大肠杆菌高密度发酵表达rBovIEAM的发酵条件研究

<正>大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白表达系统[1-2],具有遗传背景清楚、代谢调控技术成熟、目的基因表达水平高、培养成本低、生长周期短等特点,在重组蛋白质外源基因表达系统中占据主导地位[3-4]。采用高密度发酵技术能有效提高重组大肠杆菌的菌体密度,增加重组蛋白的表达量,是非常经济高效的生产工艺。rBovIEAM是由牛白细胞介素-2(IL-2)及牛分支杆菌ESAT-6、Ag85B和Mtb8.4这4个基因顺序     

一株酿酒酵母固体发酵条件的研究

在筛选出的优化发酵培养基基础上,进行发酵条件的优化筛选。确定最佳发酵条件为装量30g/500mL广口瓶,料水比1∶1,接种量1%,起始温度30℃,起始pH自然,发酵周期48h,在此条件下发酵最高菌数为6.85×108CFU/g。     

酿酒酵母培养基及发酵条件的优化研究

为提高酿酒酵母(S.cerevisiae)发酵活菌数,通过单因素试验和正交优化试验对酿酒酵母的培养基和发酵条件进行优化。确定最佳发酵培养基为葡萄糖12.0%、红砂糖2.0%、蛋白胨3.0%、酵母粉1.0%、KH2PO4 0.1%、K2HPO4 1.0%、Mg SO4·7H2O 0.1%、NaCl 0.1%。最佳发酵条件为初始p H值6.0,装液量75 ml/500 ml,接种量5.0%,振荡速率180 r/min,发酵温度30℃。试验结果表明,优化后酿酒酵母活菌数有了明显的提高,达到5.8×108cfu/ml,比优化前提高了1.9倍。     

猪大肠埃希菌高密度发酵条件的试验研究

利用5 L发酵罐分批培养O2、O8、O135、O138、O139、O141血清型组成的猪大肠埃希菌菌液,通过活菌计数的方法,对大肠埃希菌在发酵过程中温度、pH、通气量、葡萄糖加量等基本条件进行试验研究.结果表明,在用发酵罐进行大肠埃希菌多个血清型的高密度发酵时,利用常规的干粉培养基,将培养温度控制在37℃±0.5℃,pH控制在7.0～7.2,逐渐增大通气量,根据pH的变化补加40%的葡萄耱,可以使细菌的培养菌数(cfu)达到150亿/mL以上.     

大肠杆菌高密度发酵研究

高密度发酵是现代发酵工程的一项新技术，能显著提高大肠杆菌菌体和基因工程产品的产量。我们就影响大肠杆菌高密度发酵的因素及其控制、发酵方式的选择和发酵终点判断及异常发酵处理进行了简要讨论，并对大肠杆菌的高密度发酵进行了展望。     

高密度发酵工艺的研究

随着基因重组技术的不断发展,越来越多的外源基因得以在微生物中表达,以便大量快捷地获得外源基因产物或改变微生物的代谢特性。与其它表达系统相比,高密度发酵表达系统因具有易培养、遗传学背景清楚、表达水平高、培养周期短等特点,成为目前应用最为广泛的表达系统。工业生产发酵的基本目标是以最低的成本获得最高的细胞或其产物收益,因此大规模高密度培养微生物的技术和工艺变得越来越重要。高密度培养涉及到培养基组成、培养条件等诸多方面。作者在此就大肠杆菌高密度培养的影响因素、培养方法及基因工程技术。就基因工程菌高密度发酵工艺的几个主要影响因素,包括重组菌构建、培养条件、生长抑制因子以及它们的控制技术等因素进行了研究;分析了这些因素对目的蛋白表达的影响;介绍了基因工程菌高密度发酵领域的一些研究进展。在大肠杆菌高密度培养中的最新应用进行简要综述。     

酿酒酵母菌固态发酵工艺研究

研究在单因素优化试验的基础上,采用正交试验对酿酒酵母菌固态发酵工艺进行研究,主要包括发酵时间、接种量、料水比、碳源、氮源和无机盐等因素,最终确定酿酒酵母菌的固态发酵工艺。发酵条件:自然pH条件下,发酵温度30℃、发酵时间72 h、接种量7.00%及料水比1∶1.25。培养基成分:麸皮与甘油比9∶1、尿素0.50%及磷酸二氢钾0.20%。依照此工艺进行发酵,酿酒酵母菌活菌数最高可达8.60×1亿/g个。     

试析高密度增殖的植物乳杆菌发酵条件

现如今,我国在微生态制剂的研究和开发中已经取得了明显的成效。为了研究植物乳杆菌的增值发酵的具体条件,本文主要通过实验的方式来进行研究。首先是采用一定的方法来对植物乳杆菌发酵的培养基进行改进和优化,通常情况下都是采用单因素的方式。然后,对培养工艺进行深入探讨。通过此次试验,可以证明,在蔗糖、酵母膏或者是蛋白胨等浓度和数量达到相应标准的时候,可以得到大量的植物乳杆菌。说明,这种方式具有一定的现实意义。可以得到广泛地推广和应用。     

大肠杆菌高密度发酵研究发展

大肠杆菌被广泛地用于基因工程菌的构建 ,以获得大量的外源基因产物 ,利用基因重组技术构建的基因工程菌的发酵工艺不同于传统的发酵工艺。生物工程菌发酵的目的是希望能获得大量的外源基因产物 ,尽可能减少宿主细胞本身蛋白的污染。外源基因的高水平表达不仅涉及宿主 ,载体和目的基因三者之间的相互关系 ,而且与其所处环境条件息息相关。因此仅按传统的发酵工艺生产生物制品是远远不够的 ,需要对影响外源基因表达的因素进行分析 ,探索出适于外源基因高效表达的发酵工艺。高密度、高产率和高浓度培养是近几年发酵工业的目标和方向[1] 。近几…     

地衣芽孢杆菌M109高密度发酵条件的优化

试验旨在筛选一株地衣芽孢杆菌M109(Bacillus licheniformis M109)进行培养基和发酵条件的优化。采用单因素试验方法筛选出最佳碳源和氮源的培养基,并利用正交试验方法确定其最佳的碳氮比。为了继续提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平,研究其在发酵过程中的生长曲线、pH和溶氧(DO)水平的变化曲线,通过对发酵过程中生长参数的测定,优化了地衣芽孢杆菌M109最佳的接种量和最适pH。结果发现,溶氧限制是地衣芽孢杆菌M109生长的关键因素;在限定通风量的条件下,通过调节搅拌转速的方法来提高培养基中的溶氧水平,提高发酵密度;通过流加培养基的方法也能提高地衣芽孢杆菌M109的发酵水平。因此,通过对培养基和发酵条件的优化,使地衣芽孢杆菌M109的发酵水平由最初的1.0×10⁹ CFU/mL提高到1.2×10¹⁰ CFU/mL,芽孢形成率为88%。     

牛粪有氧发酵的处理方法

本文介绍了牛粪有氧发酵的方式,并对各种发酵方式的特点,包括对其优缺点进行分析。对照牛粪发酵的参数,重点介绍了牛粪发酵的控制与调节,主要包括水分、温度、碳氮比、通气等地调节以及发酵产物的质量评判标准。     

酿酒酵母培养条件优化

采用单因素试验及响应面试验对酿酒酵母培养条件进行优化。先对酿酒酵母菌体干质量培养的重要条件进行单因素试验,筛选培养温度、培养时间、培养基初始pH、菌龄4个重要影响因素,根据Box-Behnken设计原理设计响应面试验。结果表明,建立以酵母菌体干质量为响应值的多元二次回归方程,分析模型得出酿酒酵母最优培养条件为：培养温度23.5℃、培养时间71.5 h、培养基初始pH=6.5、菌龄12 h。在最优培养条件下酵母菌体干质量达到（29.70±0.04）g/L,较优化前提高了33.12%。     

利用家畜粪便有氧发酵生产有机肥的研究

畜禽场粪便污染已日益严重，如何利用这些废弃物资源已成为当务之急。本研究以牛粪和鸡粪为主要原料，经过接种EM活性菌在有氧条件下发酵腐熟，以缩短发酵时间为目的，分别对原料的含水量、原料翻堆次数进行了测定，结果表明：原料含水量在60％～65％，翻堆时间以45min／次为宜。发酵的腐熟度指标变化：（1）原料体积和重量减少1／3～1／2；（2）质感松软，颜色为暗棕黑色，无不良气味；（3）微细颗粒小于0．25mm，符合有机肥生产标准；（4）发酵自然温度稳定下降。     

发酵桔皮对酿酒酵母生长性能的影响研究

研究旨在通过添加新型生长刺激剂促进酵母生长,提升酵母的生长效率。通过向酵母培养基中添加发酵桔皮,探究发酵桔皮对酵母生长的影响,利用单因素试验、正交试验、响应面分析等方法对添加发酵桔皮的酵母培养基进行优化。结果表明：添加发酵桔皮后的优化培养基为：葡萄糖100.756 g/L、蛋白胨8 g/L、酵母浸膏11.906 g/L、发酵桔皮（干物质含量）1.906 g/L、无水硫酸镁2 g/L、尿素2 g/L、磷酸二氢钾5 g/L。培养基优化后酵母生物量达到最大,比未添加发酵桔皮的培养基提高了1.3倍。发酵桔皮可以作为酵母生长刺激剂提高酵母活菌浓度,缩短酵母进入对数生长期的时间,从而促进酵母饲料工业降本增效。     

利用家畜粪便有氧发酵生产有机肥的研究

畜禽场粪便污染已日益严重,如何利用这些废弃物资源已成为当务之急.本研究以牛粪和鸡粪为主要原料,经过接种EM活性菌在有氧条件下发酵腐熟,以缩短发酵时间为目的,分别对原料的含水量、原料翻堆次数进行了测定,结果表明:原料含水量在60%～65%,翻堆时间以45min/次为宜.发酵的腐熟度指标变化:(1)原料体积和重量减少1/3～1/2;(2)质感松软,颜色为暗棕黑色,无不良气味;(3)微细颗粒小于0.25mm,符合有机肥生产标准;(4)发酵自然温度稳定下降.     

酿酒酵母固态发酵白酒糟生产蛋白饲料的研究

以廉价的白酒糟为主要基质,接种酿酒酵母,开展酵母高密度固体发酵的研究。最终确定了在实验室条件下以白酒糟为基质进行酵母高密度固体发酵的工艺流程为:250 ml三角瓶装入干白酒糟10 g,并补加混合营养液2 ml(以干糟质量的8%添加糖蜜,以0.5 gN/kg干糟的量添加尿素),摇匀分散,加入干糟质量4%的复合酶制剂,调整酒糟的含水量为45%~50%,按0.7亿/g干糟接种后于30℃恒温箱中发酵培养72 h,酵母总数约30亿/g干糟,烘干粉碎即可制得酵母蛋白饲料。     

猪致病性大肠杆菌高密度发酵工艺的研究

为了提高猪致病性大肠杆菌(O139血清型)的生产量,缩短生产周期,降低生产成本,首先在10L发酵罐中对影响大肠杆菌发酵的pH值、相对溶氧量、生物量、氨基氮、还原糖、无机磷测定等方面进行了单因子试验优化。研究表明,大肠杆菌在37.5℃,pH值为7.5,4%的接种量,溶氧量为50%,200r/min的转速以及15g/L的葡萄糖添加量,20g/L的氨基氮添加量,100mmol/L的无机盐添加量,培养18h后可以得到理想的培养效果。利用此优化的条件,结合兽医药品GMP原则,在200L发酵罐中进行了发酵试验,结果在发酵结束后菌液的OD600可以达到34.51,相当于菌体浓度为12.94g/L,从而得到了大肠杆菌工业化生产工艺,为大肠杆菌疫苗大规模生产奠定了基础。     

猪肺炎支原体高密度发酵工艺的研究

为提高猪肺炎支原体发酵培养的滴度,在500L发酵罐基础上,对猪肺炎支原体J株的发酵工艺进行了一系列优化试验,各项发酵培养条件经优化后,发酵支原体的滴度得到了明显提高,发酵滴度可达到1×109CCU/ml以上,本研究为提供高效、安全和稳定的猪肺炎支原体疫苗产品奠定基础.     

鸭沙门菌高密度发酵工艺的研究

为了提高鸭沙门菌的生产量,简化生产流程降,低生产成本。以GMP为生产指导原则,采用10L发酵罐对影响鸭印第安纳沙门菌高密度发酵的温度、pH值、相对溶氧量、接种量等7个方面进行单因子优化试验。研究结果显示,鸭印第安纳沙门菌在以4%接种量,培养温度为38℃,维持培养基的pH值为7.5,保持溶氧量为40%,150rpm/min的转速和连续补加葡萄糖的方式培养20h后,发酵菌数可达到53.7亿CFU/ml,本研究结果为沙门菌疫苗大规模发酵生产奠定了基础。