雪菊对肝癌和肺癌细胞体外抗肿瘤作用研究

[目的]研究雪菊不同提取物对体外培养肿瘤细胞的抑制作用。[方法]体外培养人肝癌细胞(7404)及人非小细胞肺癌细胞(A549),用不同浓度的雪菊总黄酮纯化物、粗提物及总多糖分别对细胞作用后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞的凋亡率。[结果]通过MTT的方法得出雪菊不同提取物对7404和A549均有抑制作用,并呈现出浓度和时间的依赖性。流式细胞仪检测总黄酮纯化物能增强7404和A549细胞的凋亡率。[结论]雪菊不同提取物对2种癌细胞的增殖有明显抑制作用,其作用机制可能与增强细胞凋亡有关。     

抗氧化剂对牛卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用及凋亡机制的初步研究

研究抗氧化剂对血清饥饿诱导体细胞凋亡的抑制作用,并初步研究凋亡机制.体细胞为牛卵巢颗粒细胞,以AnnexinV/FITC法染色,流式细胞仪检测凋亡.在10％ FCS和0.5％FCS血清浓度下,第5代细胞在添加抗氧化剂维生素E、硒和谷胱苷肽后培养2d,检测细胞凋亡率.结果显示:添加有维生素E、硒和谷胺酰胺的10％ FCS培养的牛卵巢颗粒细胞凋亡率较对照组低,但差异不显著(P＞0.05).在0.5％ FCS饥饿诱导处理的颗粒细胞试验组,对照组的细胞凋亡率显著高于维生素E、硒和谷胺酰胺试验组(P＜0.05).培养液中添加z - VAD - fmk能够显著降低0.5％FCS试验组的细胞凋亡率(P＜0.05).说明在培养过程中添加抗氧化剂能有效抑制因血清饥饿诱导而产生的牛颗粒细胞凋亡,血清饥饿诱导细胞产生凋亡的过程包括caspase的激活.     

槲皮素对BEL-7402细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨槲皮素对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]体外培养BEL-7402细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率;光镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果]槲皮素对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度明显降低。经槲皮素作用6、12h后,流式细胞术检测到细胞凋亡率显著增加。[结论]槲皮素对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肝癌细胞凋亡。     

亚硒酸钠对大鼠肝癌细胞抑制作用的体外试验

将不同质量浓度 (0 3、 0 5、 0 6、 0 8、 1 0、 1 2、 1 5和 2 0 μg·mL-1)的亚硒酸钠加入大鼠的肝癌细胞 (RH 35 )和正常肝细胞 (BRL)的体外培养液中 ,分别在不同时间 (2 4、 4 8、 72和 96h ;2 4、 5 6和 96h)检测肝癌细胞和正常肝细胞的活性、增殖能力、生长曲线等指标。结果表明 ,随着浓度和时间增加 ,亚硒酸钠对肝癌细胞的生长抑制作用逐渐增强 ;随时间的延长 ,亚硒酸钠对正常肝细胞的生长呈现一定的抑制作用 ,但浓度变化对正常肝细胞生长抑制的作用不明显。     

花椒提取物对人胃癌细胞增殖及凋亡作用的研究

[目的]观察花椒提取物影响人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的作用。[方法]体外培养胃癌SGC-7901细胞,并用M1T法检测花椒提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用;用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]花椒提取物能显著地抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,并且具有浓度、时间依赖性,且细胞有明显凋亡特征性改变。[结论]花椒提取物具有抗肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡的作用,有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。     

昆仑雪菊对结肠癌细胞株体外抗肿瘤作用研究

[目的]探讨昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对人结肠癌细胞株(HCT116细胞、CACO-2细胞)增殖的抑制作用.[方法]体外培养结肠癌细胞,采用不同浓度昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对其进行干预,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞凋亡率.[结果] MTT法检测昆仑雪菊中总黄酮粗提取物、纯化物及总多糖对结肠癌细胞株的抑制作用具有浓度和时间依赖性;流式细胞仪检测昆仑雪菊总黄酮纯化物能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关.[结论]昆仑雪菊总黄酮纯化物抗肿瘤活性优于总黄酮粗提物及总多糖,且对结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制可能与增强细胞凋亡有关.     

中药斑蝥注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药斑蝥注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用.试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药斑蝥混合液,HA滴度为0.第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度为4 log2.第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度为9 log2.第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度为0.结果表明,中药斑蝥注射液对鸡胚无毒性作用.中药斑蝥与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中增殖.     

维生素B 17对HepG2细胞体内外生长的影响

分别通过体外培养和体内接种试验,探讨维生素B-17对HepG2细胞体内外生长的影响。结果表明:体外试验中,当维生素B-17的添加量为1.3 g/L时,HepG2细胞生长抑制率仅为5.62%;当添加量为10.5 g/L时,抑制率增加到30.99%;当添加42 g/L时,抑制率达到56.30%。体内试验低质量浓度和中质量浓度组瘤块生长抑制均不明显,与对照组相比差异不显著(P>0.05);高质量浓度组对肿瘤生长抑制作用最好,与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明高质量浓度的维生素B-17对HepG2细胞体内外生长均有抑制作用。     

蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及其可能机制

通过研究蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制,为蜂王浆蛋白辅助治疗胃癌奠定实验基础。采用碱提酸沉法提取蜂王浆蛋白,并通过体外模拟消化实验得到蜂王浆蛋白体外消化产物,然后用不同质量浓度的蜂王浆蛋白体外消化物诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901,通过倒置显微镜观察其对胃癌细胞形态的影响,并通过集落形成实验检测诱导后胃癌细胞的集落形成能力;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对胃癌细胞增殖的抑制作用,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡,并通过蛋白质印迹法检测其诱导后胃癌细胞中p53和PARP-1蛋白的表达情况。结果表明:蜂王浆蛋白体外消化产物使胃癌细胞形态发生皱缩,细胞密度降低,集落形成能力降低(P0.05),对胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用。0.2 mg/mL体外消化产物经24 h和48 h培养后对胃癌细胞抑制率分别达到(57.58±3.48)%和(62.84±1.98)%(P0.05)。与空白对照组相比,蜂王浆蛋白体外消化产物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,S期细胞减少,从而引起细胞凋亡;且经蜂王浆蛋白体外消化产物诱导后,胃癌细胞中p53蛋白表达量增加(P0.05),PARP-1蛋白表达量减少(P0.05)。说明蜂王浆蛋白体外消化产物能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其发生凋亡,其机制可能与p53表达上调和PARP-1表达下调有关。     

红景天甙体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡研究

【目的】探讨红景天甙(Salidroside)体外诱导人肝癌QGY-7703细胞凋亡的作用及其可能的机制。【方法】以体外培养的人肝癌QGY-7703细胞作为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测红景天甙对QGY-7703细胞生长的抑制作用,采用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,分析红景天甙对QGY-7703细胞凋亡的诱导作用;采用Western blot免疫印迹法探讨红景天甙诱导QGY-7703细胞凋亡的可能机制。【结果】MTT比色法试验结果表明,0.01,0.1,1,10和100μg/mL红景天甙对QGY-7703细胞生长均有不同程度的抑制作用,细胞生长抑制率分别为13.2%,21.9%,31.4%,46.8%和60.9%,半数抑制质量浓度(IC50)为18.56μg/mL;用10μg/mL红景天甙处理QGY-7703细胞48 h,AO/EB荧光双染后,可观察到个别QGY-7703细胞呈现亮绿色或橘红色,表明细胞发生了凋亡;琼脂糖凝胶电泳结果显示,10μg/mL红景天甙作用QGY-7703细胞24,48和72 h均可导致细胞核内DNA产生有序断裂,形成DNA梯形带;流式细胞术试验结果表明,10μg/mL红景天甙的加入量为100和200μL时,QGY-7703细胞凋亡数分别为178和331个,相应的凋亡率分别为1.8%和3.5%,阴性对照组(10μg/mL红景天甙加入量为0μL)凋亡细胞数为105个,凋亡率仅为1.1%;Western blot免疫印迹分析结果表明,红景天甙下调了Bcl-2和PCNA蛋白的表达量,而使凋亡活化基因Bax与肿瘤抑制基因p53的蛋白表达量增高。【结论】红景天甙对体外培养的QGY-7703细胞具有明显的生长抑制作用和诱导凋亡作用,其诱导凋亡作用与Bcl-2家族成员、p53、Bax和PCNA基因调控有关。     

转化型人参皂苷抗MDV及诱导肿瘤细胞凋亡的作用初探

以转化型人参皂苷的8个组,按12.5μg·mL-1的剂量,在体外鸡胚成纤维细胞上进行抗MDV-RB1B强毒株空斑减数试验和诱导肝癌7402细胞株、大鼠脑胶质瘤细胞C6株细胞凋亡试验,用光学显微镜观察、琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA损伤。结果表明:转化型人参皂苷6、7号组,在感染阻断、增殖抑制、直接杀灭3种方式的抗MDV空斑减数率都达到阿昔洛韦(ACV)抗MDV空斑减数率的80%,转化型人参皂苷4、6号组对MDV-RB1B株的直接杀灭作用与ACV的杀灭作用相同;转化型人参皂苷8号组诱导肝癌7402株细胞48h后,有60%的瘤细胞凋亡,对大鼠脑胶质瘤C6株细胞也有诱导凋亡的作用。     

Adipose triglyceride lipase contributes to cancer-associated cachexia

Cachexia is a multifactorial wasting syndrome most common in patients with cancer that is characterized by the uncontrolled loss of adipose and muscle mass. We show that the inhibition of lipolysis through genetic ablation of adipose triglyceride lipase (Atgl) or hormone-sensitive lipase (Hsl) ameliorates certain features of cancer-associated cachexia (CAC). In wild-type C57BL/6 mice, the injection of Lewis lung carcinoma or B16 melanoma cells causes tumor growth, loss of white adipose tissue (WAT), and a marked reduction of gastrocnemius muscle. In contrast, Atgl-deficient mice with tumors resisted increased WAT lipolysis, myocyte apoptosis, and proteasomal muscle degradation and maintained normal adipose and gastrocnemius muscle mass. Hsl-deficient mice with tumors were also protected although to a lesser degree. Thus, functional lipolysis is essential in the pathogenesis of CAC. Pharmacological inhibition of metabolic lipases may help prevent cachexia.     

菲律宾蛤仔酶解多肽抗前列腺癌DU-145细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽抗人前列腺癌DU-145细胞增殖的活性。[方法]对菲律宾蛤仔内脏进行酶解,经超滤截取3 kD以下的多肽,应用MTT法、倒置显微镜观察和AO/EB染色等方法检测其体外抗DU-145细胞的活性。[结果]MTT法检测结果表明不同浓度的多肽对DU-145细胞有明显的生长抑制作用。通过倒置显微镜观察和AO/EB荧光双染观察到DU-145细胞出现细胞凋亡的形态学特征。[结论]菲律宾蛤仔3 kD以下的多肽具有抑制DU-145细胞生长,呈浓度和时间依赖性,并诱导细胞凋亡作用。     

超微形态学观察氯化三乙基锡抗体外培养大鼠C6脑胶质瘤增殖作用

目的探讨氯化三乙基锡（TETC）抗体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖作用及观察C6胶质瘤细胞超微形态学变化．方法采用四甲基偶氮唑盐（MTF）比色法检测0,0．5,1．0,2．0mol/L TETC作用C6细胞24,48h增殖率．采用透射电镜观察C6细胞超微形态学变化．结果0．5,1．0,2．0mol／L TETC在体外可抑制C6胶质瘤细胞的增殖,增殖率存在着剂量依赖和时间依赖下降关系．0．5,1．0,2．0mol／L TETC作用C6细胞48h后可见细胞收缩体积变小,胞浆浓缩,细胞核内染色质趋边凝集,排列于核膜内侧,细胞核浓缩碎裂凋亡坏死的超微结构变化．结论TETC可抑制体外培养C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能和凋亡坏死有关．     

HPLC法检测复合维生素片中叶酸和维生素B_(12)的含量

[目的]建立应用高效液相法测定复合维生素片中叶酸和维生素B12含量的方法。[方法]色谱柱用菲罗门lunaC18(4.6×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.028 mol/L磷酸氢二钠水溶液(用磷酸调pH到3.5)(21∶79),流速1.0 ml/min,检测波长为361 nm,进样量为20μl,柱温为25℃。[结果]维生素B12在6.65～66.50 ng范围内呈现良好的线性关系,回归方程是y=0.495 1x+1.342 8(R2=0.999 4,n=6),平均回收率为96.83%,RSD为0.82%(n=6)。叶酸在80～800 ng范围内呈现良好的线性关系,回归方程是y=0.021 1 x+0.661 1(R2=0.998 8,n=6),平均回收率为95.56%,RSD为1.54%(n=6)。[结论]高效液相色谱法灵敏度高,操作简便,重现性好,结果准确,可以用于复合维生素片中叶酸和维生素B12的含量测定。     

维拉帕米和三苯氧胺逆转卵巢癌细胞对阿霉素耐药性的实验研究

目的 了解维拉帕米和三苯氧胺体外逆转卵巢癌细胞阿霉素耐药性的效果及临床意义.方法 分别以阿霉素、维拉帕米和三苯氧胺作用于人卵巢癌亲本细胞SKOV3和阿霉素耐药细胞SKOV3/ADM后,采用MTI法检测药物对癌细胞的抑制作用,以细胞内阿霉素聚集量测定和流式细胞术检测凋亡.结果 维拉帕米和三苯氧胺能部分逆转耐药细胞对阿霉素的耐药性,且维拉帕米能显著增加耐药细胞内阿霉素的聚集量并促进其凋亡.结论 虽然维拉帕米和三苯氧胺能部分逆转耐药细胞对阿霉素的耐药性,但用于临床的意义不大.     

2株内生拮抗细菌对灰霉病菌的抑菌活性研究

采用对峙培养法检测了2株内生拮抗细菌对灰霉病菌菌丝生长的影响,并观察了其发酵液对灰霉病菌孢子萌发及病菌生长的影响,同时测定了其发酵液、细菌悬浮液以及高温处理的发酵液在离体黄瓜上对灰霉病菌生长的抑制作用。结果表明：2菌株能强烈抑制灰霉病菌生长,其发酵液也能明显抑制病菌孢子的萌发和生长,且发酵液高温处理后仍具有较高的抑菌活性。在离体黄瓜片上检测菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果表明,2菌株发酵液及其细菌悬浮液均能较好地抑制灰霉病菌生长。     

三氧化二砷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子表达的影响

目的了解三氧化二砷（As2O3）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,MTT法测定细胞生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting方法检测VEGF的表达。结果不同浓度的As2O3处理HeLa细胞不同时间后,能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）。As2O3还下调VEGF的表达。结论 As2O3可抑制体外人宫颈癌HeLa细胞增殖及VEGF的表达。