快速、高效及假阳性率低等优点被广泛应用,并形成了反向Northern斑点杂交和表达谱基因芯片技术2种差减cDNA文库筛选方法,同时,快速发展的生物信息学为文库中大量阳性差异表达片段的序列分析提供了最有力的技术手段,而RT-PCR和实时荧光定量PCR为进一步在mRNA水平验证基因的表达差异性和初步揭示基因功能奠定了技术基础。作者在简要综述上述各方法的原理、特点及应用基础上指出,先测序后筛库的研究策略可以在成本增加较低的前提下大幅度提高差异表达基因的研究效率。     

水牛Sox2基因原核表达载体的构建与诱导表达

水牛Sox2基因对体内胚胎的早期发育至关重要,它是重要的多能性干细胞(iPS细胞)标记基因之一,试验通过双酶切重组质粒pMD18-T-Sox2,将水牛Sox2基因定向克隆入原核载体pET-32a(+),成功构建了原核表达载体pET-Sox2,然后利用IPTG诱导,获得诱导表达蛋白,并经过SDS-PAGE电泳分析和Wes...     

鸭源致病性大肠杆菌O抗原与毒力基因检测及药敏试验

【目的】探究荣昌、大足和隆昌三地鸭大肠杆菌分离株的O抗原、毒力基因及耐药性。【方法】将2014年—2021年鸭病料中分离得到的107株细菌在无菌条件下接种于麦康凯培养基中划线进行培养纯化,通过16S rDNA基因扩增测序和生化试验进行细菌鉴定,采用PCR技术对O抗原和16种毒力基因进行检测,采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验。【结果】107株分离株鉴定为大肠杆菌;O抗原鉴定试验鉴定出9种O抗原,其中优势抗原为O78(37.00%)、O7(25.00%),O121和O145(均为15.00%),并检测到5株O78+O145和O7+O145融合株;共检测出11种毒力因子,其中强致病性毒力基因有Tsh基因(检出率为25.23%)、fyuA基因(检出率为31.78%)、estB基因(检出率为31.78%)、Vat基因(检出率为2.80%)、iucA基因(检出率为44.56%)。3种毒力基因ompA、yijP和ibeB的携带率最高,分别为100.00%、96.26%和85.98%;药敏试验结果表明分离株对氨基糖苷类药物、米诺环素和多黏菌素最为敏感,对大环内酯类药物和克林霉素耐药,分...     

猪肥胖基因(Ob)及其表达产物的研究进展

肥胖基因(Obese,Ob)于1950年首次在小鼠体内被发现,为常染色体隐性遗传。Zhang Y等人通过定位克隆技术从C57BL/6J(B6)突变系小鼠体内获得小鼠Ob基因cDNA的完整序列,从而掀起了Ob基因的研究高潮。肥胖基因的产物——瘦蛋白(Lep—     

猪囊尾蚴抗原基因Ts11的克隆及其在大肠杆菌的表达

PCR扩增重组噬菌体λTs11克隆的cDNA片段,与pUC18连接,得到的重组子用以测序,并进行同源性比较分析,将该片段克隆到原核表达载体pGEX-1λT中,免疫印迹筛选得到能正确表达该片段的重组子,制备该和理组子在大肠杆菌中的表达产物,进行浓度梯度SDS-PAGE和West-ern blotting分析,结果表明Ts11 cDNA片段为522 ,编码含139个氨基酸残基的多肽,在Gen-Bank和EMBL数据库均未发现同源序列,重组质粒在大肠杆菌中表达的融合蛋白分子量为41KD,能与免抗猪囊尾蚴囊液血清产生很强的免疫反应,这些结果证实分离到一个新的编码具有较强免疫原性猪囊尾缦抗原的 DNA克隆..λλ     

基因芯片技术检测细菌耐药性

1　基本概念生物芯片 (Biochip)是指将大量的生物分子探针以大规模阵列形式排布在很小的载玻片、尼龙网等载体上 ,通过与标记的样品进行杂交 ,检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。依据生物分子探针的不同 ,生物芯片可分为很多种类 ,包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片。目前研究最成功的且形成一定商业市场的是 DNA芯片 (DNAchip或DNA Microarry) ,又称为基因芯片 (Gene chip) ,即将无数预先设计好的寡核苷酸、c DNA、基因组 (Ge-nomic) DNA在芯片上做成点阵 ,与样品中同源核酸分子杂交。包括两种模式 :一是…     

水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定区片段基因在大肠杆菌中的表达

用RT-PCR的方法扩增水泡性口炎病毒G蛋白抗原决定基部分基因片段，构建克隆质粒pMD18-T-G660和表达质粒pET-28a-G660，转化宿主菌BL21（DE3），经IPTG诱导后，得到高效表达，表达蛋白质的相对分子质量为30000，占总蛋白的20．745％。     

气肿疽梭菌主要抗原及毒力因子的研究进展

气肿疽梭菌是一种严格厌氧的有芽孢的杆菌,可引起常见反刍家畜组织毒性缺氧,严重可致死,常为畜牧养殖业带来巨大的经济损失。气肿疽对反刍动物的影响存在已久,但其确切发病机制和相关毒力因子的作用仍未能被完全解读。随着研究的深入,已发现气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子在气肿疽发病过程中起着重要的作用。本文主要对气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子(细胞毒素A、鞭毛蛋白、神经氨酸酶和透明质酸酶)的相关研究进行总结概述,期望能为日后气肿疽检测方法和新型疫苗的研究提供参考。